左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马神经元CaMKⅡ及SynGap的调控作用

目的探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、磷酸化认知缺陷突触相关蛋白(Syn Gap)的影响。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元,采用高糖联合皮质酮构建DD模型。将培养的海马神经元随机分为5组:正常组、模型组、左归降糖解郁方含药血清组、阳性药(氟西汀+二甲双胍)含药血清组和空白血清组。药物干预18 d后,采用尼氏染色检测各组神经元的损伤情况,免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测Ca MKⅡ、Syn Gap的表达。结果与正常组及空白血清组相比,模型组海马神经元内尼氏小体数量显著减少,神经网络、树突棘断裂或消失,Ca MKⅡ、Syn Gap表达明显下调(P0.01);与模型组相比,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组尼氏小体明显增加,神经网络、树突数量及突触连接均明显恢复,细胞内Ca MKⅡ、Syn Gap蛋白表达增加(P0.01或P0.05)。结论左归降糖解郁方对DD大鼠模型海马神经元突触可塑性相关蛋白Ca MKⅡ、Syn Gap具有明显的调控作用,这可能是其抗细胞损伤和神经变性的重要机制之一。     

经典半乳糖血症伴语言发育落后一例

病例介绍患儿,男,6d,因"皮肤巩膜黄染4d,加重9+h"于2020年1月14日收入四川大学华西第二医院新生儿科.出生后2d患儿出现全身皮肤黄染,测经皮胆红素为11 mg/dL,未治疗,皮肤黄染进行性加重,入院时经皮胆红素为26.9 mg/dL.病程中患儿无发热、抽搐、呕吐、少吃、少动、腹胀,无陶土色样大便等.患儿系孕...     

海马内微量注射K252a对大鼠行为学及抑郁样经典指标的影响

目的海马内微量注射K252a,研究其对大鼠行为学及抑郁样经典指标的影响,拟建立一种新型抑郁症动物模型。方法 SD大鼠随机分为5组,即空白对照组、假手术组、慢性应激抑郁模型组、海马内微量注射K252a组、海马内微量注射K252a联合慢性应激组。采用Open field实验、糖水消耗实验、Morris水迷宫测定大鼠行为学的影响,ELISA法检测大鼠血清单胺递质含量的变化,放射免疫法观察大鼠血浆CRH、ACTH、CORT含量的变化,Western blotting观察大鼠海马BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2蛋白表达的变化。结果与空白对照组比较,CUMS组大鼠的活动量、糖水消耗量、学习记忆能力显著降低(P0.05或P0.01),HPA轴功能亢进(P0.01),血清单胺递质水平降低(P0.01),BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2的表达下调(P0.01或P0.05),而DMSO组上述指标差异无统计学意义;与DMSO比较,K252a组、K252a+CUMS组活动量、糖水消耗量、学习记忆能力显著下降(P0.01或P0.05),血清单胺递质水平下降(P0.01或P0.05),HPA轴功能显著上升(P0.01或P0.05),海马BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2的表达显著下降(P0.01或P0.05);与CUMS组比较,K252a组、K252a+CUMS组大鼠上述指标差异无显著性;与K252a组比较,K252a+CUMS组大鼠上述指标差异无显著性。结论从行为学、血液学、分子生物学的不同角度分析表明,此模型与经典的慢性应激抑郁模型在表面效度、结构效度、功能效度上具有极大的相似性,可为病因研究和抗抑郁药物筛选提供一个可供选择的研究技术平台。     

百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马DG、CA3区神经元再生相关蛋白的影响

目的探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经再生相关c AMP-CREB-BDNF信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组及百事乐高、中、低剂量组,除空白组外,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立大鼠抑郁模型,各组给予相应药物灌胃,连续21 d。开野实验、糖水消耗实验、定位航行实验及空间搜索实验检测大鼠行为学的变化,ELISA检测大鼠血浆中皮质酮含量,免疫组化检测海马DG、CA3区蛋白激酶A(PKA)、脑源性神经营养因子(BDNF)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的表达。结果与模型组比较,百事乐高、中剂量组大鼠水平或垂直活动次数及蔗糖偏食度升高(P0.05,P0.01),百事乐高剂量组大鼠逃避潜伏期、目标象限潜伏时间缩短(P0.05),百事乐高、中、低剂量组血浆皮质酮浓度降低(P0.05),百事乐高剂量组海马DG、CA3区PKA、CREB、BDNF表达升高(P0.05)。结论百事乐胶囊可能通过c AMP-CREB-BDNF信号通路促进海马神经元再生而实现抗抑郁的作用。     

百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经元凋亡的影响

目的: 探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动、海马神经元凋亡及凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法: 将SD大鼠随机分为6组,即空白对照、抑郁模型、氟西汀、百事乐胶囊高、中、低(2.88,1.44,0.72 g·kg^-1)剂量组,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立抑郁模型,造模同时ig给药,连续21 d,测定各组大鼠体重变化,Open-field、1%蔗糖偏食度测定大鼠行为学变化,TUNEL染色测定海马神经元凋亡变化,免疫组化检测海马Bcl-2,Bax的表达。结果: 与正常组比较,模型组体重增加、水平及垂直活动次数、蔗糖偏食度明显下降(P<0.01),凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数明显增加 (P<0.01);Bcl-2表达下降(P<0.01),Bax表达上升(P<0.01)。百事乐胶囊高剂量在第14、21天提升模型大鼠体重(P<0.01),中剂量在第21天升高模型大鼠体重(P<0.05);高、中剂量能提升模型大鼠水平或垂直活动次数(P<0.01 或P<0.05);高、中剂量能提高模型大鼠蔗糖偏食度,降低CA1,CA3区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数(P<0.01或P<0.05),且高剂量能降低模型大鼠DG区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数,升高海马CA3区Bcl-2并降低Bax的表达(P<0.05)。结论: 百事乐胶囊能通过减少海马神经元的凋亡而达到抗抑郁的作用。     

逍遥散加味对青幼期抑郁模型大鼠抑郁行为及小胶质细胞活化的影响

目的 探讨逍遥散加味百合、合欢皮（百欢逍遥汤）通过调节小胶质细胞活化改善青幼期大鼠抑郁样行为的作用机制。方法 应用慢性不可预见性温和应激法（CUMS）创建青幼期（3~8周龄）抑郁大鼠模型，将60只青幼期SD大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组、百欢逍遥汤低、中、高剂量组（5.36、10.71、21.42 g·kg^-1），蔗糖偏好实验（SPT）检测大鼠糖水偏好值；强迫游泳实验（FST）检测大鼠不动时间；旷场实验（OFT）检测总路程、中心区域路程、水平穿越方格数及前肢离地垂直活动次数；Morris水迷宫实验（MWM）检测逃避潜伏期和穿梭平台次数；免疫荧光检测海马区M1型小胶质细胞极化标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和M2型小胶质细胞极化标志物巨噬细胞甘露糖受体（CD206）的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马组织iNOS、CD206和促炎细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6及抗炎细胞因子IL-4、IL-10的mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马iNOS和CD206的蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马炎症因子IL-4、IL-6的含量。结果 与正常组比较，模型组大鼠蔗糖偏好值明显降低（P<0.05），不动时间明显增加（P<0.05），运动和探索行为明显减少（P<0.05），学习、空间记忆水平明显降低（P<0.05），iNOS的mRNA和蛋白水平均明显提高（P<0.05），促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也明显提高（P<0.05）。与模型组比较，百欢逍遥汤干预后青幼期抑郁大鼠的蔗糖偏好值明显升高（P<0.05），不动时间显著缩短（P<0.01），运动和探索行为明显增加（P<0.05），学习和空间记忆能力显著提升（P<0.01），百欢逍遥汤高剂量组海马区iNOS阳性表达和蛋白含量显著降低（P<0.01），TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著下降（P<0.01）；百欢逍遥汤高剂量组CD206阳性表达显著增加（P<0.01），IL-4、IL-10水平显著上升（P<0.01）。与氟西汀组比较，百欢逍遥汤高剂量组蔗糖偏好率显著升高（P<0.01），不动时间显著减短（P<0.01），中心区域路程显著增多（P<0.01），学习和空间记忆能力显著增强（P<0.01），海马区iNOS阳性表达和mRNA水平明显降低（P<0.05），TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显较低（P<0.05，P<0.01）；CD206阳性表达显著更高（P<0.01），IL-4、IL-10水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 百欢逍遥汤对青幼期大鼠抑郁行为的改善作用与抑制海马区小胶质M1型极化，促进M2型极化有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元微小兴奋性突触后电流的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元微小兴奋性突触后电流(mEPSC)频率及幅度的影响,探讨其对海马神经元保护作用的可能机制。方法选用17~19 d胚胎大鼠离体培养海马神经元,神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。细胞随机分为空白对照组、抑郁组、糖尿病组、糖尿病并发抑郁症组、空白血清组、左归降糖解郁方组和阳性药组,培养10 d后加入皮质酮(50μmol/L)和/或高糖(15 mmol/L)建立细胞模型,给予药物血清干预18 h,采用全细胞膜片钳记录神经元mEPSC,比较各组神经元mEPSC频率和电流幅度。结果经NSE免疫细胞化学鉴定,培养7 d后神经元纯度达95%以上。与空白对照组比较,抑郁组、糖尿病组和糖尿病并发抑郁症组大鼠海马神经元mEPSC的频率和幅度均显著上升(P0.01);与糖尿病并发抑郁症组比较,左归降糖解郁方组和阳性药组大鼠海马神经元mEPSC的频率和幅度均显著下降(P0.01)。结论左归降糖解郁方可降低糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元mEPSC的频率和幅度,对海马神经元有保护作用。