ILK、TNFα在酒精性肝纤维化大鼠肝组织中的表达及五田保肝液的干预作用*

[目的]探讨整合素连接激酶(ILK)、肿瘤坏死因子α(TNFα)在酒精性肝纤维化大鼠肝组织中的表达及五田保肝液的干预作用。[方法]将100只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组10只,模型组、五田保肝液低、中、高剂量组、易善复组各18只,采用白酒辅以吡唑、玉米油的混合食料灌胃的方法建立大鼠酒精性肝纤维化模型,12周末处死大鼠,以苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织纤维化情况,以实时定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测大鼠肝组织ILK、TNFαmRNA的表达。[结果]五田保肝液(尤其是中、高剂量)和易善复各组大鼠肝纤维化程度轻于模型组,模型组大鼠肝组织ILK、TNFαmRNA的表达比正常对照组明显升高;五田保肝液和易善复可降低大鼠肝组织ILK、TNFαmRNA的表达,且以五田保肝液中、高剂量效果更显著。[结论]ILK、TNFαmRNA的表达升高可能是大鼠酒精性肝纤维化发生发展的机制之一,而五田保肝液可能通过下调ILK、TNFαmRNA的表达,对大鼠酒精性肝纤维化的发生发展起到抑制作用。     

补阳还五汤及其组分治疗阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的神经系统退行性疾病,其病因病机复杂,主要以胆碱能神经元损伤及神经突触缺失为病理改变,长期以来单一致病因素作为治疗靶点的研究收效欠佳。中医复方因其具有多通路多靶点干预的优势,在防治AD方面有显著效果。益气活血代表方-补阳还五汤广泛应用于脑血管疾病,对保护神经元、修复血脑屏障降低通透性对抗脑水肿、抵御血管内皮细胞损伤、促进新血管生成和成熟等方面具有显著的疗效。因其对大脑多方面强大的治疗作用,大量学者研究发现补阳还五汤对改善认知功能损伤疗效显著,且不同的组分通过不同的机制发挥改善认知损伤的治疗效果。但不同研究所侧重的作用机制相对单一,不利于全面认知其作用机制和干预靶点。文章总结近年相关文献从补阳还五汤及其组分降低β淀粉样前体蛋白(APP)表达减少β样淀粉蛋白沉积、抑制中枢神经系统炎症信号通路减少炎症因子释放、抑制神经元凋亡因子表达保护神经元、修复血脑屏障减少有害物质进入中枢神经系统、提高低密度脂蛋白相关受体(LRP)-1含量,降低晚期糖基化受体(RAGE)表达增加β淀粉样蛋白外周清除等方面阐述其保护神经元、改善学习及认知功能障碍的机制,以期为补阳还五汤治疗阿尔茨海默病提供有力的文献支持。     

补阳还五汤干预缺氧预适应成纤维细胞促间充质干细胞迁移的机制

目的:探讨补阳还五汤干预缺氧预适应心脏成纤维细胞促间充质干细胞迁移的相关机制。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠7 d后,制备补阳还五汤含药血清及空白血清。0.56,1.12,2.25 g·m L~(-1)含药血清干预缺氧预适应的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CFs培养液中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α),单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的含量,mRNA及蛋白表达情况,并将补阳还五汤干预缺氧预适应CFs的培养液干预间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)后,检测MSC的细胞迁移能力。结果:与常氧组比较,缺氧可以显著促进CFs分泌HIF-1α,MCP-1及HGF(P0.01),同时给予缺氧预处理的CFs培养液干预MSC后,HIF-1α,MCP-1及HGF的水平亦显著升高(P0.01),当给予不同剂量的补阳还五汤含药血清干预后,与缺氧组比较,它们的表达进一步升高(P0.05,P0.01);而给予HIF-1α抑制剂YC-1处理后,补阳还五汤各组可升高MCP-1,HGF的表达(P0.05)。结论:补阳还五汤协同缺氧预适应CFs旁分泌效应能够促进MSC迁移,其可能机制是通过上调HIF-1α的表达,提高迁移因子MCP-1,HGF的表达而实现的。     

中医药防治急性后新型冠状病毒肺炎综合征血栓形成的研究进展

新型冠状病毒感染（COVID-19）患者在度过急性阶段后处于的亚急性或慢性疾病阶段称为急性后新型冠状病毒肺炎综合征（PACS）。PACS患者常伴有血栓形成,因此,防治血栓形成已成为治疗COVID-19和改善PACS患者症状的重要方向。中医认为PACS血栓形成的主要病机是寒、湿、热、瘀互结所致的瘀血阻络,其治则以活血化瘀为主,以清热、补虚、燥湿为辅。因此,通过阐述COVID-19后存在的炎症、内皮细胞损伤及血小板活化、血液黏稠度升高致血栓形成的相关机制,明确中医药防治COVID-19后血栓形成的作用靶点,为中医药防治急性后新冠肺炎综合征血栓形成的研究提供新思路。     

补阳还五汤对缺氧心脏成纤维细胞旁分泌MMP-2/9、TIMP-1、TNF-α的影响

[目的]探讨补阳还五汤对缺氧诱导心脏成纤维细胞旁分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,并从基因和蛋白水平探讨其保护心肌细胞、预防心肌纤维化的机制。[方法]培养小鼠乳鼠心脏成纤维细胞,将其分为对照组、模型组、补阳还五汤组。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测各组成纤维细胞和细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TNF-αm RNA表达和蛋白分泌。[结果]与对照组比较,模型组MMP-2、MMP-9及TNF-αm RNA表达上调,蛋白旁分泌增加,TIMP-1表达下调(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤组MMP-2、MMP-9 m RNA表达下调,蛋白旁分泌减少,TIMP-1则上调(P0.05),而TNF-α仅有下调趋势,无统计学差异(P0.05)。[结论]补阳还五汤可保护缺氧心肌,预防心肌纤维化。其机制可能与抑制缺氧成纤维细胞的旁分泌,调节MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达平衡有关。     

丹酚酸B对内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞联合心脏移植后增殖状况的影响

目的通过丹酚酸B预处理的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)与骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)混合后对心肌梗死大鼠进行心脏移植,观察移植细胞的增殖情况。方法密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs与BMSCs;免疫细胞化学法(CD34、CD133、CD44)分别鉴定2种细胞。采用左冠状动脉结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型。丹酚酸B最佳药物浓度(8μg/mL)预处理EPCs,并以不同比例与BMSCs混合(EPCs/BMSCs分别为1∶1、2∶1、4∶1和8∶1),手术移植至心肌梗死区。HE和N-BT染色法检测心肌梗死面积;免疫组化法检测Ki-67的表达情况。结果与模型组(19.60%±3.23%)比较,各细胞移植组心肌梗死面积均明显下降(P<0.05),其中4∶1组(11.37%±2.18%)和8∶1组(9.23%±2.35%)效果最明显(P<0.05)。与模型组[(5.17±2.31)个/高倍视野]比较,各细胞移植组Ki-67阳性细胞数均显著增多(P<0.05),其中8∶1组阳性细胞数[(15.00±3.16)个/高倍视野]明显高于其他细胞移植组(P<0.05)。结论丹酚酸B预处理的EPCs联合BMSCs进行心脏移植,能够减少大鼠心肌梗死面积,提高BMSCs在梗死周边和缺血局部的增殖。并且随着EPCs移植比例的增加,梗死面积逐渐减少,增殖表达逐渐增强。     

中药干预移植骨髓基质细胞的心肌再生和分化过程中基因表达的研究

最近几年细胞生物学及干细胞研究的进展,干细胞移植治疗心肌梗死及其促心肌再生方面的研究已经成为国内外相关领域研究者们关注的焦点,具有广阔的临床应用前景.本课题总结国内外经验,结合中医药基础理论,利用现代实验方法,通过复制在体急性心肌梗死大鼠模型,探讨中药改善骨髓基质细胞(MSCs)移植后"微环境",提高移植细胞生存率,促进其增殖、定向分化及其分化过程中基因的表达.本课题通过离体细胞培养观察中药对MSC的诱导作用和分化过程中相关基因的表达.     

面向新世纪中医院校形态学课程教学手段和方法的探讨

现代社会已经进入了信息时代,知识经济在蓬勃发展,多媒体技术被广泛的应用到教学中.21世纪要求当代大学生必须在掌握基本知识的同时,开阔视野.那么高等教育采用现代化的教学手段和教学方法已是大势所趋.具体到中医院校的形态学课程因为自身的特点,教学改革更是势在必行.因此,笔者通过多年教学实践总结出一套教学方法.     

以学生为本的教学模式在中医药院校病理教学中的应用

病理学是基础医学和临床医学的桥梁学科,承上启下,涉及知识面广泛,是基础医学各学科中最难掌握的学科之一。鉴于此,结合中医药院校自身的特点,逐步在教学过程中确定了以学生为本、强化学生临床思维、以顺利走向临床学习为目的的教学理念。进行了大信息量教学、案例式教学、PBL教学、模块化教学等形式的教学实践。     

基于GEO数据库对脑梗死相关差异基因的分析研究

目的比较模型组(MCAO组)大鼠与假手术组(Sham组)大鼠脑组织的差异基因,分析差异基因影响的功能通路,为脑梗死的治疗提供可行的研究方向和具体的作用靶点。方法在GEO数据库下载MCAO组大鼠与Sham组大鼠脑组织中的表达谱芯片,并通过R软件得到差异基因;利用DAVID 6.8分析差异基因的GO功能富集和KEGG通路富集。结果通过分析得到148个差异表达基因,123条GO富集通路,主要涉及药物反应、脂多糖反应、炎症反应、有机环状化合物反应及细胞外基质等生物过程,并与蛋白结合、受体结合、蛋白质同源化活性、整合素结合、蛋白酶结合及趋化因子的活性等分子功能相关;KEGG通路富集分析,得到显著性富集通路23条,涉及TNF信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路和HIF-1信号通路等。结论 TNF信号通路与NF-κB信号通路可能是治疗脑梗死的行之有效的干预方向。