脑心通调控NLRP3/Caspase-1通路抑制脂多糖诱导的BV2细胞焦亡

目的:探索脑心通醇提物对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞BV2焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)体外诱导BV2细胞的同时,加入不同质量浓度脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,分别采用MTS法检测细胞活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NLRP3的mRNA水平;免疫荧光法检测NLRP3蛋白表达的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3/Caspase-1通路关键蛋白表达。结果:与空白组比较,LPS(1 mg·L^-1)能明显降低BV2细胞活性,显著升高IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.01),且可提升NLRP3蛋白表达水平以及Caspase-1剪切体和前体蛋白的比值(Caspase-1 p20/Caspase-1)。与LPS组比较,脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,逆转了LPS导致的细胞活性降低(P<0.01),50 mg·L^-1脑心通醇提物可显著降低IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),显著降低LPS诱导的NLRP3的高表达以及Caspase-1 p20/Caspase-1(P<0.01)。结论:脑心通能明显抑制LPS诱导的小胶质细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/Caspase-1通路密切相关。     

高压氧对缺血缺氧性脑损伤幼鼠海马超微结构及主动回避反应的影响

目的 观察高压氧治疗对新生大鼠缺血缺氧损伤后脑超微结构和在青春期对主动回避反应的影响.方法 出生7 d的Wistar大鼠制作缺血缺氧性脑损伤模型,采用随机数字表法分为高压氧治疗组和未治疗组,并设正常对照组,采用穿梭箱主动回避行为模型进行主动回避反应(AAR)及被动回避反应(PAR)测试,并观察各组幼鼠海马超微结构.结果 高压氧治疗1次后24 h的幼鼠脑重量较缺血缺氧后不治疗组脑重明显轻.缺氧缺血后海马超微结构变化明显,经高压氧治疗后,海马神经元和突触无明显异常.高压氧治疗组无论是主动回避反应还是被动回避反应均比未治疗组成功率高,两组比较AAR及PAR都有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01).结论 高压氧治疗可减轻缺氧所致脑损伤,有利于受损幼鼠认知能力的恢复.     

ABC和BA法的染色敏感性及其在病毒抗原定位中的应用

生物素—亲和素系统(Biotin Avidin System,BAS)是70年代发展起来的新颖试剂,国外应用比较广泛,国内近年来有应用亲和素—生物素酶复合物(Avidin—Biotin—Peroxidase Complex,ABC)方法的报导,但制剂多是成套进口。我们用自制ABC和酶标亲和素试剂并以生物素     

西地兰佐治小儿重症肺炎386例报告

我科自1975年8月至1984年2月共收治小儿肺炎1，632例，重症肺炎占731例，其中合并有心功能不全，用西地兰佐治386例（52.8％），取得满意效果。现报告如下。     

锌影响鼠脑发育及金属硫蛋白表达的细胞分析

方法：建立低锌、常锌及高锌动物（生后４周及７周）模型，用流式细胞分析技术，对幼鼠脑神经细胞的增殖周期、ＤＮＡ和总蛋白的含量及金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌ－ｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）的表达进行了测定。结果：低锌组及高锌组与常锌组相比，细胞增殖周期、ＤＮＡ和总蛋白含量及ＭＴ表达有显著差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论：锌明显影响幼鼠脑发育，且与ＭＴ表达密切相关     

胆红素脑病与神经细胞凋亡

胆红素脑病是新生儿黄疸的极重症表现，可留下神经系统后遗症甚至引起死亡，但胆红素神经毒性的发病机制迄今尚未完全阐明。既往研究表明，胆红素通过抑制神经元突触传递过程，蛋白激酶的磷酸化，神经递质释放影响神经元的功能。近年来随着分子生物学研究的不断深入，发现胆红素可引起细胞内Ca^2 超载，影响线粒体呼吸功能，介导胆红素神经毒性，导致神经细胞凋亡。     

三黄消渴胶囊治疗老年糖尿病30例观察

1　一般资料1 1　分组 :本文病人 60例均来源于 1 999年 6月至2 0 0 0年 6月就诊于山东中医药大学第四附属医院门诊及病房的病人。其中门诊 2 8人 ,病房 3 2人。随机分组 ,三黄消渴胶囊组和降糖甲片组各 3 0例。全部病例均符合老年糖尿病诊断标准及中医辨证标准。1 2　性别、年龄、病程的分布 :治疗组男性 1 8例 ,占60 % ,女性 1 2例 ,占 4 0 % ;对照组男性 1 9例 ,占63 3 % ,女性 1 1例 ,占 3 6 7%。治疗组年龄最大者 78岁 ,最小者 60岁 ;平均年龄 68岁 ;对照组年龄最大者76岁 ,最小者 60岁 ,平均年龄 66岁。治疗组病程最短者 2年 ,最长…     

人粘膜血管定居因子／GST融合基因表达载体的构建与表达

目的 构建hMAdCAM-1/GST融合基因表达载体并进行表达。方法 采用PCR技术扩增hMAdCAM-1cDNA5‘端615bp的基因片段,将其插入pGEM-T质国。经全自动序列分析仪测序证实后,再亚克隆至表达载体pGEX-2T,转化大肠杆攻DH5a。结果 SDS－PAGE检测显示,表达出相对分子量52000u的融合蛋白,占菌体总蛋白的31％左右。Westerm blot分析表明,表达蛋白能与抗hMAdCAM-1多抗特异性结合。结论 hMAdCAM-1/GST融合基因表达载体的构建和表达,为深入研究MAdCAM-1提供了材料。     

人整合素分子α4亚基片段的克隆和表达

目的克隆并表达人整合素分子α4亚基1.2kbcDNA片段。方法从HL-60细胞系中提取总RNA,以RT-PCR法扩增人整合素分子α4亚基片段1.2kbcDNA(1753～2934bp),并将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,用IPTG诱导表达。结果克隆了α4亚基1.2kbcDNA片段。序列分析表明,其所编码的氨基酸序列与文献相比较只有一处错义突变(Arg→Gln),经分析该突变对抗原性影响不大。将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,经IPTG诱导在大肠杆菌中获得高效表达。结论获得了α4亚基1.2kbcDNA片段及其原核表达产物,对研究α4整合素的功能具有重要的意义。     

基于NLRP3通路研究青梅复方对急性痛风性关节炎的干预作用及机制

目的 明确青梅复方对急性痛风性关节炎（AGA）大鼠的治疗作用，初步阐明其作用机制。方法 将40只雄性SD大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg ^-1）、青梅复方低、高剂量组（200、400 mg·kg^-1），每组8只。模型组及给药组踝关节注射50 g·L^-1尿酸钠盐（MSU）溶液制备AGA大鼠模型，分别于造模前及造模后6、24、48 h测量大鼠踝关节肿胀指数，采用苏木素-伊红（HE）染色观察AGA大鼠关节组织病理变化，免疫组化检测大鼠关节组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠关节组织中NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路及关键蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠踝关节肿胀指数、滑膜增生及炎性浸润程度显著升高，且踝关节IL-1β、TNF-α、NLRP3蛋白表达及胱天蛋白酶-1（Caspase-1）的剪切体和前体蛋白的比值（Caspase-1 p20/Caspase-1）显著上调（P<0.01）。与模型组比较，青梅复方能够明显降低AGA大鼠踝关节肿胀指数，尤其以青梅复方低剂量效果显著（P<0.01）；同时青梅复方不仅抑制滑膜增生及炎性浸润（P<0.01），且显著下调关节组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3蛋白水平及Caspase-1 p20/Caspase-1（P<0.01）。结论 青梅复方能够显著缓解AGA的关节肿胀及炎症浸润，其机制可能与抑制NLRP3信号通路有关。