丹酚酸B在巨噬细胞胆固醇外排中的作用

目的考察丹酚酸B（SAB）对巨噬细胞胆固醇外排的影响。方法分别采用巨噬细胞RAW264．7和PMA诱导的THP．1细胞,利用流式细胞仪检测丹酚酸B对已摄取DiI—acLDL的细胞外排脂质作用的影响,对RAW264．7细胞表面ABCA1蛋白表达水平的影响。采用ABCAl的抑制剂DIDS及小分子干扰RNA的方法检测ABCA1在丹酚酸B诱导的促进脂质外排过程中的作用。进而利用靶向CD36的小分子干扰RNA,通过抑制CD36的表达,检测CD36在丹酚酸B促进载脂巨噬细胞脂质外排过程中的作用。结果采用DiI荧光标记的脂质检测巨噬细胞对脂质的外排作用,结果显示SAB显著增加了荷脂细胞对DiI－acLDL的外排作用。对脂代谢相关转运蛋白表达的检测结果显示,在荷脂的RAW264．7细胞中,SAB能够以一定剂量依赖的方式增加细胞表面ABCA1蛋白水平的表达。进一步研究显示,上述SAB促进外排的作用可被ABCAl的抑制剂或者siRNA的作用消除,确证了ABCA1在SAB介导的脂质外排过程中的重要作用。同样利用CD36小分子干扰RNA将CD36表达抑制后,SAB促进外排的作用消失,说明SAB介导的细胞脂质的外排作用同样依赖于CD36。结论丹酚酸B通过上调ABCA1的表达,促进巨噬细胞胆固醇或脂质的外排,且该作用依赖于ABCA1及CD36,为SAB抗动脉粥样硬化作用新机制的研究提供了重要依据。     

HFLC法测定妇科消炎栓中磺胺嘧啶含量

目的：建立妇科消炎栓中磺胺嘧啶的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法测定磺胺嘧啶的含量,流动相为0．05mol·L^-1磷酸二氢钾：甲醇（60：40）,选定268nm为测定波长,用外标法计算含量。结果：磺胺嘧啶在浓度为8-40ug·ml^-1内线形良好,线形方程为A=0,7659C-0．05228,r=0.9999。结论：本方法操作简便、快速、结果准确、精密度高。     

坎地沙坦对糖尿病肾病小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1表达的影响及意义

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1)拮抗剂坎地沙坦(candesartan)对糖尿病肾病(D iabetic nephrop-athy,DN)小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)表达的影响及意义。方法采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病肾病(DN)模型。将正常C57BL/6小鼠随机分成3组,每组12只:正常对照组(N组)、糖尿病肾病组(D组)、Candesartan治疗组(DC组)。治疗8 wk后取肾组织,观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR法检测各组肾皮质SGK1及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;W estern b lot检测各组肾皮质中SGK1及CTGF蛋白的表达。结果与N组相比,D组小鼠肾重/体重、24 h尿蛋白量,肾小球滤过率均明显增加;肾皮质中SGK1、CTGF mRNA及蛋白质的表达均明显升高。经Candesartan干预后(DC组),相应生化指标较D组有明显改善,SGK1、CTGF的表达水平较D组亦有明显下调。纤维化指标CTGF的表达与SGK1呈正相关。结论Candesartan可以延缓糖尿病肾病的肾脏纤维化过程,它对细胞内SGK1信号转导途径的抑制作用可能是其抗纤维化作用的主要环节,该作用与AngⅡ-AT1途径被阻断有关。     

不同程度嗅球切除对小鼠认知功能、内嗅皮质、海马体积及神经病理的影响

目的:探讨不同程度嗅球切除对小鼠认知功能、内嗅皮质、海马体积及神经病理的影响.方法:选取健康雄性昆明小鼠60只,按随机数字表法分为假手术组、不完全切除组、完全切除组,各20只.脑立体定位后,完全切除组在前囟前3.4 mm垂直插入刀片切断嗅束,不完全切除组在前囟前4 mm以同样方式切断嗅球.假手术组只开窗、不切除嗅球.在...     

SGK1在糖尿病小鼠肾脏皮质中时间差异性表达及意义

目的:研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-inducible kinase1,SGK1)在糖尿病(DM)小鼠肾脏皮质中时间上差异性表达及意义。方法:采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型。将2月龄C57BL/6小鼠随机分成10组:第1、2、3、4、6、8、12周糖尿病小鼠组(DM1、DM2、DM3、DM4、DM6、DM8、DM12)和相应的第1、4、8周正常对照组(N1、N4、N8)。分别在DM模型制作成功后第1、2、3、4、6、8、12周末收集小鼠24h尿量,检测24h尿蛋白量;观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR检测小鼠肾脏皮质SGK1及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达,Western blotting检测N4、DM4、DM8组皮质SGK1、CTGF蛋白的表达。结果:随着糖尿病病程的进展,DM组小鼠肾小球体积逐渐增大、系膜区逐渐增宽;DM组小鼠24h尿蛋白从第2周起开始逐渐增多,肾脏皮质SGK1mRNA表达从第2周开始明显上调,在第4周达到峰值。CTGF随着糖尿病病程的进展表达逐渐递增。结论:SGK1在糖尿病早期肾脏表达峰值的出现及CTGF持续递增的表达,提示SGK1在糖尿病肾病肾脏纤维化的发生发展过程中起重要作用。     

敲低CD2相关蛋白的表达对足细胞黏附和胞质伸展功能的影响

目的 观察敲低足细胞CD2相关蛋白（CD2AP）表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响，并探讨其机制。 方法 用RPMI 1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系，转染针对CD2AP的小分子干扰RNA（siRNA），设无特异靶位点的scrambing 序列即control siRNA转染组作对照。48 h后将转染的足细胞制备成单细胞悬液，接种于预铺有Ⅳ型胶原蛋白的96孔板内，33℃下培养90 min后检测足细胞的贴壁率和细胞的伸展面积；流式细胞仪检测抑制CD2AP后足细胞的凋亡率以及在不同氨基核苷嘌呤霉素（PAN）刺激下足细胞的凋亡率；激光共聚焦显微镜下检测F肌动蛋白（F-actin）的分布变化；Western印迹和免疫共沉淀检测nephrin蛋白的表达及其磷酸化水平。 结果 转染CD2AP siRNA足细胞的黏附率为41.72%±6.07%，显著低于对照组64.46%±8.53%（P < 0.05）；细胞伸展的面积>200 μm2的比例（55.86％）亦显著低于对照组（73.61％）。转染CD2AP siRNA后48 h足细胞的凋亡率高于对照组[（5.73±0.61）％比（3.26±0.45）％，P < 0.05]。100 mg/L的PAN能明显诱导足细胞的凋亡，减少足细胞的黏附率（P < 0.05）。敲低CD2AP的表达后足细胞F-actin的分布发生明显的变化，nephrin蛋白表达和磷酸化水平下降（P < 0.05）。 结论 敲低CD2AP的表达使足细胞易于凋亡，影响细胞的黏附功能。足细胞骨架蛋白的紊乱和nephrin信号通路的抑制可能是足细胞黏附和伸展功能下降的机制。     

TRPC6高表达对血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

目的 观察瞬间受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)高表达对血管紧张素Ⅱ(AnglI)诱导的小鼠足细胞凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 用脂质体将针对小鼠TRPC6的基闪真核表达载体pEGFP.N1.mTRPC6转染体外培养的永生化小鼠足细胞系.24 h后用荧光显微镜观察增强绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.Western印迹法检测转染后TRPC6蛋白表达的变化.将足细胞分组,应用不同浓度AngⅡ处理足细胞,Fluo-3AM结合激光共聚焦显微镜检测各组足细胞胞质内钙离子的浓度.RT-PCR及Westem印迹法检测Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的水平.流式细胞仪及Hoeehst染色法榆测足细胞凋亡.结果 pEGFP-NI-mTRPC6转染足细胞后,约35%细胞出现绿色荧光;足细胞TRPC6蛋白表达明显上调(P<0.01).TRPC6高表达町以明显促进AngII诱导的足细胞钙离子内流(P<0.01),在蛋白及基因水平均上调Bax的表达而下调Bcl.2的表达(P<0.01,P<0.05).在低剂量Ang Ⅱ(10-10mol/L)作用下.足细胞凋亡率为(2.50±0.72)%,转染TRPC6以后凋亡率为(4.33±0.45)%,差异有统计学意义(P<0.05).在高剂量Ang Ⅱ(10-6mol/L)作用下,足细胞凋亡率为(15.46±1.40)%.转染TRPC6以后凋亡率为(18.33±0.87)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 TRPC6在AngⅡ诱导的足细胞凋亡中发挥重要作用.TRPC6可能通过增加钙离子内流,进而启动其下游的捌亡调节成分参与凋亡过程.     

胰岛素对高糖培养的人系膜细胞表达SGK1及合成细胞外基质的影响

目的：研究胰岛素对高糖培养的人系膜细胞（HMC）血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)的表达及细胞外基质（ECM）合成的影响,初步探讨其主要作用环节。方法:用含有5.5mmol/L、25mmol/L葡萄糖和100nmol/L胰岛素的DMEM培养基培养HMC细胞,即为对照组（NG）、高糖组（HG）、胰岛素干预对照组（NI）和胰岛素干预高糖组（HI）。4h后检测SGK1的表达、胰岛素受体底物（IRS1和IRS2）蛋白的表达及磷酸化水平;24h后检测结缔组织生长因子（CTGF）和纤连蛋白（FN）的表达。结果:HG组、NI组和HI组SGK1蛋白表达均显著高于NG组（P<0.01）,高糖主要导致IRS2蛋白表达及磷酸化水平的增高（P<0.01）。胰岛素干预后,HI组IRS1蛋白表达及磷酸化水平明显高于HG组（P<0.05）,而IRS2蛋白表达及磷酸化水平出现部分抑制（P<0.05）。高糖促进CTGF和FN的表达,胰岛素加强高糖此作用。结论:胰岛素和高糖能够通过不同的分子途径促进体外肾小球系膜细胞SGK1的表达,并最终促进ECM的合成;胰岛素的这种作用与IRS1信号转导通路密切相关。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在肾脏中的研究现状及展望

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）是Webster等在1993年用血清和糖皮质激素刺激大鼠乳房肿瘤细胞,筛选其表达产物后发现的。当细胞受血清或糖皮质激素刺激时,SGK1基因在30min内表达迅速升高5～10倍,故命名为血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶。它是一种与蛋白激酶B（PKB／AKT）等第二信使蛋白具有极高的同源性的丝氨酸和／或苏氨酸蛋白激酶。     

复方川芎胶囊活血作用研究

目的观察复方川芎胶囊改善微循环与血液流变学作用。方法①取SD大鼠60只,随机分为空白组,模型组,复方川芎胶囊低、中、高剂量组和复方丹参滴丸组各10只,各给药组分别灌胃给予复方丹参滴丸和低、中、高剂量复方川芎胶囊,qd,连续7 d,空白对照组给予等体积纯化水。于第7天皮下注射1 mg&#8226;mL 1盐酸肾上腺素（Adr）注射液,0.08 mL&#8226;（100 g） 1,共2次,两次间隔4 h。在两次注射Adr之间（前后各间隔2 h）将大鼠浸入冰水内5 min,制作血瘀模型,第7天处置后停食。各组大鼠均在第8天早晨用10%水醛0.3 mL&#8226;（100 g） 1腹腔麻醉,激光多普勒血流监测仪测定耳廓、大脑顶部及肠系膜血流灌注量。②取SD大鼠60只,同上述方法分组、造模后禁食,于次日清晨腹腔取血3 mL,迅速注入含肝素的抗凝管内,摇匀静置,检测血液流变学指标。结果复方川芎胶囊能改善血瘀模型大鼠耳廓、脑部、肠系膜微循环,显著降低血瘀模型大鼠全血黏度、红细胞聚集指数及变形指数,缩短红细胞电泳时间。结论复方川芎胶囊具有改善微循环和血液流变学的作用。