2005年～2006年我院口服降血糖药物应用分析

目的分析我院口服降血糖药物的临床应用情况及趋势。方法对2005~2006年我院各类口服降血糖药物的用药频度(DDDs)和金额及单品种DDDs前10位排序进行统计分析。结果口服降血糖药物用药金额和DDDs增长明显,DDDs排序在前的是价廉和常用的药物,其中双胍类和促胰岛素分泌剂为首选,二甲双胍、瑞格列奈用量大,疗效确切、安全、费用较低、用药方便及依从性好。结论我院降血糖药物的应用基本合理,且新型降血糖药物已经被患者接受。     

LDLR启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制

 摘 要：目的 探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)在同型半胱氨酸(Hcy)致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用机制。方法 原代培养VSMCs, 用50、100、200 、500 μmol/L Hcy干预72 h; MTT法观察VSMCs增殖的活性, ELSIA法和同位素法分别检测VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性; 实时定量PCR和巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测LDLR的表达和启动子区DNA甲基化的状态。结果 随着Hcy浓度的增加, VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性明显增加, 而VSMCs增殖活性下降, 同时LDLR mRNA表达增高, 且LDLR 基因启动子区呈低甲基化状态, 与对照组比较有显著性差异(P<0.05, P<0.01)。结论 LDLR基因启动子区DNA低甲基化致LDLR表达增高可能是Hcy引起VSMCs损伤的重要机制之一。     

同型半胱氨酸对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中ABCA1、ACAT1表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中三磷酸腺苷-结合转运子A1(ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT1)表达的影响。方法将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,并分别用50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12(Vit B12)干预72 h,并设对照组(不加入Hcy)。采用油红O染色检测泡沫细胞的形成。采用酶终点法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量的变化,观察Hcy对泡沫细胞CE流出的影响。采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定ABCA1、ACAT1 mRNA表达;免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白表达。结果油红O染色显示Hcy加剧了泡沫细胞的形成,但不呈量效关系。实验组(加入50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+叶酸+Vit B12)泡沫细胞阳性百分率均高于对照组(P<0.05、P<0.01),以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01)。在Hcy的干预下,泡沫细胞胞内TC、FC、CE流出减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01)。100μmol/L Hcy+叶酸+VitB12组与100μmol/L Hcy组比较,前者泡沫细胞形成减少,胆固醇流出增多。RT-PCR结果显示ABCA1 mRNA表达下调,ACAT1 mRNA表达上调,均以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01);免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白的表达与其mRNA表达一致。结论 Hcy下调了ABCA1的表达,上调了ACAT1的表达,促使了泡沫细胞形成。     

miR-195-3p在同型半胱氨酸诱导的肝氧化应激损伤中的调控作用研究

目的 探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法 小鼠分为CBS^+/+组、CBS^+/-组、Lv-miR-195-3p组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10⁷ TU·mL^-1的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射等体积病毒滴度为1×10⁸ TU·mL^-1的绿色荧光蛋白慢病毒)和PBS组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液),每组10只。体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol·L^-1 Hcy)、Hcy组(100μmol·L^-1 Hcy)、mimic-NC组(转染模拟物对照组)、mimic-NC+Hcy组(转染模拟物对照组+100μmol·L^-1 Hcy)、miR-195-3p-mimic组(转染miR-1...     

同型半胱氨酸通过激活beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)促进人肝细胞自噬

目的 探讨beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)在同型半胱氨酸(Hcy)引起肝细胞自噬中的作用。方法 体外培养肝细胞,分为对照组(0μmol/L Hcy处理)和100μmol/L Hcy处理组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3BⅡ、 LC3BⅠ)的表达水平;使用(0、 25、 50、 100)μmol/L氯喹(CQ)处理肝细胞,CCK-8法检测CQ对肝细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测LC3B和AMBRA1的表达;采用AMBRA1小干扰RNA感染肝细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot法检测肝细胞AMBRA1表达干扰效率。敲低AMBRA1后肝细胞用Hcy处理,Western blot法检测LC3B蛋白表达水平,转染表达双荧光蛋白和LC3的腺病毒(mRFP-GFP-LC3),激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬流的变化。结果 与对照组相比较,Hcy处理组LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值升高;50μmol/L CQ对肝细胞增殖的抑制率接近于50%;与对照组相比,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、 AMBRA1的表达明...     

转录因子EB在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究

目的 探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法 动物实验：将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组（Sham组）和缺血再灌注组（I/R组）。细胞实验：（1）体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧（Normoxia）组和缺氧/复氧（H/R）组。（2）在衰老心肌细胞中分别转染过表达和干扰TFEB腺病毒分为过表达对照（Ad-GFP）组、过表达对照+缺氧/复氧（Ad-GFP+H/R）组、过表达TFEB(AdTFEB)组、过表达TFEB+缺氧/复氧（Ad-TFEB+H/R）组、干扰对照（sh-NC）组、干扰对照+缺氧/复氧（sh-NC+H/R）组、干扰TFEB(sh-TFEB)组、干扰TFEB+缺氧/复氧（sh-TFEB+H/R）组。（3）分别用DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的特异性抑制剂DC-05、TFD、NA处理缺氧/复氧后的衰老心肌细胞分为H/R组、DC-05组、TFD组、NA组。（4）在衰老心肌细胞中转染干扰DNMT3b腺病毒分为干扰对照（sh-NC）组、干扰对照缺氧/复氧（sh-NC+H/R）组、干扰DNMT...     

国医大师刘嘉湘谈中医药临床研究与医学伦理

国医大师刘嘉湘教授从20世纪60年代起开展中医药治疗恶性肿瘤的临床研究,注重受试者的生存期、生活质量和用药权益,强调中医药临床研究的科学性、规范性和伦理性。系统阐述刘教授近60年以来在中医药临床研究中倡导、实践和推动医学伦理的举措,并介绍其严谨的临床研究医学伦理素养,为国内外中医药临床研究的实施和受试者的保护提供宝贵的经验。     

miR-148a-5p参与了高蛋氨酸饮食诱导ApoE-/-小鼠的肝细胞凋亡

文题释义：凋亡：是一种程序性细胞死亡,其特征是进行性的核和细胞质收缩、染色质浓缩和凋亡小体脱落。凋亡由称为半胱天冬酶的特定类型的半胱氨酸蛋白酶执行,一旦激活,就可以裂解细胞底物并导致细胞死亡。最常见的凋亡指标为抑制凋亡基因Bcl-2和促进凋亡基因Bax,Bcl-2增高,细胞凋亡减少;Bax增高,细胞凋亡增加。微小RNA(miRNA)：是一组内源性非编码小RNA,在动物、植物、病毒和其他生物中普遍存在,可调节将近60%的基因表达,这些基因负责细胞的增殖、分化、凋亡和其他生理过程。miRNA可以在多种疾病中异常表达,并对这些疾病的诊断和预后评估起重要作用。背景：高蛋氨酸饮食可以导致ApoE^-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义。 目的：探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用。方法：12只ApoE^-/-小鼠随机分为2组,每组6只,ApoE^-/-对照组为普通饮食,ApoE^-/-高蛋氨酸组为高蛋氨酸饮食。苏木精-伊红染色观察2组肝组织形态学变化;TUNEL染色观察肝细胞的凋亡情况;Western blot测定Bax、Bcl-2的表达改变;荧光定量PCR检测miR-148a-5p的表达;运用Target Scan靶基因预测软件预测miR-148a-5p的靶基因;双荧光素酶活性实验明确其靶向关系。结果与结论：①与对照组相比,ApoE-/-高蛋氨酸组肝脏组织肝小叶结构发生明显紊乱,部分细胞呈胞浆疏松化变性,肝细胞凋亡增加,Bax的表达明显上升且Bcl-2的表达显著下降(P < 0.01);②荧光定量PCR结果显示,ApoE-/-高蛋氨酸组miR-148a-5p的表达增加(P < 0.05);③靶基因预测软件提示,Bcl-2为miR-148a-5p的潜在靶基因;④双荧光素酶活性实验确定了miR-148a-5p与Bcl-2的靶向关系(P < 0.05);⑤肝细胞中过表达miR-148a-5p后Bax的表达显著上升且Bcl-2的表达明显下降(P < 0.01);⑥提示在高蛋氨酸饮食诱导的ApoE-/-小鼠肝细胞中,miR-148a-5p通过负调控Bcl-2促进肝细胞凋亡,这可能是造成肝损伤的机制之一。 ORCID: 0000-0003-1524-1117(马芳) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

氧化苦参碱对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨氧化苦参碱（OMT）对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔（CLP）法复制大鼠脓毒症动物模型.造模后将48只SD大鼠分为6组,即CON（假手术）组、OMT对照组、CLP（模型）组、CLP＋ OMT（52、26、13mg·kg-1）剂量组.采用BL-420生物机能实验设备检测大鼠心功能改变,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数（AI）,放射免疫分析法测定心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子-a（TNFa）蛋白含量的改变.结果 不同剂量的OMT能明显降低脓毒症大鼠的HR、左室舒张末压（LVEDP）,升高平均动脉压（MAP）、LVSP、±LVdp/dtmax（P＜0.05）,降低心肌组织匀浆中TNF-a蛋白含量（P＜0.05）及心肌细胞凋亡指数（P＜0.05）.结论 OMT（52、26、13mg·kg-1）能减轻脓毒症导致的大鼠心肌细胞凋亡现象,对抗由心肌细胞凋亡引起的心功能损伤.     

Hcy对动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢的影响

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）促进ApoE基因敲除（ApoE-/-）鼠动脉粥样硬化（AS）形成同时是否对肝脏脂质代谢产生影响。方法取健康5周龄雄鼠（SPF级C57BL/6J）12只作为正常对照组,饲以普通饮食;另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠（SPF级近交系C57BL/6J）36只,分为模型对照组、高同型半胱氨酸血症（H Hcy ）组、叶酸和VB12干预的干预组,每组12只,饲养18周后,生化分析仪测定血清Hcy及血脂总胆固醇（CHOL）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平,主动脉冰冻切片苏木素-伊红（H E ）染色后观察并测量斑块面积;肝脏组织冰冻切片油红O染色观察肝脏细胞脂质变化,酶法测定肝脏脂质代谢改变。结果与正常对照组比较,HHcy组血清Hcy、LDL、TG、CHOL水平明显增高（P＜0．01）,分别升高约2．3、2．8、5．0、10．7倍,HDL下降约64％（P＜0．01）;干预组Hcy、LDL、CHOL水平较 HHcy组分别下降43％、34％、21％,HDL水平增高36％（P＜0．05）,TG无明显变化;HE染色可见3组ApoE-/-鼠主动脉均有 AS形成,其中 HHcy组主动脉斑块面积28．2×104μm2,明显大于模型对照组的17．0×104μm2（P＜0．05）,干预组斑块面积17．1×104μm2,较 HHcy组减轻（P＜0．05）。肝脏油红O染色HHcy组脂质积累明显;干预组肝细胞内有少量脂质沉积;氧化酶法检测发现 HHcy组肝脏组织中CHOL和TG分别是正常对照组的2．2、2．8倍（P＜0．01）;干预组肝脏CHOL、TG水平与 HHcy组比较下降30％、33％（P＜0．01）。结论 Hcy促进ApoE-/-鼠AS形成的同时加速肝脏脂代谢紊乱。