三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性

目的:探讨三七总皂甙(tPNS)对人内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的词控机制。方法:以基因重组技术构建人eNOS基因启动子区(-1--1600bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc,采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS—Luc、空载体pGL2-Basic和β-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-β共转染NIH3T3细胞,用细菌脂多糖(LPS)、tPNS和转移生长因子β1(TGFβ1)等因子分别刺激转染后的NIH3T3细胞,检测并比较荧光素酶／β-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、tPNS和TGFβ1对人eNOS基因启动子转录活性的影响。结果：(1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在NIH3T3细胞中有效表达;(3)在LPS刺激下．人eNOS启动子的转录活性降低,而在tPNS和TGFβ1刺激下,其启动子的转录活性增强,其中,TGFβ1较tPNS所致的转录活性更强。结论：正确构建了人eNOS基因启动子区(-1-1600bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS—Luc;tPNS在NIH3T3细胞中增强人eNOS基因启动子的转录活性。     

定心方对大鼠缺氧及正常心肌细胞内[Ca~(2+)]_i、细胞膜电位和线粒体膜电位的影响

目的 :探讨定心方抗心律失常的分子机制。方法 :大鼠击晕后取心脏 ,用链酶蛋白酶消化分离单个心肌细胞 ,再用不同荧光染料分别标记细胞 ,在激光共聚焦显微镜上测定定心方血清对心肌细胞内 [Ca2 + ]i、细胞膜电位和线粒体膜电位的影响。结果 :缺氧使心肌细胞内钙浓度和线粒体膜电位升高 ,而使细胞膜电位降低 ,定心方血清降低了正常和缺氧心肌细胞内 [Ca2 + ]i,改善了缺氧引起的膜电位降低 ,使缺氧状态下细胞线粒体膜电位保持在基线水平。结论 :定心方使细胞内 [Ca2 + ]i 降低 ,维持细胞膜电位和线粒体膜电位接近于正常水平     

BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达

目的:利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体(proBDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞(rMSC)高效表达。方法:采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移载体pAdTrack-proBDNF和pAdTrack-BDNF,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd-proBDNF和pAd-BDNF;转染293细胞,包装成重组病毒颗粒;将重组病毒上清感染rMSC,用荧光显微镜下观察和Western-blotting鉴定重组病毒在rMSC表达;用Ad-proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化;用Ad-proBDNF和Ad-BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内,两周后荧光显微镜下直接观察。结果:成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能,体内移植实验表明Ad-proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论:重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率,带有报告基因EGFP的Ad-proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。     

补阳还五汤对动脉粥样硬化小鼠诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:研究补阳还五汤对动脉粥样硬化小鼠一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶表达的影响。方法:喂饲高脂饲料复制小鼠动脉粥样硬化模型;Griess法检测血浆中NO水平;蛋白质免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶的表达。结果:动脉粥样硬化小鼠9周开始出现一氧化氮显著增加,补阳还五汤显著抑制一氧化氮水平,并降低诱导型一氧化氮合酶的表达。结论:补阳还五汤可能通过抑制诱导型一氧化氮合酶的表达降低动脉粥样硬化小鼠一氧化氮水平,防治动脉粥样硬化。     

南方地区心律失常病证特点与中医药防治的临床研究

目的：我国南方地区快速性心律失常的病证特点是痰、热、瘀、虚并见，而缓慢性心律失常的病证特点是虚、瘀、痰相兼，据此分别制定清热祛瘀化痰和温阳散瘀的治疗原则。方法：分别以中药复方定心汤与宁心汤治疗快速性心律失常261例、缓慢性心律失常22例，并与相应对照组比较。结果：以定心汤加味治疗快速性心律失常261例，总有效率96．55％，与对照组78．46％比较差异有显著性（P＜0．01）；以宁心汤治疗缓慢性心律失常22例，总有效率81．82％，与对照组47．62％比较差异有显著性（P＜0．01）。结论：定心汤与宁心汤疗效均优于对照组，并能较好地改善临床症状。     

流式细胞术在分子中医学中的应用

分子中医学是在传统中医药理论指导下，在分子水平研究疾病的发生机理及中医药防病治病原理的科学．流式细胞术是分子中医学的重要研究方法，在证候、脏腑、气血、中医药作用机理等方面已经有了一些初步的探索．     

慢性应激肝郁模型大鼠蓝斑CRF、c-fos的表达及逍遥散的干预作用

目的观察慢性应激状态下大鼠一般状况,血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)浓度,蓝斑(LC)中促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、即刻早期基因c-fos的表达,以及逍遥散对其的干预效应。方法将18只SD健康雄性大鼠随机分为正常对照、模型、逍遥散治疗组,每组6只。采用束缚的方法造模,观察大鼠行为、饮食、排便的变化;造模21d后取出蓝斑,用ELISA法检测血清中CRH浓度,Real-timePCR检测蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA的表达。结果模型组大鼠行为、排便、饮食出现明显异常;与正常对照组比较,模型组大鼠血清CRH浓度升高,蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA表达均上调(P<0.01);与模型组比较,逍遥散组大鼠血清CRH浓度下降,蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA表达下调(P<0.01);逍遥散组较对照组CRH浓度升高、CRFmRNA和c-fosmRNA表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论神经递质CRF介导了慢性束缚应激中LC的激活,转录因子c-fos亦参与了其调控,而逍遥散则可以有效地进行干预,下调其过表达。     

转化中医学:一种沟通中医基础与临床的研究策略

中医基础研究与临床脱节近年来日趋严重,转化医学是沟通实验室基础研究和临床医学之间的桥梁.将转化医学与中医学结合,建立转化中医学的研究策略,以中医基础理论为指导,强调以患者为中心,从临床中来再转化回临床中去,是一种人本主义的医学研究模式.这需要建立转化中医学团队和中心,对中医经典、经方及病证结合工作进行转化医学研究,深化转化中医学研究工作.     

肿瘤干细胞及其niche的中医属性及发生病机

认为肿瘤干细胞（CSCs）是深藏于癌毒微环境中癌毒产生之根本原因,是肿瘤复发、转移的根源。有别于正常干细胞niche封藏、守位之特征,CSCs居于正气亏虚肿瘤微环境的至虚之处,容留CSCs的niche以虚为本,兼具瘀与痰之特征。CSCs属于离位之相火妄动,元气益虚而毒根愈固。提出通过扶正来干预CSCs及其赖以生存之niche,从根本上改善微环境之虚与瘀,可能是拔除肿瘤毒根的有效策略。<     

定心方对缺血再灌注心律失常大鼠心肌细胞凋亡的影响

定心方(Dingxin Recipe,DXR)是我校附属南方医院心律失常专科经验方,临床研究表明其对多种心律失常有显著疗效[1]。心肌缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury,IRI)后发生的严重心律失常是阻碍缺血心肌从再灌注疗法中获得最佳疗效的主要原因,心肌细胞的凋亡参与了心肌IRI