分枝杆菌多糖的制备及对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的:制备分枝杆菌多糖并考察其对小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法:用苏通培养基培养分枝杆菌,菌体脱脂后,用5种方法提取,比较多糖得率,并用正交试验优化超声提取工艺,再用稀碱提取残渣,粗多糖经Sevag法除蛋白、DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱纯化后得到分枝杆菌多糖;用MTT法检测分枝杆菌多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果:超声后热水提取多糖得率最高,超声提取的优化工艺是提取时间40 min,固液比为1∶150,超声功率600 W;单因素试验优化的Sevag法除蛋白条件为体积比1∶5,萃取时间为20 min,萃取6次;提取得到的4种多糖组分在6.25~50 mg.L-1范围内均能显著促进脾淋巴细胞的增殖。结论:用本实验工艺成功制备了分枝杆菌多糖,制备物具有刺激小鼠脾淋巴细胞增殖的作用。     

聚乙二醇修饰干扰素α2b的稳定性研究

目的研究聚乙二醇修饰干扰素α 2b的稳定性。方法以抗病毒活性为指标 ,考察单修饰干扰素α 2b、多修饰干扰素α 2b和干扰素α 2b的稳定性 (4℃、2 5℃、37℃ )、抗胰蛋白酶水解能力和 37℃人血清稳定性。结果在4℃、2 5℃和 37℃条件下 ,稳定性依次为多修饰干扰素α 2b >单修饰干扰素α 2b >干扰素α 2b。抗胰蛋白酶水解试验表明 :干扰素α 2b在 30min时抗病毒活性迅速降到原来的 7.1% ,单修饰干扰素α 2b剩余 5 0 % ,多修饰干扰素α 2b仍保留 71%。体外稳定性试验表明 ,在 37℃人血清放置 10h ,干扰素α 2b只保留 35 % ,单修饰干扰素α 2b保留 71% ,而多修饰干扰素α 2b仍保留 95 %的抗病毒活性。结论聚乙二醇修饰可以增加干扰素α 2b的稳定性 ,抗胰蛋白酶水解能力和 37℃人血清稳定性。除了抗胰蛋白酶水解能力 ,修饰度的增加能够明显增强这种作用     

薄层层析和反相高效液相色谱检测木瓜蛋白酶催化合成的Aspartame及其中间产物

本文报道以TLC和HPLC法检测以木瓜蛋白酶在水-乙酸乙酯两相反应体系中合成的Aspartame及其中间产物（I）（Ⅱ）。TLC条件为：展开剂（正丁醇：冰醋酸：水=3：1：1），展开时间（4-5h)，检测（荧光检测253.7nm，1%茚三酮丙酮溶液显色）。HPLC条件为：流动相（乙腈：水=45：55），流速1ml/min，检测（紫外检测260nm)，进样量20ul,灵敏度6，纸速1-4mm/min，分析周期10min。该方法简便、准确、灵敏度高。用该方法也证实以木瓜蛋白酶催化合成的Aspartame及其中间产物（Ⅱ）与以嗜热蛋白酶（Thermolysin)催化合成的Aspartame及其中间产物（Cbz-Asp-PheOMe)完全一致。     

大黄的生化学研究ⅩⅩⅪ.波叶大黄多糖对免疫功能的促进作用

从波叶大黄中提取、分离得到波叶大黄多糖(Rheum hotaoense polysaccharide, RHP),ig RHP 100和200 mg/kg能明显增加小鼠脾脏和胸腺重量,与对照组相比,脾指数分别增加30%和38%,200 mg/kg的剂量使胸腺指数增加25%;能促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,吞噬百分数分别比对照组增加38%和61%。200 mg/kg的剂量可使吞噬指数增加155%;能促进小鼠碳粒廓清速率,K值分别比对照组增加48%和217%;能促进SRBC致敏小鼠血清溶血素形成,HC_(50)分别比对照组增加11%和57%;能促进小鼠抗体形成细胞的生成,QHS分别比对照组增加63%和126%。RHP还可明显促进受ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞DNA的合成,最适浓度为20μg/ml,刺激指数为1.61;对ConA活化的脾淋巴细胞蛋白质合成也有明显促进作用,刺激指数为1.56;对ConA诱导的淋巴细胞IL-2产生有明显增强作用。     

对叠氮-L-苯丙氨酸盐酸盐的合成及其在重组人内皮抑素中的定点引入

以对硝基-L-苯丙氨酸为原料,通过5步反应制备纯度较高的对叠氮-L-苯丙氨酸盐酸盐。利用构建好的重组表达载体和正交氨酰tRNA合成酶/tRNA(MjTyrRS/tRNA)系统将对叠氮-L-苯丙氨酸(pAzPhe)定点(31位)引入到人内皮抑素分子中,表达人内皮抑素中突变体——rhEs31m。对分离纯化所获得的目的产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定,突变体rhEs31m电泳纯度达90%以上,同时可被抗人内皮抑素抗体特异性识别。通过MTT法检测rhEs31m体外抗人脐静脉内皮细胞增殖活性,结果显示:与野生型rhEs相比,rhEs31m保留了大部分生物活性。本实验表明单个pAzPhe的定点引入并未破坏重组人内皮抑素的空间结构和生物活性。     

含有对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素的表达及纯化

优化定点引入对叠氮苯丙氨酸的詹氏甲烷球菌属正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统,使用优化后的正交系统在大肠杆菌内表达并纯化在特定氨基酸位点引入对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素突变体。首先将正交酪氨酰tRNA合成酶启动子-15区的TATAA序列突变为TTAA序列,同时将正交酪氨酰tRNA合成酶的第286位天冬氨酸突变为精氨酸以提高对抑制型tRNA反密码子CUA的识别力。然后将质粒pST和pET32a-mhEn转化到大肠杆菌DH10BDE3中得到重组工程菌。该重组菌在含有对叠氮苯丙氨酸的培养基中培养,并经IPTG诱导表达人内皮抑素突变体。利用镍亲和色谱纯化获得人内皮抑素突变体,纯度大于90%。通过对正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统的优化,有效提高了系统引入对叠氮苯丙氨酸的效率,人内皮抑素突变体的表达量有了显著提高。     

富锗金针菇多糖对小鼠肝脏的保护作用

目的:研究富锗金针菇多糖(CFVP)对急性肝损伤小鼠转氨酶活性的影响及对肝脏的保护作用,在此基础上研究其精制品FVP1对CCl4损伤的小鼠原代肝细胞的保护作用。方法:采用0.2%CCl4灌胃造成小鼠急性肝损伤模型,以CFVP和阳性对照联苯双酯灌胃给药,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)的活性,并对小鼠肝脏进行切片观察;采用二步分离法制备小鼠原代肝细胞,检测FVP1对CCl4损伤的原代肝细胞ALT活力的影响。结果:CFVP高、中剂量组对CCl4致急性肝损伤小鼠ALT活性的升高具有显著的降低作用,与造模组相比有极显著性差异(P<0.01);低剂量组与造模组相比有显著性差异(P<0.05),CFVP对CCl4致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用;FVP1中剂量组、低剂量组可使培养液中的ALT活性明显低于模型组,具有极显著性差异(P<0.01),即ALT明显减少,说明FVP1对CCl4损伤的原代小鼠肝细胞具有保护作用。结论:富锗金针菇多糖具有保护肝脏细胞,防止肝细胞坏死的作用。     

构建药学院校企业实践教学基地和校企联合培养人才新机制的思考

加强药学院校企业实践教学基地(以下简称基地)建设,构建药学院校与医药企业联合培养人才的新机制,对于提高药学人才培养质量具有重要意义.本文针对目前基地建设和校企联合培养人才的探索中面临的困境,对校企联合培养人才的机制进行了探讨,建议从高校、企业和政府三方面着手,改革现有药学教育办学模式,积极发挥企业主体作用,强化政府政策支持引导的职能.     

富锗金针菇多糖FVP1结构的初步鉴定及其对巨噬细胞功能调节作用

从发酵的富锗金针菇(Flammulina velutipes)菌丝体分离纯化得到多糖Flammulina velutipes polysaccharide 1（FVP1）,并对其进行结构初步鉴定和体外活性分析。利用凝胶渗透色谱(GPC)测定相对分子质量;气相色谱法(GC)检测单糖组成;运用高碘酸氧化-Smith降解法、甲基化方法对多糖结构初步解析。体外分析FVP1对小鼠巨噬细胞的活化作用。结果显示,FVP1是一种高度分支的多糖,相对分子质量约为140 kD,单糖组成包括甘露糖、葡萄糖、半乳糖、盐藻糖及鼠李糖,其物质的量比为2∶4∶5∶1∶1;FVP1的主链结构包括1,6-葡萄糖、1,6-半乳糖、1,3-半乳糖,并在1,3,6-甘露糖少量的1,3,4-鼠李糖产生支链结构。结果发现,FVP1能与小鼠腹腔巨噬细胞靶向性结合,并可显著促进其分泌NO。FVP1在体外展示了良好的免疫调节活性,具有潜在的生物学功能。     

lncRNA在免疫细胞及自身免疫性疾病中的研究进展

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是继miRNA后又一类具有调控功能的非编码RNA,其可在基因水平、转录水平和蛋白质水平等多方面影响疾病的发生发展。目前已在基因印迹、肿瘤疾病、神经退行性疾病等领域取得较好的研究进展,而其在自身免疫方面的研究才刚刚起步,但诸多lncRNA已被证实参与免疫细胞的发育分化,并在免疫系统稳态维持及自身免疫性疾病的发生发展中发挥重要作用。本文将从免疫细胞和自身免疫性疾病方面阐述lncRNA的研究进展。