多功能医学实验平台的研制及在体外细胞温度效应观察中的初步应用

目的 研制一种多功能医学实验平台.方法 选用氧气、二氧化碳、湿度、温度传感器、控制器及效应器构建多功能医学实验平台并用于293细胞、PK15细胞受温度效应影响的试验.结果 该多功能医学实验平台可对温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度进行调节和控制,温度调控范围-20～ 60 ℃, 二氧化碳浓度调控范围0%～20%,氧气浓度调控范围0%～100%;湿度调控范围室温湿度至98%.采用该实验平台观察不同温度对293细胞、PK15细胞影响时发现,在10 ℃和20 ℃时,细胞出现胞体皱缩、突起变长等特征,细胞停止增殖.结论 该多功能医学实验平台可调节温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度,可用于细胞低温保存等移植相关实验.     

SFRP2与Periostin的相互作用在瘢痕疙瘩形成机制中的研究

目的利用pull-down技术验证凋亡相关蛋白基因SFRP2（Secreted frizzled-related protein 2）和骨母细胞特异性因子-2 Periostin（Osteoblast-specific factor2）间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的Periostin融合蛋白（HA—Periostin）的重组载体pCMV—HA—Periostin,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的融合蛋白（Myc—SFRP2）的重组真核表达载体pCMV—HA—SFRP2,单独或共转染人293细胞,利用pull-down技术验证Periostin与SFRP2间的相互作用。结果成功构建重组载体pCMV—HA-Periostin．与抗Myc单克隆抗体沉淀Myc—SFRP2相互作用蛋白复合物后,可以检测到HA—PeMostin的表达。通过体外蛋白质结合实验证实了Periostin与SFRP2间的相互作用。结论成功构建带HA标签的Periostin融合蛋白（HA-Periostin）的重组载体,利用pull—down技术证实了Periostin与SFRP2间的存在相互作用。     

损伤控制外科理念在肝脏破裂治疗中的临床应用

目的探讨损伤控制外科（DCS）理念在肝脏破裂救治中的作用。方法收集2009年1月至2012年5月期间我院急诊外科收治的62例外伤致肝脏破裂患者的临床资料,比较DCS理念指导前（传统组）与DCS理念指导后（DCS组）急诊肝脏破裂救治的疗效。结果 DCS组的保守治疗率明显高于传统组〔26.47%（9/34）比7.14%（2/28）,P〈0.05〕,2组间保守治疗成功率比较差异无统计学意义〔100%（9/9）比100%（2/2）,P〉0.05〕;DCS组的死亡率及术后并发症发生率较传统组明显降低〔死亡率：4.00%（1/25）比19.23%（5/26）,P〈0.05;并发症发生率：32.00%（8/25）比61.54%（16/26）,P〈0.05〕;2组手术患者住院时间、出血量、输血量、手术时间及住院费用比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 DCS理念指导下制定出的新的抢救措施,能够明显降低肝脏破裂的死亡率及术后并发症的发生率。     

调节性T细胞的MACS分选和纯度鉴定

目的 建立CD4^ CD25^ 调节性T细胞（Regulatory T Cells,Treg)的磁珠（MACS）分选方法，并对分选结果进行纯度鉴定。方法 采用T细胞纯化柱分离小鼠脾脏T淋巴细胞，以抗－CD8－FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8^ T细胞，再以抗－CD25－FITC抗体和义气风发FITC标记磁珠相结合的阳性选择法选出CD25^ T淋巴细胞；以FACS流式细胞法检测分选的CD4^ CD25^ 调节性T细胞纯度。结果 MACS磁珠分选法能够成功分选出CD4^ CD25^ 调节性T细胞，分选平均纯度达到73％，分选细胞活力为95％。结论 MACS磁珠分选法能够分选出高纯度的Treg细胞，该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力。     

拘束冷应激对大鼠肾脏热休克蛋白表达和血清皮质醇含量的动态影响

目的：研究拘束冷应激对大鼠肾脏组织热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70）表达和血清中皮质醇（Cortisol,CORT）含量的动态影响及可能的机制。方法：选取50日龄清洁级大鼠77只,随机分为7组,即0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h。采用拘束冷应激法,应激相应时间后,用免疫组织化学方法观察大鼠肾脏组织HSP70的表达,并检测血清中CORT含量。结果：血清中的CORT浓度在1.5 h呈现最高值,其余各时点变化不明显。光镜下可见HSP70在肾小球毛细血管内皮细胞的胞核及肾小管上皮细胞的胞核和胞浆中均有表达。肾脏中HSP70的表达首先呈增加的趋势,1.5～2.5 h HSP70持续高表达（P〈0.01）,之后下降（P〈0.05）。结论：适当强度的拘束冷应激能诱导肾脏组织中HSP70的合成,并且随着时间的延长而增加,但过度的拘束冷应激则可能降低或阻断肾脏HSP70的表达。     

人CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体构建及鉴定

目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中，脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig-IRES2-EGFP转染PA317细胞，在G418选择压力下，通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA317细胞克隆，MTT法测定CTLA4Ig生物学活性。结果 成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体，生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响。结论 IRES序列调控CTLA4Ig与EGFP双基因在细胞中同时独立表达。     

肾移植术后两种免疫抑制方案的对比研究

目的 探讨两种免疫抑制方案的疗效和副作用。方法 根据肾移植术后所用免疫抑制方案将121例肾移植分为两组，CMP方案组：环孢霉素A(CsA) 霉酚酸酯(MMH) 泼尼松(Pred)，CAP方案组：CsA 硫唑嘌呤(Aza) Pred，术后观察两组移植。肾功能，排斥反应发生频率及免疫抑制剂的用量和副作用。结果 术后CMP组急性排斥反应发生率低于CAP组，而排斥反应的逆转率却高于CAP组；术后半年内CMP组CsA用量低于CAP组CAP组肝肾中毒，骨髓抑制的发生率明显低于CAP组，两组感染的发生率无明显差异。结论 肾移植术后CMP方案优于CAP方案；MMF在肾移植术后的应用，可以减少肾移植排斥反应的发生，减少药物的副作用，提高肾移植的成功率。     

贵州省2019-2021年人源和猪源戊型肝炎病毒基因特征

目的 分析贵州省部分地区人源和猪源戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)流行株基因特征。方法 2019-2021年在贵州省医疗机构收集急性HEV感染者(抗-HEV IgM阳性)血清标本,在屠宰场收集猪胆汁和血清标本,提取HEV核酸,对HEV ORF2区基因进行扩增和测序,构建系统进化树,分析基因型、基因亚型及其核苷酸和氨基酸同源性。结果 从450例急性HEV感染者标本和196份猪标本中共获得53条人源和2条猪源HEV序列。人源序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为81.39%-100%和95.92%-100%,猪源序列分别为87.40%和100%;人源和猪源HEV均与HEV基因4型参考株的核苷酸同源性最高,分别为89.93%和89.83%。55条HEV序列位于系统进化树的3个分支,其中24条与4b亚型、20条与4a亚型、11条与4d亚型参考株处于同一分支,且核苷酸同源性最高,分别为95.54%、93.10%、95.72%。2条人源序列各发生1个位点的氨基酸替换。结论 2019-2021年贵州省部分地区人群和猪群中HEV优势流行株为基因4型,包括4b、4a和4d亚型,氨基酸...     

机械胸外心脏按压与徒手胸外心脏按压对心脏骤停后综合征的影响研究

目的比较机械胸外心脏按压与徒手胸外心脏按压对心脏骤停后综合征的影响。方法选取在我院急诊科发生心跳骤停患者56例为研究对象,依据胸外心脏按压方式不同分为对照组27例(徒手胸外心脏按压)和观察组29例(机械胸外心脏按压),回顾性分析比较两组患者复苏后48 h肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(c Tn I)、血尿素氮(BUN)和天冬氨酸氨基转移酶/丙氨酸氨基转移酶(AST/ALT)等生化指标、格拉斯哥昏迷评分(GCS)和神经功能缺损评分(CSS)的差异。结果复苏后48 h,观察组CK-MB、c Tn I和BUN均低于对照组(P<0.01);两组患者AST/ALT差异无统计学意义(P>0.05)。观察组GCS和CSS评分均优于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论机械胸外心脏按压较徒手胸外心脏按压可更有效地改善组织灌注,恢复神经功能,优于徒手胸外心脏按压。