增强型绿色荧光蛋白和大鼠血管生长素-1基因共表达的重组慢病毒体外转染大鼠骨髓间充质干细胞

目的：观察共表达的血管生成素-1（Ang-1）基因和增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组慢病毒体外转染大鼠骨髓间充质干细胞（rMSC）．方法：体外包装Ang-1基因和EGFP基因共表达的重组慢病毒,测定病毒滴度．转染rMSCs,荧光显微镜下观察EGFP的表达、转导效率,实时荧光定量PCR,Western blot分别在不同时间点行Ang-1基因mRNA以及蛋白表达的相对定量分析．将转染的rMSCs（Ang-1-rMSCs）与对照组rMSCs培养48h的上清液分别与人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）共培养,MTT法检测HUVECs的吸光度值．结果：包装的浓缩慢病毒,滴度为6．1×10^10TU／L．转染rMSCs,5d转染效率为（92．7±3．01）％;实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示Ang-1-rMSCs中Ang-1基因mRNA及蛋白表达水平均以转染后3—7d为高峰,随后开始呈缓慢下降趋势．Ang-1-rMSCs与HUVECs共培养,与对照组rMSCs比较,MTT法检测显示Ang-1-rMSCs能明显促进HUVECs的增殖（P〈0．01）．结论：在体外重组的慢病毒成功转染rM—SCs,其Ang-1基因表达以转染后3—7d为高峰,且转染的rMSCs具有Ang-1基因的生物学活性．     

瑶山润楠根的化学成分研究

对樟科润楠属植物瑶山润楠Machilus yaoshansis根乙醇提取物的化学成分进行研究。利用多种色谱技术从瑶山润楠的醋酸乙酯萃取物中分离得到15个化合物;通过理化性质和波谱数据鉴定其结构为12个木脂素类(+)-愈创木素(1),kadsuralignan C(2),(+)-异落叶松脂素(3),(+)-5’-甲氧基异落叶松脂素(4),南烛木树脂酚(5),内消旋-裂环异落叶松树脂酚(6),异落叶松脂素-9’-O-β-D-吡喃木糖苷(7),5’-甲氧基-异落叶松脂素-9’-O-β-D-吡喃木糖苷(8),南烛木树脂酚9’-O-β-D-吡喃木糖苷(9),(2R,3R)-2,3-二氢-2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-甲氧基-3-甲基-5-(E)-丙烯基苯并呋喃(10),3,5’-二甲氧基-4’,7-环氧-8,3’-新木脂素-4,9,9’-三醇(11),甘密树皮素B(12),和3个黄烷类(+)-儿茶素(13),(-)-表儿茶素(14),bis-8,8’-catechinylmethane(15)。化合物1～15均为首次从该植物中分离得到。     

卵巢恶性类固醇细胞瘤1例

患者女性、14岁。13岁月经初潮之后曾停经2次。患者家属发现其嗓音变粗。查体:喉结较明显,毛发较浓密,上唇周可见较浓密汗毛。B超示左附件区有一5.4 cm×5.7 cm×6 cm的分隔状囊性占位。术中见左卵巢有一约7 cm×6 cm×6 cm囊性占位,包膜表面光滑,其内为血性液及较多朽烂组织,左卵巢失去正常形态。病理检查巨检:灰白、灰褐色组织一堆,共7 cm×6 cm×2 cm大小,其内可见血凝块样物及黄体样物,质中,囊壁内可见灶性褐色细乳头样突起。镜检:肿瘤细胞弥漫,片状或巢状分布,间质富于血管;主要由两种细胞组成,一种细胞较小,为多边形或近似立方体,胞…     

人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗的计算机辅助设计及真核表达

目的:设计并表达预防16型人乳头瘤病毒感染的重组蛋白疫苗。方法:选取HPV16型病毒L1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的三维结构,选取其中最优的结构进行基因克隆构建,并利用杆状昆虫系统进行表达。结果:利用计算机设计出了一种重组蛋白,成功构建了该重组蛋白的结构基因,并在杆状昆虫表达系统中得到表达。结论:成功构建并表达了人乳头瘤病毒的重组蛋白疫苗。     

残疾人士的健康、心理和生活状况调查分析

目的了解残疾人现时的健康、心理和生活状况,为制订全面社区康复计划提供科学依据.方法进行随机抽样的入户访谈式调查.结果肢残者所占的比例最大,其次是听力语言残疾,视残居第三位;以疾病、先天遗传和意外伤害为三大致残原因,而车祸是意外伤害的第一致残原因;不同年龄阶段各类残疾的构成存在显著性差异;不同文化程度的残疾人心理状态评价存在显著性差异;大多数残疾人对福利政策感到不满意或不太满意.结论普遍开展社区康复服务,增加残疾人的就业机会,完善我国的残疾人福利政策等.     

长白山区几种植物油中脂肪酸成分的研究

我省长白山区野生植物资源丰富，为了及早开发利用，我们筛选了几种植物油进行药效学试验，发现它们都具有明显的降低胆固醇和改善脂肪肝等作用，本文仅对几种植物种子中所含脂肪酸成分进行报道。     

血管生长素-1基因慢病毒载体的构建及其在间质干细胞的表达

目的： 构建带有血管生长素-1（Ang-1）基因的慢病毒载体并实现该基因在大鼠骨髓间质干细胞（rMSCs）中的表达。方法： RT-PCR获得大鼠Ang-1基因，限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES₂-EGFP，在脂质体介导下与包装质粒HELPER,包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒颗粒并感染rMSCs。 PCR检测Ang-1基因的插入，细胞RT-PCR检测Ang-1 mRNA表达，免疫细胞化学和Western blotting检测Ang-1蛋白的表达。结果： 所获Ang-1基因经测序证实与GenBank报道的序列一致。慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES₂-EGFP经SalⅠ和BamHⅠ双酶切后电泳显示 1 512 bp Ang-1目的基因片段和10.5 kb PNL-IRES2-EGFP载体片段。病毒基因组PCR证实Ang-1基因插入。荧光显微镜观察到EGFP表达。细胞RT-PCR检测到Ang-1 mRNA表达。免疫细胞化学和Western blotting检测到Ang-1蛋白表达。结论： 成功构建带有Ang-1基因的慢病毒载体并实现在rMSCs中的表达，为Ang-1基因修饰干细胞的应用研究奠定了基础。     

定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能

目的检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者T细胞受体重排删除DNA环(signaljoint T-cell receptor exc ision DNA c irc les sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点。方法利用实时定量PCR(TaqM an)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平。14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照。结果ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs,(2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005]。各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复。     

干细胞白血病基因在再障和正常骨髓基质细胞中的表达

目的：了解白血病干细胞(SCL)基因在再生障碍性贫血(AA)骨髓基质细胞 (BMSC)及骨髓细胞中的表达情况。方法：收集9例AA和33例正常骨髓标本。体外长期培养扩增BMSC，并收集悬浮细胞。运用反转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定(RT-PCR-ELISA)检测SCL基因在BMSC和悬浮细胞中的表达，分析表达率，并以管家基因β2微球蛋白(β2M)为内参照进行半定量分析。结果：SCL基因在AA的BMSC中的表达率(22.2％)低于正常对照组(69.7％，P<0.05)。SCL基因在AA的悬浮细胞中的表达率(87.5％)高于其对应的BMSC(P<0.05)。PCR-ELISA半定量分析结果显示，SCL基因在正常对照组悬浮细胞中的表达水平高于其对应的BMSC(P<0.05)。结论：SCL基因在AA的BMSC中的相对低表达状态提示可能与AA造血调控异常有关。     

慢性粒细胞白血病相关的TCR Vβ T细胞的诱导及其限制性和克隆性分析

目的:了解体外诱导CML细胞相关TCRVβ亚家族T细胞克隆性增殖及其杀伤性的情况。方法:采用混合淋巴细胞/白血病细胞培养法(MLTC)体外将CML细胞、K562细胞和bcr-abl多肽与供者外周血单个核细胞混合培养和扩增,利用RT-PCR-基因扫描技术分析培养后T细胞的TCRVβ谱系的限制性利用和克隆性增殖情况,并经LDH法分析诱导增殖T细胞的杀伤性。结果:经bcr-abl多肽、CML细胞和K562细胞诱导扩增1-2周后,供者外周血T细胞表达10-13个Vβ亚家族,在Vβ16和Vβ21出现克隆性增殖T细胞,在Vβ5和Vβ13出现寡克隆生长趋势T细胞。诱导扩增后的T细胞对CML和K562细胞具有特异性杀伤作用。结论:利用CML细胞、K562细胞和bcr-abl多肽可在体外诱导出CML细胞特异性CTL,该CTL可能为优势表达的Vβ亚家族克隆性T细胞。