不同期鼻咽癌病人血清中TNF－α和IFN－γ活性检测

本文研究不同期鼻咽癌病人血清中ＩＦＮ和ＴＮＦ的活性水平。结果如下：第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期各期病人，复发期病人和健康对照组的ＩＦＮ水平均值分别为５３．０，７１．４，６３．４，３２．８，５３．０和２１．０ＩＵ／ｍｌ，经方差分析各期病人和对照组之间有明显差异，Ｆ＝１１．６９９，Ｐ＜０．０００１。第Ⅰ－Ⅳ期各期病人以及复发期病人和健康对照组的ＴＮＦ水平均值分别为９９．５，１１５．３，１２１．２，２３５．４，８２．８和１１．４ＩＵ／ｍｌ。经方差分析各期病人和对照组之间有明显差异，Ｆ＝９．３９２８，Ｐ＜０．０１。值得注意的是第Ⅳ期病人的ＩＦＮ水平下降，而ＴＮＦ水平上升。中和试验确证病人血清中ＩＦＮ为γ型，ＴＮＦ为α型。本文讨论有关第Ⅳ期这两种细胞因子水平的分叉现象：ＩＦＮ－γ下降和ＴＮＦ－α上升与此肿瘤远距离转移和恶液质出现的关系。     

人外周血单核细胞体外诱导树突状细胞及鉴定

目的：建立从人外周血单核细胞体外诱导培养树突状细胞（dendritic cell,DC)的方法。方法：分离人外周血单个核细胞,以细胞因子粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）,白细胞介素－4（IL－4）,肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导培养获得DC,电镜及共聚集显微镜观察其形态,流式细胞术检测细胞表面抗原,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果：从正常外周血分离得到的单核细胞,体外经重且人GM－CSF,IL－4,TNF－α的共同诱导培养,得到大量成熟DC,形态学观察可见典型DC特征,荧光激少在细胞分离器（FACS）检测表明,诱导的DC高表达HLA－DR（96％）,CD83（94．2％）,CDla(94.2%)分子,同时也高表达CD40（97．7％）,CD80（98．2％）分子,同种混合淋巴细胞反应显示,诱导的DC具有很强的激发同种T细胞增殖的能力。结论：人外周血单核细胞体外经细胞因子贯序诱导培养,可以生成大量功能成熟的DC,为进一步开展DC的基础研究和临床应用提供了可能。     

口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型增殖应答受损

目的研究口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型（HHV-6）特异性增殖应答,初步探讨HHV-6在口腔鳞癌发病机制中的作用。方法间接免疫荧光法（IIF）检测血浆中抗HHV-6IgG;免疫微磁珠分离CD4^＋T及CD8^＋T细胞;3H-TdR法检测CD4^＋T和CD8^＋T细胞及PBMCs的增殖水平;FACS分析CD4^＋C25^＋调节性T细胞（Treg）的比例。结果口腔鳞癌组血浆中抗HHV-6IgG阳性数为8/8,正常对照组为12例（12/20）;口腔鳞癌组PBMCs及CD4^＋T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于HHV-6潜伏感染组与未感染组（P〈0.05）;HHV-6潜伏感染组PBMCs及CD4^＋T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于未感染组（P〈0.05）;口腔鳞癌组外周血中CD4^＋C25^＋Treg比例明显高于HHV-6潜伏感染组与未感染组（P〈0.05）。结论口腔鳞癌患者的HHV-6特异性CD4＋T细胞增殖应答减弱,可能在口腔鳞癌的发生发展中起一定作用。     

T细胞活化信号传递的分子基础

T细胞活化信号的传递可以通过两条途径:一是T细胞受体(TCR)的介导;二是旁路途径如CD2分子的介导.本文综述了近年来关于T细胞活化信号研究的最新进展,从分子水平上阐明了T细胞活化的机制.还简要讨论了T细胞活化信号传递中的缺陷和临床疾病的关系.     

EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验

目的观察EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）-潜伏膜蛋白2A（1atent membrane protein2A，LMP2A）转染人树突状细胞（dendritic cell，DC）诱导特异性细胞毒性T细胞（cytotoxicity T lymphocyte，CTL）的体外生物学特性；建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型，探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞（pripheral blood mononuclear cell，PBMC），以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—monocyte colony stimulating factor，GM—CSF）、白细胞介素4（interleukin-4，IL4）及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF—α）诱导培养获得DC，荧光激活细胞分选仪（fluorescence activated cell sorter，FACS）检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC，将转染DC与自体PBMC混合培养，在白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL，FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB／c裸鼠，建立鼻咽癌动物模型；在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL，观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM—CSF、IL4、TNF—α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明，以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CIM、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型；动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢，体积明显小于对照组（P〈0．01）；病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导，可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC，可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠，可成功构建鼻咽癌动物模型；LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长，发挥有效的抗肿瘤作用。     

多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性与整合子?转座子遗传标记研究

目的:了解南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株的整合子、转座子存在状况.方法:自2007年7月～10月间南京地区住院患者标本中分离出20株多重耐药鲍曼不动杆菌,微量肉汤稀释法测定11种抗菌药物的敏感性;以PCR法测定整合子遗传标记基因qacE△1-sull及转座子遗传标记基因tnpU.结果:20株AB菌中整合予qacE△1-sul1基因阳性率70%;转座子tnpU基因阳性率65%.结论:南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌整合子、转座子遗传标记基因(qacE△1-sull、tnpU)携带率高;氯己定预防术后院内感染在我国需要重新评估.     

抗人类疱疹病毒６型南京分离株Ｅ５单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定人疱疹病毒6型(HHV-6)单克隆抗体.方法:用纯化的HHV,6南京分离株E5免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/O融合,经间接ELISA法筛选,间接免疫荧光法、免疫印迹实验等方法鉴定单抗.并采用套式PCR法和ELISA法,在口腔癌中进行了初步的应用.结果:获得了一株分泌抗HHV-6单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为JA9.单克隆抗体亚类鉴定表明:其为IgGl亚类,轻链为K.用间接ELISA法检测细胞上清单抗效价为1:500;单抗腹水滴度为1:8.0×104.免疫印迹实验结果表明:JA9单抗腹水与约75 ku HHV-6 E5病毒蛋白结合.口腔癌患者唾液的HHV-6阳性检测率结果分别是:套式PCR法60%.ELISA法40%.结论:成功制备并鉴定一株抗HHV-6南京分离株E5单克隆抗体,为HHV-6进一步的基础研究及临床快速诊断提供可能.     

口腔鳞状细胞癌与人类疱疹病毒6型感染的相关性研究

目的:研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌的相关性?方法:用PCR和间接免疫荧光方法分别检测口腔鳞癌患者和健康志愿者唾液HHV-6 DNA和血清抗HHV-6 IgG抗体?免疫组化法检测口腔鳞癌组织及癌旁组织标本中HHV-6糖蛋白B(glycoprotein B,gB)抗原?结果:118份口腔鳞癌唾液标本中PCR阳性率为65.3%,高于正常人群的40%(P < 0.05)?HHV-6感染与患者病历资料无显著相关性?18份口腔鳞癌患者和20份健康人血清中HHV-6 IgG抗体的几何平均滴度分别为1∶102.17和1∶101.50(P < 0.05)?免疫组化法检测,11例口腔鳞癌标本中6例出现的阳性结果,胞质内出现弥散性的黄色颗粒,在癌巢内特异性浓集,而间质为阴性?8例相应癌旁组织中3例出现阳性染色结果,但阳性强度较癌组织弱且弥散?1例gB组化阳性肿瘤组织细胞经分离后接种裸鼠,移植瘤组织也检测到HHV-6抗原?结论:本研究说明HHV-6与口腔鳞癌的发生存在相关性,但不与患者临床资料分布相关?本研究亦提示荷瘤裸鼠作为HHV-6动物模型的可能性?