The Relationship between p38MAPK and Apoptosis during Paclitaxei Resistance of Ovarian Cancer Cells

To investigate the relationship between p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and cell apoptosis during the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cell lines, flow cytometry (FCM) and PI staining were employed to determine the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on the apoptosis of A2780/Taxol cells, a drug-resistant human ovarian carcinoma cell line. p38MAPK protein expression in SB203580-treated cells was immunochemically measured. The 50% inhibition concentration (IC(50)) of paclitaxel on A2780/Taxol cells was determined by MTT assay. MDR-1 mRNA, and expression of p38MAPK and phospho-p53 protein were detected by RT-PCR and Western blotting, respectively. The apoptosis rate of A2780/Taxol cells was (19.7+/-1.04)% 24 h after SB203580 treatment. A significant difference in apoptosis rate was found among experiment group, control group and untreated group (P<0.05). The relative reversal rate of A2780/Taxol cells to paclitaxel was (57.18+/-2.01)%. As compared with the control group and the untreated group, p38MAPK protein and MDR-1 mRNA in SB203580-treated cells was substantially decreased. The expression of p53 protein was significantly increased. It is concluded that p38MAPK pathway is related to paclitaxel resistance of ovarian carcinoma, and blockade of this pathway can promote the apoptosis of the drug-resistant cells and reverse the drug-resistance. Moreover, p38MAPK-mediated apoptosis in paclitaxel-resistant ovarian carcinoma cells depends on the activation of p53.     

Construction of Three-dimensional In Vitro Culture Model of Ovarian Carcinoma and the Study of Its Multicellular Drug Resistance

The resistance to chemotherapeutic drugs is one of the main cause of failure of the treatment of solid tumors. In ovarian carcinoma, both single cell and multicellular aggregates are found in patients’ ascitic fluid[1]. As our previous study showed that, in contrast to monolayer cell (MC) cultured in vitro, the solid tumors had similar bio-logical behaviors as compared with multicellular aggre-gates and displayed resistant to a wide variety of cyto-toxic agents[2, 3]. The examination of mult…     

控制性超促排卵中新发子宫内膜息肉的研究进展

控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)的成熟应用极大地改善了辅助生殖的妊娠结局,但如何进一步提高不孕患者的妊娠率进入了瓶颈。目前认为COH可能参与子宫内膜息肉(endometrial polyp,EP)的形成,而息肉可能干扰种植窗内膜的形态、功能,降低内膜容受性,并可能与反复胚胎着床失败有关,因此如何管理COH新发息肉成为关注的热点,以及针对此类患者移植策略的选择,是否需要冻胚移植,移植前是否需要处理EP以及如何处理,不同处理对妊娠结局的影响等相关问题。本文综述COH过程中新发EP的研究进展,旨在为不孕患者促排卵治疗提供参考,改善妊娠结局。     

玻璃化冻融胚胎过夜培养与妊娠结局的相关性研究

目的研究玻璃化冻融胚胎解冻后过夜培养与妊娠结局的相关性。方法回顾性分析2014年于哈尔滨医科大学附属第一医院生殖中心行冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)治疗的周期,共936例,依据胚胎移植前是否过夜培养,将其分为两组。A组为解冻后过夜培养移植组,共856例;B组为解冻当日移植组,共80例。依据过夜培养后胚胎是否生长,将A组继续分为A1组:全部胚胎均生长,共499例;A2组:部分胚胎生长,共301例;A3组:无胚胎生长,共56例。将A1组按移植胚胎个数分为Aa组:移植3个胚胎,共173例;Ab组:移植少于3个胚胎,共326例。比较各组患者年龄、内膜厚度、胚胎复苏率、临床妊娠率、种植率。结果 A组与B组临床妊娠率(35.86%、33.75%)和种植率(19.13%、13.95%)差异无统计学意义(P0.05)。A1组临床妊娠率和种植率(42.69%、24.03%)均高于A2(26.91%、12.94%)和A3组(23.21%、13.45%)(P0.05)。Aa、Ab组在临床妊娠率(41.62%、43.25%)和多胎率(26.38%、25.71%)方面差异无统计学意义(P0.05),Ab组较Aa组有更高的胚胎种植率(28.85%vs18.3%)和更低的3胎率(0.71%vs 5.88%)。结论过夜培养后继续生长的胚胎有更高的临床妊娠率与胚胎种植率,增加移植的胚胎个数不能改善临床妊娠结局。     

肝素结合表皮生长因子与卵巢癌顺铂化疗耐药性关系的研究

目的检测肝素结合表皮生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF)对卵巢癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响,探讨HB-EGF与卵巢癌顺铂耐药性的关系及机制。方法间歇大剂量冲击法诱导卵巢癌顺铂耐药细胞。使用HB-EGF siRNA转染敏感及耐药细胞,Real time PCR法检测转染效果。将实验细胞分为4组,卵巢癌敏感细胞株A 2780组(A组)、卵巢癌顺铂耐药细胞株A 2780/CDDP组(A/C组)、转染后A组(Asi组)、转染后A/C组(A/Csi组)。四甲基偶氮唑蓝比色法检测4组细胞增殖能力并计算对顺铂的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)。蛋白印迹法检测4组细胞中HB-EGF蛋白的表达情况,及耐药细胞转染前后表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC 1)蛋白的表达情况。结果 A/C组中HB-EGF蛋白表达量、顺铂IC50均较A组升高;与A组相比,Asi组HB-EGF蛋白表达量降低;与A/C组相比,A/Csi组中HB-EGF mRNA表达量下降,并且HB-EGF蛋白的表达量也降低,下降幅度比敏感组更大,同时A/Csi组顺铂IC50较A/C组下降;与A/C组相比,A/Csi组EGFR、ERCC 1蛋白的表达量均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论HB-EGF在卵巢癌顺铂耐药中的表达水平明显高于敏感细胞,抑制HB-EGF可以增强卵巢癌对顺铂的敏感性,提示HB-EGF与卵巢癌顺铂耐药性相关。此外,抑制HB-EGF的表达,可以下调卵巢癌顺铂耐药株中EGFR、ERCC 1蛋白的表达量,这可能是卵巢癌顺铂耐药的相关机制之一。     

卵巢子宫内膜异位囊肿及其手术对体外受精-胚胎移植的影响

目的：探讨卵巢子宫内膜异位囊肿及其手术对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）过程及结局的影响。方法回顾性分析238例 IVF 治疗的新鲜周期患者,分为非手术组、手术组、输卵管因素不孕组。比较3组的一般情况、基础卵巢内分泌状态、Gn 天数及用量、获卵数、MII 卵数、受精数、2PN、hCG 日激素、优质胚胎数及临床妊娠情况。结果手术组月经第3天基础激素 FSH 水平明显高于输卵管组和非手术组,差异有统计学意义;非手术组与输卵管组比较,差异无统计学意义。3组 Gn 天数、Gn 用量、hCG 日激素、移植日内膜厚度比较,差异均无统计学意义。非手术组及手术组的获卵数、MII 卵数、受精数、优质胚胎数低于输卵管组,差异有统计学意义;手术组与非手术组比较,差异无统计学意义。输卵管组婴儿安全出生比率明显高于非手术组（37.9％）,差异有统计学意义。输卵管组临床妊娠比率明显高于非手术组（39.4％）,差异有统计学意义。非手术组单侧巧克力囊肿患者54例,非巧克力囊肿侧的平均获卵数（4.1±2.8）,明显高于巧克力囊肿侧（3.1±2.3）,差异有统计学意义。手术组单侧巧克力囊肿剥除手术患者28例,非手术侧的平均获卵数（5.1±4.0）,明显高于手术侧（3.1±2.4）,差异有统计学意义。结论子宫内膜异位囊肿本身影响 IVF 过程和结局。手术剥除囊肿不能改善 IVF 的治疗结局。     

肝素结合性表皮生长因子在生殖医学的研究进展

肝素结合性表皮生长因子（Heparin-binding EGF-like growth factor ,HB-EGF）是表皮生长因子家族中的一员,由膜固定型（proHB-EGF）合成,proHB-EGF在特殊的金属蛋白酶作用下可水解产生sHB-EGF。proHB-EGF不仅是sHB-EGF的前体,而且本身是生物活性分子。proHB-EGF与膜蛋白形成复合体,此复合体定位于细胞间连接区,暗示proHB-EGF在细胞间的信号传导功能可能是通过近分泌的机制。在一个试管模型中,proHB-EGF表达为生长抑制活性,而sHB-EGF表达为生长激活活性。这些特性指出proHB-EGF和sHB-EGF是通过不同的通路起作用的。proHB-EGF和sHB-EGF在人体内的功能尚不明确,但他们在许多生理过程中起重要作用,HB-EGF在生殖内分泌领域的研究受到极大关注,如黄体细胞的分裂与凋亡、卵泡发育、胚胎移植等。     

自噬基因 LC3在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：研究自噬基因LC3在卵巢子宫内膜异位症患者中的表达情况,探讨其与卵巢子宫内膜异位症发生、发展的相关性及意义。方法用Real-time PCR方法,对正常子宫内膜组织以及卵巢子宫内膜异位症患者的在位内膜组织、异位内膜组织进行LC3 mRNA定量分析,探讨其与临床分期的关系。结果 LC3 mRNA在卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜组、异位内膜组和正常子宫内膜组中的表达存在显著差异（ P＜0.05）。异位内膜组表达显著低于正常内膜组,异位内膜组与在位内膜组相比表达明显下调（ P＜0.05） ,在位内膜组和正常内膜组间比较无明显差异（ P＞0.05）。 LC3 mRNA 在卵巢子宫内膜异位症不同临床分期中,异位内膜组Ⅲ～Ⅳ期LC3 mRNA表达显著低于Ⅰ～Ⅱ期（ P＜0.05）。在月经周期不同时相,正常内膜组增殖期的LC3 mRNA表达明显高于分泌期（ P＜0.05） ,卵巢子宫内膜异位症在位内膜组、异位内膜组增殖期与分泌期比较,差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论自噬参与了卵巢子宫内膜异位症的发病,自噬活性的改变可能与子宫内膜异位症的发展及病损程度相关。     

真核表达质粒pcDNA3．1／EGR-1的构建和体外效应研究

目的 构建早期生长反应基因(early growth response gene-1,EGR-1)真核表达载体,体外观察其对卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol的影响.方法 将EGR-1基因重组于pcDNA 3.1质粒中,稳定转染A2780/Taxol细胞,流式细胞仪检测转染对A2780/Taxol细胞凋亡的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察A2780/Taxol细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50);RT-PCR检测转染前后EGR-1及MDR1 mRNA的表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,成功构建质粒peDNA 3.1/EGR-1;RT-PCR显示,外源性EGR-1基因已整合于A2780/Taxol细胞并获稳定表达;转染使细胞凋亡明显增加(P<0.01);恢复A2780/Taxol细胞对紫杉醇药物敏感性;MDR1 mRNA表达显著下调.结论 转染EGR-1可降低A2780/Taxol凋亡的阈值和下调MDRl的表达,从而减少A2780/Taxol细胞对紫杉醇的耐受性.     

超重和肥胖对试管婴儿治疗的影响

目的研究超重与肥胖对试管婴儿(IVF)治疗过程中卵巢反应性、胚胎质量及妊娠结局的影响。方法将246例长方案新鲜周期IVF患者按世界卫生组织推荐的中国肥胖标准分为正常体质量组(A组)203例、超重和肥胖组(B组)43例,比较2组在促排卵及妊娠过程中的各项指标。结果 B组与A组相比,果纳芬(Gn)用量明显增加,使用时间延长,总卵泡数减少,10~15 mm卵泡数减少,获卵数减少,注射HCG日E2水平降低。婴儿安全出生率B组86%,低于A组的100%。受精率、优胚率、临床妊娠率、HCG水平、P4水平2组差异无统计学意义。结论超重和肥胖患者卵巢反应性和婴儿安全出生率低,但超重和肥胖对胚胎质量无明显影响。