胰腺癌干细胞研究现状与临床应用前景

1引言胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年上升,位居恶性肿瘤第十位,死亡率为第四位,五年生存率仅为5%,预后差。其早期诊断困难,一经发现大多属中晚期,失去了手术治疗的机会。胰腺癌对放化疗不敏感,治疗后容易复发,术后复发和转移的机制仍很不清楚,成为其治疗失败的主要原因。干细胞学说认为:干细胞是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞,在特定的条件下,它可以分化成不同的功能细胞,形成多种组织和器官。按分化阶段不同,分为     

艾灸胃经穴对大鼠胃黏膜损伤的修复效应研究

目的:探讨艾灸胃经穴对大鼠急性胃黏膜损伤的保护及修复作用。方法:40只健康SD大鼠随机分成4组:正常组、模型组、艾灸胃经穴组、艾灸对照点组。采用水浸束缚法制作胃黏膜损伤大鼠模型,检测各组胃黏膜溃疡指数、溃疡面积和出血指数。结果:艾灸胃经穴组和艾灸对照点组的溃疡指数、出血指数及溃疡面积显著低于模型组,与其比较差异有显著性意义(P<0.05);并且艾灸胃经穴组与艾灸对照点组相比更低(P<0.05)。结论:艾灸胃经穴对大鼠急性胃黏膜损伤具有很好的修复作用。     

电针环跳穴对腰椎间盘突出症家兔髓核组织PGE_2、PLA_2和IL-1α的影响

目的:观察电针环跳穴对腰椎间盘突出症(LIDP)家兔髓核炎性分子的影响,探讨电针环跳对LIDP家兔的损伤修复机制。方法:将40只家兔随机分为空白组、模型组、环跳组和非穴组,每组10只。采用自制的LIDP动物病理模型造模器建立家兔LIDP病理模型,放射免疫法测定家兔髓核前列腺素E2(PGE2)含量和磷脂酶A2(PLA2)活性的变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定家兔髓核白介素-1α(IL-1α)含量的变化。结果:模型组髓核PGE2、PLA2和IL-1α含量或活性均显著高于空白组(P0.05,P0.01);环跳组髓核PGE2、PLA2和IL-1α含量或活性显著低于模型组和非穴组(P0.05,P0.01);而非穴组髓核PGE2、PLA2和IL-1α含量或活性与模型组比较无显著性差异。结论:电针环跳穴可降低LIDP家兔髓核PGE2、PLA2和IL-1α的含量或活性。     

汉语普通话学龄前儿童日常生活口语词库的建立

目的 采集学龄前3～6岁听觉言语发育正常的儿童在日常生活中出现的口语资料,建立正常儿童口语词库,作为编制儿童言语测试材料的选材来源. 方法采用分层随机抽样法选取北京地区3～6岁儿童20名,以录音的方式采集儿童日常生活言语,采用汉语词法分析系统(institute of computing technology, Chinese lexical analysis system,ICTCLAS)进行自动分词和词性的自动标注,参考国际儿童语言数据交流系统(child language data exchange system,CHILDES)的建立方法获得词库,计算每个词在词库中出现的词频数.结果 建立了汉语普通话3～6岁儿童日常生活口语词库,包括单音节词1 979个,双音节词2 745个,三音节词384个,四音节词42个.结论 儿童日常口语词库可以作为儿童言语诊断词表编制的选词基础,也可用于编制儿童不同言语发育时期康复材料的素材、研究儿童语言习得资料,为儿童语言的研究提供参考数据.     

呼吸道合胞病毒感染人肺上皮细胞诱导氧化应激对TLR7基因及其下游因子表达的影响

目的 观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染人肺上皮细胞(A549细胞)引起的氧化应激对Toll样受体7(TLR7)活化及其主要信号分子的作用,探讨其所介导的抗炎作用和可能的调控机制,为临床治疗和预防RSV感染提供新的思路.方法 RSV体外感染A549细胞为感染组,以抗氧化剂BHA进行预处理作为抗氧化剂组,于感染后的4、8、12、24h收集细胞,以未感染细胞作为正常组.①化学法检测活性氧指标·OH含量的变化;②硝酸还原酶法检测NO含量的变化;③用TRIzol提取细胞总RNA,通过半定量RT-PCR法检测TLR7、白介素(IL-6)的mRNA转录水平的变化;④ELISA法检测细胞上清液中IL-6的表达变化;⑤MTT法检测各组细胞增殖情况.结果 ①感染组里·OH的含量升高并呈时间依赖性,在抗氧化剂组,·OH的含量与感染组相比是降低的;②感染组各时间段NO含量升高并呈时间依赖性,抗氧化剂组的NO含量与感染组同一时间点相比降低;③感染组中不同时间点的TLR7基因转录水平表达上调,抗氧化剂组TLR7的表达虽有上调,表达量都比感染组同时间点下降;④感染组里IL-6的表达量与感染之间有时间依赖性关系,抗氧化剂组IL-6的表达虽有上调,但比感染组同时间点下降;⑤感染组随时间点的延长,细胞抑制率增加,抗氧化剂组的细胞抑制率与感染组相比下调明显.结论 RSV感染可诱导氧化应激的产生,在加入抗氧化剂BHA预处理后,可明显减轻TLR7及其下游主要信号分子的表达变化和细胞抑制率,表明RSV感染活化TLR7及引起细胞损伤可能是通过氧化应激途径来调节的.     

早产儿出院随访出院后护理

目的:发现早产儿在出院后随访中的问题,提出解决方案,提高随访质量,使早产儿出院后得到较高质量的护理。方法:对2016年10月-2017年10月在我院出院的521例早产儿电话随访,分析随访结果,发现问题并提出解决方案。结果:在随访中有6%的早产儿失访;在随访中发现早产儿科学护理率低,回院随访比率不高。结论:改善早产儿出院后护理,首先应提高早产儿出院后随访率,重视对早产儿家长的健康教育,加强对早产儿出院后护理的培训力度,注重社区医疗对早产儿的家庭服务,使早产儿出院后护理更加科学化、规范化。     

大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定及其增殖活力分析

目的：建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法,分析所获得细胞的增殖活力,为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持。方法：采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段,并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管,常规条件下对肾小管节段进行贴壁培养,待细胞爬出后,用免疫组织化学方法检测细胞角质素-18（CK-18）的表达情况,采用流式细胞术对第0、1和2（P0、P1、P2）代细胞的CK-18表达情况进行分析,用CCK-8方法检测各代细胞的增殖活力。结果：肾小管节段培养24 h后,可见细胞从节段内爬出;培养72 h后,细胞呈铺路石样密集生长。随着传代进行,P0、P1和P2代细胞CK-18的表达效率分别为95.9%、91.5%和76.8%,肾小管上皮细胞逐渐死亡,P2代细胞较P1代细胞增殖活力明显减弱(P<0.05),同时培养体系中杂细胞增多。结论：该方法经济可靠、简便易行,但是所分离的肾小管上皮细胞只可在体外传代2次,不能长期培养,仅P0、P1代细胞可供体外分析实验使用。     

结直肠癌细胞外泌体的制备及其促单核细胞增殖作用

目的：从结直肠癌细胞系中分离鉴定外泌体,初步研究结直肠癌来源的外泌体潜在的免疫学特性,为外泌体在结直肠癌免疫学治疗中的应用提供依据。方法： 超速离心法从HCT116和SW480 2种结直肠癌细胞系培养上清中分离提取正常细胞外泌体和热休克细胞外泌体,进一步用220 nm的滤膜进行纯化获得纯度较高的外泌体。采用透射电镜观察所提取外泌体表征形态,聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析细胞和外泌体的蛋白组成,检测外泌体促进外周血单个核细胞（PBMCs）的增殖功能。结果：透射电镜下正常的外泌体和细胞热休克获得的外泌体形态相近,均呈现典型的圆形或椭圆形外泌体结构,直径为50~100 nm。聚丙烯酰胺凝胶电泳,结直肠癌细胞裂解物与结直肠癌细胞系来源外泌体的蛋白组成不同,与未处理和经热休克处理的结直肠癌细胞比较,外泌体对PBMCs的增殖有更强的促进作用（P<0.05）,热休克作用可使外泌体诱导的PBMCs的增殖程度显著升高（P<0.05）。结论 ：超速离心法和滤膜过滤方法可有效地从结直肠癌细胞系中提取外泌体,细胞裂解物和外泌体的蛋白组成差异可能是造成免疫学特性差异的主要原因,将细胞经热休克处理可增强外泌体的免疫原性。     

TGF-β和TIMP-1在宫腔粘连患者血清中的表达

目的检测宫腔粘连患者血清中转化生长因子-β(TGF-β)和基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)的表达水平,探讨其在宫腔粘连发病中的作用。方法选择2012年1月至2012年11月期间在我院因宫腔粘连行宫腔粘连分离术的91例患者作为研究对象,根据宫腔粘连程度将患者分为轻度、中度和重度宫腔粘连组;同期因继发不孕行宫腔镜检查且子宫内膜正常的35例患者为对照组,检测两组患者血清中TGF-β和TIMP-1的水平。结果轻度、中度和重度宫腔粘连患者血清TGF-β和TIMP-1水平均明显高于对照组(P<0.05);重度粘连患者血清中TGF-β和TIMP-1水平明显高于轻度和中度宫腔粘连患者(P<0.05)。结论患者血清TGF-β和TIMP-1水平与宫腔粘连的发生和发展有关。     

1-磷酸-神经鞘氨醇干预化疗对 S180 荷瘤小鼠卵巢功能损害和抑瘤效果的研究

探讨凋亡抑制因子 1-磷酸-神经鞘氨醇（S1P）对环磷酰胺（CTX）联合顺铂(DDP)诱导的S180荷瘤小鼠卵巢功能损害的干预作用及其对肿瘤化疗效果的影响。方法 将52只C57BL/6雌性小鼠随机选取10只作为空白对照组，余皮下接种S180肿瘤细胞后随机分为3组，即荷瘤对照组、单纯化疗组、S1P+化疗组，每组14只。用药期间动态观察动情周期及肿瘤体积变化，于用药前、用药第11天左右的动情间期分批处死小鼠，分别称取体质量、卵巢质量及肿瘤质量；采用酶联免疫吸附（ELISA）法动态检测用药前后各组小鼠血清的卵泡刺激素( FSH)、黄体生成素( LH) 及雌二醇（E2）水平的变化；卵巢组织连续病理切片，计算原始卵泡、生长卵泡数量的变化。每组剩余小鼠与成年雄性小鼠合笼，观察生育情况。结果（1）血清基础性激素水平：给药前，各组血清FSH、LH 、E2水平无显著性差异(P>0.05)；用药第11天左右，单纯化疗组血清FSH水平明显高于其余3组、E2水平明显低于其余3组，其差异均有显著性意义（P<0.01），但血清LH水平各组间无显著性差异(P>0.05)；S1P+化疗组血清FSH、LH 、E2水平与两对照组均无显著性差异(P>0.05)。（2）卵泡数量及卵巢质量：用药第11天左右，单纯化疗组原始卵泡数和卵巢质量明显低于其余3组（P<0.01），其生长卵泡数亦明显低于空白对照组、荷瘤对照组（P<0.01），但与S1P+化疗组的差别无显著性意义(P>0.05)。S1P+化疗组原始卵泡数、生长卵泡数及卵巢质量与空白对照组、荷瘤对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。（3）肿瘤质量和抑瘤率：给药第11天左右，与荷瘤对照组比较，单纯化疗组、S1P+化疗组的皮下肿瘤体积增长速度均受到明显抑制，两组的肿瘤质量与荷瘤对照组相比均有显著性差异（P<0.01），且两组的抑瘤率均高于60%。结论 S1P可以在不影响肿瘤化疗效果的同时，预防化疗对小鼠卵巢功能的损害。