敲低和敲除OPTN基因SKOV3细胞的构建及其对抗癌药物敏感性的影响

目的利用RNA干扰技术建立稳定敲低OPTN蛋白的人SKOV3细胞株和利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立稳定敲除OPTN蛋白的人SKOV3细胞株,并研究降低OPTN基因表达对细胞抗癌药物敏感性的影响。方法针对OPTN基因设计shRNA和sgRNA的序列,并与慢病毒载体质粒pGPU 6_GFP_Neo和敲除质粒PX 459载体连接产生重组载体。并将重组的质粒测序验证,将测序成功的重组质粒载体与包装质粒(psPAX 2、pMD 2.G)共转染293 T细胞进行病毒包装,收集病毒上清液并感染SKOV3细胞,获得稳定敲低和稳定敲除OPTN基因的SKOV3细胞株。RT-PCR检测敲低组OPTN基因的表达的变化,PCR检测敲除组的基因组DNA的变化,Western blot法分析检测OPTN蛋白的表达情况。MTT法检测DDP对卵巢癌细胞增殖的影响,qRT-PCR检测caspase3、Bax、Bcl-2的mRNA的表达情况,Western blot检测caspase3、Bax、和Bcl-2蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒载体和基因敲除载体,在SKOV...     

生物菌剂控制三七根腐病的初步研究

三七属多年生阴生植物,生长过程中病害发生频繁,其中三七根腐病是影响三七产量的最主要因素。目前对根腐病的防治尚没有成熟有效的方法,前人对该病的发生与防治作过一些研究,如罗文富等[1] 认为导致根腐病的病原有多种;伍敦祥[2 ] 、李忠义[3 ] 等探讨了部分药剂对该病的防治效果。本研究拟通过对生物制剂的应用研究,探索出一条生物防治的途径。1　材料与方法1 1　供试材料A 根腐净固剂(复合菌剂,云南农业大学省植物病理重点实     

知母醇/水提取物对α-淀粉酶抑制作用研究

目的:探讨知母醇/水提取物对α-淀粉酶的抑制作用。方法:以α-淀粉酶活性为评价指标,采用Van Looncs碘比色法分别对70%乙醇提取和水煎煮提取所得2种知母提取物的α-淀粉酶抑制作用进行研究。结果 :知母醇/水提取物对α-淀粉酶具有显著的抑制作用,且随浓度增大抑制作用增强。结论:知母醇/水提取物具有显著α-淀粉酶抑制作用,这可能是知母产生降糖作用的机制之一。     

蕲蛇抗栓酶注射液稳定性的研究

为获取对蕲蛇抗栓酶(acutobin)注射液的酶活有保护作用且使制剂稳定的保护剂配方，本实验设计了7个单方及四组正交实验共16个保护剂处方．以加入保护剂的蕲蛇抗栓酶为样品，未加保护剂的为空白对照．在37℃温度加速实验下，间隔一定时间观测蕲蛇抗栓酶制剂的酶活及澄明度的变化。结果，单方氨基酸和小肽类的加入使酶活力保存率提高，而多元醇类的加入使澄明度得到改善；复方保护剂的加入对蕲蛇抗栓酶的保护作用不明显。     

对乙型肝炎易感婴幼儿接种乙肝疫苗后的调查研究

对乙型肝炎易感婴幼儿接种乙肝疫苗后的调查研究刘芸，宋岩峰，余江（福建省福州东方医院）为保护ＨＢｓＡｇ携带者所生的婴幼儿，我们用ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ５项标志物及用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测ＨＢＶ ＤＮＡ，探讨ＨＢｓＡｇ阳性产妇所生婴幼儿接种血源乙肝...     

尿钙定性检查对各期佝偻病临床意义的探讨

佝偻病的诊断,主要依据症状和体征及X 线和血生化检查。为寻求简便易行的实验诊断方法,我们做了尿钙定性检查。一、尿钙定性检查方法,用苏氏法作了改进。1.试剂配制:草酸5克,草酸胺5克,冰乙酸10毫升,加蒸镏水至300毫升。2.检查方法:(1)操作:取离心后尿液加试剂2毫升充分混合,置37℃温箱3分钟后观察结果。(2)判断:(一)阴性,无白色混浊,示血钙     

产前超声诊断胎儿泄殖腔外翻合并颅脑异常1例报告

患者,女,26岁,G2P1,促排卵受孕,孕24周来我院行常规产前筛查.超声测值:双顶径 5. 4 cm (22w+2 ),头围 18. 8 cm ( 21w ),腹围 20. 6 cm ( 25w+1 ) ,肱骨长 3. 7 cm ( 23w+1 ) ,股骨长 3. 9 cm (22w+4),小脑横径1. 8 cm(1...     

具有抗癌作用鞣花酸的合成

用没食子酸和过硫酸钾作用合成了鞣花酸,它具有抗癌、抗氧化、抗突变活性.     

串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨

目的：构建高迁移率族蛋白B1（HMGB1）中细胞因子诱导片段1（CIF1）与串联亲和纯化（TAP）系统中纯化标签链霉亲和素结合肽（SBP）和钙调蛋白结合肽（CBP）序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法：采用PCR方法分别扩增出cBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b／CBPSBP—CIF。利用Ni—NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85％以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞RAW264．7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264．7细胞释放TNF-a的水平变化。结果：表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0．5ng／μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性（P〈0．05）,并且在CIF1蛋白浓度O～2．5ng／μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论：原核表达纯化了His—CBP—SBP—CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF—α的分泌表达。     

重组孕激素受体基因酵母法对南山茶子拮抗孕激素作用的研究

目的研究南山茶子拮抗孕激素作用。方法用系统溶剂分离法将南山茶子醇提物分成极性不同的组分，利用重组人孕激素受体基因酵母生物检测法筛选南山茶子拮抗孕激素活性部位。结果5个组分都表现出拮抗孕激素的效应，活性强弱依次为醋酸乙酯层〉正丁醇层〉石油醚层〉水层〉醇提物。结论醋酸乙酯部位可能为南山茶子拮抗孕激素的活性部位。