生物化学实验室实施开放式实验教学初探

生物化学是一门实验性较强的课程,基础生物化学实验对于学生掌握基本知识、基本技能、培养初步的科研能力起着非常重要的作用.而实验室是高等学校实施素质教育、培养学生创新精神与实践能力的重要基地.为有效利用和挖掘实验室资源,充分发挥实验室在高素质创新人才培养过程中的重要作用,鼓励支持学生在课余时间参加开放式实验教学或科研活动,促进实验教学改革.2006年以来,生化实验室实施开放式实验教学,学生参与实验设计、实验准备并积极参加课外实验,在教学内容和形式上对传统生化实验课进行了初步的改革和探索.     

金钗石斛总碱对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞PPAR-γ表达的影响

目的 观察金钗石斛总碱对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）表达的影响.方法 金钗石斛总碱经酸性乙醇提取后,通过强酸性阳离子交换树脂富集,鉴定方法选用气质光谱分析,总碱含量采用酸性染料比色法测定.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组（NC组）、高糖模型组（HG组）、罗格列酮对照组（ROZ组）及金钗石斛总碱低（LD组）、中（MD组）、高（HD组）剂量组,采用RT PCR和Westem blot分别检测各组PPAR-γ mRNA和蛋白的表达情况.结果 金钗石斛总碱提取物经气相色谱检测分析,确定为金钗石斛生物碱成分,经酸性染料比色法测定总碱含量约为69％.与NC组比较,HG组PPAR-γ mRNA和蛋白表达明显减少（P＜0.05）;与HG组比较,金钗石斛总碱各剂量组PPAR-γmRNA和蛋白表达减少,PPAR-γmRNA及蛋白随金钗石斛总碱用药量的增加而表达减少,但各组间差异无统计学意义（P均＞0.05）.结论 金钗石斛总碱对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞PPAR-γ并无激活作用.     

痉挛性髋内收内收大肌肌纤维型转化超微损害及临床意义

痉挛性髋内收是脑性瘫痪、颅内感染、脑外伤等脑性疾病常见的后遗症 ,其原发病理损害在中枢神经系统 ,表现在相应的神经中枢所支配的大腿内收肌张力增高和痉挛性瘫痪。近年来 ,逐渐认识到除中枢神经系统病理改变外 ,受累的骨骼肌也有器质性病理改变[1] ,这些改变是影响远期治疗效果的重要因素之一。我们对 16例患脑性疾病痉挛性髋内收患者的内收大肌进行组织化学和超微结构研究 ,探讨这些痉挛性肌纤维的组织化学和肌内能量代谢损害对预后的影响 ,现报道如下。资料和方法一、材料标本取自 16例手术治疗的脑性疾病痉挛性髋内收畸形的内收大肌…     

糖尿病家兔早期治疗中RCD及酶活性变化

观察糖尿病家兔红细胞变形能力及酶活性等变化,探讨早期治疗效果。方法用四氧嘧啶制备家兔糖尿病模型。测定ＲＣＤ和红细胞膜ＡＴＰ酶活性、膜唾液酸一及红细胞中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。结果家兔静脉给予四氧嘧啶后,２４ｈ血糖升高,持或高４８ｈ后,确定糖尿病模型建立,即用胰岛素治疗,６－８ｄ后检测血糖和上术生化指标均恢复正常。     

金钗石斛水提物对糖尿病大鼠肾组织非酶糖基化及氧化的影响

目的 观察金钗石斛(Dendrobium nobil Lindl, DNL)水提物对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾组织非酶糖基化和氧化应激的影响,探讨DNL对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导DM大鼠模型,分为正常对照组(N组),糖尿病对照组(DM组),金钗石斛低(DNLL)、中(DNLM)、高(DNLH)剂量组和氨基胍(aminoguanidine, AG)对照组(AG组),给药12周。分别检测血糖、血尿素、肌酐、糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)、尿肌酐、24h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。透射电镜观察肾组织超微结构变化。结果 DM组大鼠血糖、血尿素、24h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织MDA含量显著高于N组(P＜0.05);肌酐清除率、肾组织总SOD活性显著低于N组(P＜0.05);DM组大鼠系膜扩张明显异常,基底膜明显增厚。DNL明显降低DM大鼠血糖、血尿素、24h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织MDA含量(P＜0.05),明显增加肌酐清除率(P＜0.05)、增强肾组织总SOD活性(P＜0.05)、减轻肾系膜的扩张和基底膜的增厚。结论 DNL能降低血糖、抑制AGEs的形成、抑制氧化应激的发生,从而阻止或延缓糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)的发生发展。     

阿司匹林对脂多糖、地塞米松分别诱导巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响

目的本实验旨在观察阿司匹林对脂多糖和地塞米松分别诱导的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响.方法小鼠腹腔巨噬细胞培养成功后,分别以脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)为诱导剂进行凋亡的诱导,在出现凋亡的基础上,给予不同剂量的阿司匹林分别分5组给药,放射免疫分析法检测TNF-α表达情况.结果阿司匹林对脂多糖和地塞米松诱导的凋亡中TNF-α的表达均有抑制作用.结论阿司匹林在炎症和非炎症情况下,都可以降低TNF-α水平.     

金钗石斛多糖对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞氧化应激的影响

目的 观察金钗石斛多糖对高糖作用下大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)氧化应激的影响.方法 采用水提醇沉法进行多糖的提取并经过DEAE-FF对提取粗多糖进行分离纯化;鉴定方法包括红外光谱分析该多糖的特征性吸收峰;紫外分光光度法对多糖纯度进行判定;苯酚-硫酸法进行多糖含量测定.后将HBZY-1细胞分为6组,对照组(NC)、高糖作用组(HG)、NAC组(NAC)、金钗石斛多糖低(LD)、中(MD)、高(HD)剂量干预组,药物作用时间24h,ABTS法检测各组细胞的总抗氧能力;流式细胞术检测细胞内活性氧的变化;WST-1法检测各组细胞的增殖情况.结果 经水提醇沉及阴离子交换柱纯化得到金钗石斛多糖组分FDP1,测得金钗石斛多糖相对含量为98.1％.与对照组相比,高糖作用组细胞的总抗氧能力下降,而ROS表达明显增加(P＜0.05).金钗石斛多糖干预组与高糖作用组相比,增加ROS生成.高糖作用组较正常组细胞的增殖速度加快(P＜0.05),金钗石斛多糖各剂量组对高糖诱导的细胞增殖无影响.结论 金钗石斛多糖FDP1具有抑制高糖诱导下的HBZY-1细胞总抗氧化能力的下降、ROS生成的增加,对高糖诱导下细胞氧化应激损伤有保护作用.     

绿原酸对脂多糖诱导的巨噬细胞的影响

目的 研究绿原酸(CHA)对小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB表达的影响。方法 巨噬细胞分别用脂多糖(LPS)作用和LPS加CHA共同作用。以流式细胞术检测细胞NF-κBp65表达率，并分别测定培养上清中NO含量和GSH-Px活陛。结果 LPS作用2h后．NF-κBp65表达率升高，并持续至4h，LPS与CHA共同作用后，其表达率明显下降。NO含量在用LPS作用6h后仍持续上升．加CHA作用后明显下降。GSH-Px活性在LPS作用6h后仍持续降低．加CHA作用后明显升高。结论 绿原酸的抗炎机理之一可能是通过降低NF-κBp65的水平来抑制NO的表达，另外也可能与抗氧化酶的活性增加有关。     

医学生物化学设计性实验教学体会

为了不断完善实验教学体系和实验改革的需要,开设设计性实验,能开拓学生和教师的创造性思维,使知识融会贯通,培养应用型现代医学人才;总结教学经验,提高教学兴趣,对增加本学科及相关学科的国内外新知识,了解实验的多种方法和技术具有很大的帮助。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF—αmRNA、iNOSmRNA的表达

目的观察脂多糖对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α以及诱导型一氧化氮合酶表达水平的影响。方法按常规方法获取小鼠腹腔巨噬细胞,随机分成两组：空白对照组及LPS组（分别含LPSO．01,0．1,1．0,10rag／L）。采用荧光定量PCR方法测定肿瘤坏死因子-α及诱导型一氧化氮合酶的基因表达情况。结果经0．01μg／mL LPS刺激后细胞TNF-αmRNA、iNOSmRNA表达水平均明显升高,与空白对照组比较有显著性差异（P〈0．01）,并且在一定范围内呈剂量一效应关系。结论LPS可诱导小鼠巨噬细胞TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达。