嵌压固定法重建前交叉韧带动物模型(山羊)的手术配合

目的探讨嵌压固定法重建前交叉韧带动物模型(山羊)的手术配合方法。方法以山羊为模型,用阶梯状联合钻一次成形建立股骨倒置瓶颈状隧道,以髌腱-胫骨结节骨块为移植物,胫骨壁外口骨桥打结固定。做好手术前、中、后的配合,保障手术顺利结束。结果手术进程顺利,术后动物顺利康复,无麻醉死亡和术后早期感染发生。结论科学、细致的手术配合,可保证手术的顺利完成。     

快速成型骨组织工程支架的结构及力学仿生性能特征

目的:利用显微CT的成像技术及材料力学测试,观察多孔双相磷酸钙陶瓷支架的三维结构和力学仿生性能特征。方法:实验于2004-06/2005-12在清华大学新型陶瓷与精细工艺国家重点实验室、香港中文大学威尔士亲王医院骨与关节肌肉研究室和解放军总医院骨科研究所完成。利用三维凝胶叠层成型技术和发泡法复合的方法,制备仿骨多孔双相磷酸钙陶瓷支架,经显微CT扫描得到分辨率为20μm的断层图像,并按骨形态计量方法计算三维计量参数,并与急性脑死亡年轻人股骨头(由解放军总医院骨组织库提供,已签署捐献同意书)标本负重区松质骨样本的三维参数进行统计比较。最后对双相磷酸钙陶瓷支架两个互相垂直方向和松质骨样本的长轴方向进行压缩强度试验,计算压缩强度和弹性模量,并进行统计分析。结果:①双相磷酸钙陶瓷支架的小梁平均宽度和间距低于松质骨小梁(P<0.05);支架的小梁数目和各项异性程度高于松质骨样本(P<0.05);说明支架小梁在排列上呈现更为明显的各向异性特征。②双相磷酸钙陶瓷支架的体积分数、表面积体积比及结构模型指数与松质骨样本相比差异无显著性(P>0.05),两组样本均呈明显的板层结构。③力学测试结果显示双相磷酸钙陶瓷支架材料长轴方向的强度和弹性模量高于垂直方向(P<0.05),说明支架材料具有明显的方向性。长轴方向的强度低于正常松质骨样本,但弹性模量仅比松质骨样本弹性模量高20%(P<0.05)。结论:支架材料在空隙率和表面积方面具有很好的仿生性,利于细胞的黏附和长入。同时具有明显的方向性,提高了其在排列方向上的强度。弹性模量接近股骨头松质骨,具有较好的应力顺应性。     

软骨缺损组织工程修复组织中细胞凋亡的初步研究

目的:了解采用自体软骨细胞和异体软骨细胞构建的工程软骨修复软骨缺损后,修复组织中是否存在细胞凋亡,以及凋亡细胞分布的区域。方法:以自体软骨细胞和异体软骨细胞作为“种子细胞”与聚乳酸(PLA)载体构建工程软骨,修复兔膝关节股骨髁关节软骨全层缺损,进行细胞凋亡原位观察(TUNEL法)。结果:采用自体软骨细胞和异体软骨细胞构建的工程软骨均可以较好地修复关节软骨的缺损,修复组织为类透明软骨组织,修复组织与受区软骨的交界区以及修复组织的深层均可见细胞凋亡,异体软骨细胞组织工程修复组的修复组织表层也可见细胞凋亡现象。结论:修复组织中的细胞凋亡可能与组织的退行性变及钙化有关。     

异种关节软骨脱细胞基质支架的免疫反应研究

[目的]观察异种脱细胞软骨基质支架的免疫排斥反应,探讨其用于组织工程软骨支架的可行性。[方法]分别获取猪和新西兰大白兔的关节软骨,制作成:①猪脱细胞软骨支架;②猪未脱细胞软骨支架;③兔脱细胞软骨支架。将9只新西兰大白兔随机分成三组,分别在兔背部深筋膜与肌膜之间埋入:①异种(猪)脱细胞软骨支架;②异种(猪)未脱细胞软骨支架;③同种(兔)异体的脱细胞软骨支架,术后分组饲养。于术后1、2、4周分别取支架埋藏部位组织,进行普通病理观察及CD4+、CD8+T淋巴细胞免疫组织化学检测,并在术前和术后1周,2周,4周抽取外周血,分离检测血清中对支架产生的抗体的浓度(ELISA法)。[结果]所有新西兰大白兔无不良反应,细胞免疫显示异种(猪)和同种(兔)的脱细胞软骨支架及周围埋藏部位组织无明显淋巴细胞浸润,而异种未脱细胞组支架在埋入第4周时有明显淋巴细胞浸润,体液免疫显示术前后抗体浓度无明显差异(P0.05)。[结论]猪来源的脱细胞软骨支架用于异种移植时无免疫反应,从免疫学方面为异种脱细胞软骨支架的临床应用提供了可行性。     

Nell-1基因促进成骨作用的研究及应用进展

Nell-1是近年来新发现的一种具有促进成骨作用的细胞因子,动物实验及体外实验表明,Nell-1可特异性地促进成骨细胞成熟,促进矿化.其促分化作用强于促增生作用,可使新形成的骨组织更致密,力学强度更大.     

软骨细胞外基质源性取向支架与骨髓基质干细胞体外软骨组织工程的初步研究

Objective To fabricate cartilage extracellular matrix (ECM) oriented scaffolds and investigate the attachment, proliferation, distribution and orientation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) cultured within the scaffolds in vitro. Methods Cartilage slices were shattered in sterile phosphate-buffered saline (PBS) and the suspension were differentially centrifugated untill the micro- fiber of the cartilage extracellular matrix was disassociated from the residue cartilage fragments. At last the supernatant were centrifugated, the precipitation were collected and were made into 2%-3% suspension. Using unidirectional solidification as a freezing process and freeze-dried method, the cartilage extracellular matrix derived oriented scaffolds was fabricated. The scaffolds were then cross-linked by exposure to ultraviolet radiation and immersion in a carbodiimide solution. By light microscope and scan electron microscope (SEM) observation, histological staining, and biomechanical test, the traits of scaffolds were studied. After being labelled with PKH26 fluorescent dye, rabbit BMSCs were seeded onto the scaffolds. The attachment, proliferation and differentiation of the cells were analyzed using inverted fluorescent microscope. Results The histological staining showed that toluidine blue, safranin O, alcian blue and anti-collagen Ⅱ immunohistochemistry staining of the scaffolds were positive. A perpendicular pore-channel structures which has a diameter of 100 μm were verified by light microscope and SEM analysis. The cell-free scaffolds showed the compression moduli were (2.02±0.02) MPa in the mechanical testing. Inverted fluorescent microscope showed that most of the cells attached to the scaffold. Cells were found to be widely distributed within the scaffold, which acted as a columnar arrangement. The formation of a surface cells layer was found on the surface of the scaffolds which resembled natural cartilage. Coclusion The cartilage extracellular matrix derived oriented scaffolds have promising biological, structural, and mechanical properties.     

地震所致肢体软组织挤压损伤的特点与治疗分析

目的 探讨地震所致肢体挤压伤的软组织损伤特点和救治方法. 方法分析我院收治的202例肢体地震挤压伤的伤情特点,讨论治疗过程中的困难和问题,提出相应的处理措施. 结果 本组肢体挤压毁损伤16例(7.9%),开放性损伤60例(29.7%),闭合性损伤126例(62.4%).根据ISS评分,轻度损伤98例(34.7%),中度损伤54例(17.1%),重度损伤36例(44.9%),极重度损伤14例(3.3%),用SPSS 10.0软件对挤压时间与ISS评分的相关性进行秩和检验,差异有统计学意义(P<0.05).行筋膜腔切开减压32例,坏死肌肉切除术15例31次.8肢进行了14次残端清创术. 结论 地震软组织挤压伤伤情严重,挤压伤程度与打压重量和挤压缺血时间有关.肌肉坏死特点是坏死范围广泛而界限不清;同一块肌肉的坏死肌肉束与正常肌肉束交织在一起,坏死面积表面小深层大,肌肉深层坏死较浅层严重.坏死肌肉需多次手术切除,CRRT治疗对挤压伤创面处理与预后有明显的影响.     

猪来源关节软骨脱细胞支架的生物安全性研究

目的评价猪来源关节软骨脱细胞支架的生物安全性。方法取猪四肢关节软骨,分别制备脱细胞和未脱细胞软骨支架。在人软骨细胞中分别加入浓度为100%、50%、25%的脱细胞软骨支架浸提液[无血清DMEM培养液与支架表面积按1ml:(3～6)cm2比例混合,37℃静置72h],计算相对增殖率,判定其体外细胞毒性。0.9%NaCl与支架表面积按1ml:(3～6)cm2比例混合,37℃静置72h制备脱细胞软骨支架浸提液,分别用于全身急性毒性实验(小白鼠)、溶血实验、热原检测实验、皮内刺激实验(大白兔),分别观察其体内毒性、溶血程度、热原和刺激情况。在大白兔体内分别埋植脱细胞软骨支架与未脱细胞软骨支架,观察炎症反应和细胞免疫情况。结果猪脱细胞软骨支架浸提液对细胞生长无抑制作用,无细胞毒性。注射支架浸提液后小白鼠一般情况良好,无全身急性毒性反应。支架浸提液溶血程度为1.3%,无溶血作用。支架浸提液无热原存在且原发刺激指数为0分,皮内刺激实验阴性。脱细胞软骨支架与未脱细胞软骨支架相比免疫原性小,无炎症反应和淋巴细胞浸润。结论猪来源关节软骨脱细胞支架具有良好的生物相容性,将有可能成为理想的天然生物材料,具有良好的应用前景。     

组织工程化骺板软骨修复兔部分骺板损伤的实验研究

目的 利用组织工程骺板软骨修复兔骺板缺损,防止肢体畸形发生.方法 取2周龄兔骺板软骨细胞,体外复合牛关节软骨细胞外基质后植入4周龄兔右侧股骨远端骺板缺损处,左侧仅造成缺损,无填充物,作为自身空白对照.于每周行X线检查,4、8、12、16周时行组织学和免疫组化检查.结果 X线显示移植侧股骨畸形明显比对侧轻,骺板缺损处未见明显骨桥生成,被结构紊乱的软骨组织填充,具有一定的生长能力.空白对照侧骨桥形成,骺板早闭.组织学显示移植侧骺板较窄,排列紊乱.免疫组化结果显示移植处染色阳性.结论 组织工程方法培养出骺板软骨不仅可以阻止骨桥产生,还具有一定的生长能力,有望成为治疗骺板早闭的一种合适的材料.