脂肪细胞分化相关miRNA-hsa-miR-378生物信息学分析

【目的】 利用各种生物信息学工具分析hsa-miR-378转录调控、靶基因功能,以期为研究hsa-miR-378在人脂肪细胞分化过程中的功能与调控机制提供线索。 【方法】 应用UCSC Genome Browser、Promoter scan等在线工具,分析hsa-miR-378在基因组上下游10 kb 以内的CpG 岛分布情况、转录起始位置(TSS)、转录因子结合位置(TFBS)等;选择TargetScan、PicTar、MiRanda三种计算方法预测hsa-miR-378的靶基因,取三个预测结果的交集,并合并DIANA LAB-TarBase 6.0数据库的已验证靶标,对所得靶基因集分别进行GO注释描述、GO富集分析和pathway富集分析。 【结果】 hsa-miR-378可能具有独立的启动子,可能受C/EBPβ转录因子的调控;其预测靶基因集合富集于转录调控、蛋白质修饰、细胞分化等生物学过程和功能(P<0.01);并显著富集于TGF-β信号通路、Wnt信号通路等4个信号通路,以及甲状腺癌、系统性红斑狼疮等8个疾病通路中 (P<0.05)。 【结论】 通过对hsa-miR-378转录调控元件、靶基因的分析,为hsa-miR-378在人脂肪细胞中的功能与调控机制研究提供了线索和理论依据。     

生物信息学分析miRNA-152在非酒精性脂肪肝病中的可能作用

【目的】 总结miR-152已有研究结果,并预测其可能参与的生物学过程,为本研究小组深入研究miR-152在非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)形成和相关的调控机制奠定基础。 【方法】 PubMed检索miR-152相关文献,生物信息学预测miR-152的靶基因,并对其进行功能富集分析和信号通路富集分析。 【结果】 miR-152已在多个类型肿瘤、先兆子痫等疾病中有报道,但尚无参与脂肪肝的研究,分析结果显示miR-152靶基因功能集中于器官发育、细胞分化、代谢等多种分子功能和生物学过程;信号通路主要富集于多种肿瘤和细胞骨架蛋白、脂肪细胞因子、胰岛素信号及wnt信号通路中。 【结论】 miR-152在非酒精性脂肪肝病中尚未见报道,其预测的靶基因集合富集于多个生物学过程,为研究miR-152在非酒精性脂肪肝病中的作用提供了研究思路。     

has-miR-26b沉默载体的构建及验证

目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。     

FCCP对P19细胞向心肌细胞诱导分化的影响

目的:探讨羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(carbonyl cyanide p-trifluoromethoxyphenylhydrazone,FCCP)对P19细胞向心肌细胞诱导分化的影响?方法:在P19细胞向心肌细胞诱导分化的过程中加入5 umol/L的FCCP,同时设立阴性对照组,显微镜观察分化过程中不同时间点P19细胞形态的变化,并采用 real-time PCR和蛋白质印迹法分别检测GATA4?NKX2.5及cTnT在分化过程中的mRNA和蛋白表达水平?结果:FCCP处理组P19细胞形成的胚胎样小体较对照组体积小,结构较松散,形态不均一?在整个分化过程中,FCCP处理组GATA4 ?NKX2.5及cTnT基因均有表达,但整个动态表达过程较对照组延迟;Western blot结果显示,FCCP处理组GATA4?NKX2.5蛋白在第5?7?9天的表达量均较对照组低;在第11天,两组间GATA4蛋白的表达量差异无统计学意义;而NKX2.5在FCCP处理组的表达量仍低于对照组?FCCP处理组和对照组cTnT蛋白在分化第5?7天的表达量差异无统计学意义,而在第9?11天cTnT蛋白表达量FCCP组均较对照组低?结论:FCCP可抑制P19细胞向心肌细胞诱导分化的进程?     

结肠癌误诊肝硬化1例

1病历摘要 女,48岁。以腹胀痛2个月主诉人院。患者2个月前无明显诱因渐出现腹胀痛。既往无特殊。查：BP120／70mmHg,腹部膨隆,移动性浊音阳性,腹围74cm。B超示：大量腹水,脾门静脉内径0．4C1TI,肝功能示：ALT24U／L,AST30U／L,     

膀胱再生术排尿功能训练的护理体会

我院自1979年7月以来，应用自制可缩性水囊支架对膀胱肿瘤、结核性挛缩膀眈等患者行膀胱再生术。此方法是在膀胱被切除的位置上摆放水囊支架，在术后第12天从尿道技出，患者均可自行排尿，由于个体差异，可出现各种不同程度的排尿困难，因此排尿功能训练也是膀胱再生术成败的关键，现将其护理体会报告如下。一般资料本组25例，其中2例尿淋漓，3例完全不能自行排尿，20例有残余尿。护理体会：膀胱切除后的陷凹软组织，一般7一10天即形成结缔组织纤维膜。手术后12天拔除水囊支架，陷凹开始盛装尿液。让病人试行排尿并体会排尿动作。排尿困难一…     

FABP3过表达对斑马鱼胚胎心脏发育及线粒体DNA拷贝数的影响

目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育形态及线粒体DNA拷贝数影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼胚胎作为空白对照(C组)。收集受精后12、24、48、72hpf斑马鱼胚胎,利用体式显微镜观察其发育情况,并统计其死亡率;RT-PCR技术检测胚胎线粒体DNA拷贝数。结果 A组斑马鱼心脏在12、24、48、72hpf各时间点发育大体形态、死亡率与C组比较均无明显差异。A组24hpf时斑马鱼线粒体DNA的拷贝数高于C组(P<0.05);而在48、72hpf时,两组间斑马鱼线粒体DNA拷贝数无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育的形态无明显影响,对线粒体功能起保护作用。     

FABP3过表达对斑马鱼ROS和线粒体ATP含量的影响

目的 探讨脂肪酸结合蛋白3(FA BP3)过表达对斑马鱼胚胎活性氧(ROS)及线粒体ATP含量的影响.方法 构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼作为空白对照(C组).收集受精后24、48 hpf斑马鱼胚胎,采用流式细胞术和化学发光法分别检测斑马鱼ROS和ATP含量.结果 与C组相比,A组24 hpf时斑马鱼ROS水平降低,ATP含量增加(P＜0.05);而在48 hpf时,两组间斑马鱼ROS水平和ATP含量无统计学差异(P＞0.05).结论FABP3过表达对斑马鱼线粒体功能起保护作用.     

NYGGF4(PID1)基因过表达对脂肪细胞中脂肪酸合成酶表达的影响

目的 研究NYGGF4(PID1)基因过表达对脂肪细胞中脂肪酸合成酶(FASN)的影响.方法 体外培养稳定转染NYGGF4(PID1)基因的3T3-Ll前体脂肪细胞株[NYGGF4-pcDNA3.1(+)/myc-His B,A组]及空载体对照细胞株[pcDNA3.1(+)/myc-His B,C组],经1-甲基-3异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素方案诱导分化为成熟脂肪细胞后,采用RT-PCR和Western blot法检测FASN基因mRNA和蛋白表达水平.结果 与C组相比,A组成熟脂肪细胞FASN mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P＜0.05).结论 NYGGF4(PID1)基因过表达可能影响成熟脂肪细胞中脂肪酸的合成.