BALB/c小鼠神经母细胞瘤移植模型的建立及相关影响因素的研究

目的通过在BALB/c小鼠不同部位注射神经母细胞瘤(N2a)细胞建立转移瘤模型,探讨BALB/c小鼠影响造模成功的因素。方法 BALB/c小鼠以注射部位随机分为腹腔、颈背、腋下3个实验组。注射液为用完全培养液和处于对数生长期的N2a细胞配制成含1×107个/ml的细胞悬液,0.2 ml/只皮下注射。实验鼠首次注射在出生1-7 d进行,根据外观和触摸检查对确定未长瘤的鼠只在8-14 d进行再注射;并对仍确定未长瘤者在15-21 d时进行了第3次注射。记录BALB/c小鼠成瘤的潜伏期、成瘤率,及绘制正常鼠与荷瘤鼠的生长曲线等。结果在53只参与实验的BALB/c小鼠中,有50只完成了实验,存活率为94.34%;其中21只成功建模,成瘤率为42%。就接种部位来看,腹腔、颈背和腋下的成功率分别为46.2%,38.1%,33.3%;雌性的成瘤率为57.89%,高于雄性的32.26%(P<0.05);成瘤率随着接种年龄的增长而降低,3个年龄段的成瘤率分别为48.2%,35.7%,20%;荷瘤鼠的潜伏期最短的5 d,最长的在20 d以上,大多在11-15 d,三者分别占荷瘤鼠的比例为4.76%,9.53%和61.9%。荷瘤鼠最终因瘤体过大、极度消瘦而死亡。结论本实验利用完全免疫的BALB/c小鼠成功建立了神经母细胞瘤移植模型,为进一步研究神经母细胞瘤的发病机制和治疗提供了理想的实验材料。     

糖代谢异常对大鼠肝脏组织中巨噬细胞移动抑制因子及C-Jun氨基端激酶表达水平的影响

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）和C-Jun氨基端激酶（JNK）在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平的变化,探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝（NAFLD）的病理机制。方法 将60只大鼠随机分为糖耐量受损（IGT）模型组（n=20）、2型糖尿病（T2DM）模型组（n=20）、IGT对照组（n=10）及T2DM对照组（n=10）,高脂饲料喂养复制IGT大鼠模型,高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ）制备T2DM大鼠模型,采用TUNEL法检测各组大鼠肝脏细胞凋亡;实时荧光PCR 技术检测肝脏组织中MIF mRNA的表达; Western Blot方法检测肝脏组织中MIF 、Caspase-3、JNK蛋白表达及磷酸化JNK （p-JNK）的表达。结果 IGT大鼠及T2DM大鼠肝组织凋亡细胞明显增多;IGT组和T2DM组肝组织MIF基因表达较各自对照组明升高（P<0.01）,MIF 、Caspase-3、JNK蛋白表达及JNK磷酸化水平也明显升高（P<0.05或P<0.01）;与IGT组相比,T2DM组Caspase-3、MIF、JNK蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,而JNK磷酸化水平是明显升高（P<0.01）。结论 糖代谢异常大鼠肝组织的损伤以及非酒精性脂肪肝的发生可能与肝组织MIF 、Caspase-3、JNK表达水平的升高及JNK磷酸化水平的增强有关。     

实验动物从业人员的健康问题

目的了解实验动物从业人员的健康状况,探讨保障健康的防控重点。方法通过文献检索、实地考察,探讨实验动物从业人员所处的职业性暴露因素及其防控措施。结果实验动物从业人员职业性暴露因素主要有生物因素、化学因素、物理因素和心理因素4个方面。职业性暴露的潜在危害主要取决于以下3个方面：接触潜在危害的概率、接触潜在危害的数量、从业人员的心理状况。结论针对实验动物从业人员的职业性暴露因素,可通过采取严格执行相应的操作规程、加强监督管理和进行心理疏导等措施,确保实验动物从业人员的健康。     

乳腺癌癌旁病变流式细胞光度术、病理分析及与乳腺癌预后关系的探讨

本文报告有随防资料乳腺癌１０２例中合并之癌旁病变３３例，经流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定（２１例）和病理学检查及与术后生存期的关系做了统计学多元逐步回归法分析，结果显示乳腺癌患者合并癌旁病变中有癌变者术后生存期最短，仅有良性上皮增生者较长，未合并癌旁病变者最长（Ｐ＜０．０１），有癌旁病变者较未合并者年龄轻，其中伴有癌变者年龄最轻（ｒ＝０．２４６Ｐ＜０．０５）。有癌变者其ＤＩ值、Ｓ％均高于癌旁病变中无癌变者（Ｐ＜０．０１）。     

近交系中国地鼠山医群体遗传结构的随机扩增多态分析

目的应用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对近交系中国地鼠山医群体的遗传结构进行多态分析。方法采用30条10bp引物对中国地鼠山医群体的A家系和E家系共24个个体进行RAPD扩增,分析家系的遗传纯度,探讨两个家系的亲缘关系。结果30条随机引物对供试的24个个体产生255条谱带。单个引物扩增的谱带数是2~17条,平均8条。所有样品的相似系数0.9431~0.9955之间变动,平均相似系数为0.9749。根据扩增出的RAPD图谱,运用SPSS软件包中的Wardmethod法进行聚类分析。结论供试中国地鼠A家系和E家系两个家系间存在一定程度的差异,中国地鼠A家系和E家系分别先聚为一类,中国地鼠群体间的分子聚类关系与各群体间的亲缘关系基本一致。     

保证安全、有效实施胶原酶溶解术治疗椎间盘突出症的几点体会

胶原酶溶解术治疗颈、腰椎间盘突出症在国内已成为一项成熟的微创技术。由于该法安全、有效、操作简便且痛苦小患者易接受等特点，近几年该技术在全国各级医院，尤其是基层医院得到了广泛开展。但如何更好地保证和提高胶原酶化学溶解术的安全性和有效性一直是学术界关注的焦点。我院1998年开展该技术至今，治疗椎间盘突出症患者三千余例。现将几点体会报告如下：     

真核表达载体pcDNA6/myc-hisB-GFP的构建

目的 构建带绿色荧光蛋白(GFP)的pcDNA6/myc-hisB的真核表达载体. 方法 采用亚克隆的技术扩增得到GFP的开放阅读框序列,Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ双酶切后插入pcDNA6/myc-hisB,重组体经质粒PCR和酶切鉴定,并转染HEK 293T细胞后观察绿色荧光的表达,同时经Western blot检测GFP和标签蛋白myc的表达. 结果 PCR扩增得到特异的GFP开放阅读框序列,质粒PCR和酶切鉴定显示pcDNA6/myc-hisB-GFP构建成功,细胞转染结果 表明重组体可以表达GFP和myc蛋白.结论 获得带有绿色荧光蛋白的pcDNA6/myc-hisB-GFP的真核表达载体,为此载体的应用拓展了更大的空间.     

小鼠显微操作针的制作技术

目的探讨转基因小鼠制作中显微注射时所用移卵管、持卵针和注射针的最佳制作方案。方法通过酒精灯烧制和手拉以及通过P-97拉针仪设置不同的参数将薄壁硼硅玻璃管拉制成不同口径的移卵管、持卵针和注射针。结果按本方案制作的移卵针,持卵针和注射针用于小鼠受精卵的显微注射,实验过程顺利,效果非常好。结论该方法适用于小鼠受精卵显微注射的移卵管、持卵针和注射针制作。     

中国地鼠基因组微卫星富集文库的构建与分析

目的筛选中国地鼠微卫星位点,为中国地鼠种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础。方法中国地鼠基因组DNA经超声打碎,用2%琼脂糖凝胶电泳回收500～1000 bp的DNA片段,与SNX连接头连接,连接产物与生物素标记的14种微卫星探针变性及退火,再通过链亲和素偶联磁珠亲和捕捉,经吸附、洗涤及洗脱,然后以洗脱产物为模板,通过PCR扩增,与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌DH10B,构建中国地鼠微卫星DNA富集文库。结果测序结果发现,微卫星DNA序列的阳性克隆占70.3%。结论中国地鼠微卫星文库的建立和微卫星的筛选将为下一步进行中国地鼠遗传连锁图谱的构建、分子进化和系统发育研究提供大量的微卫星标记。     

不同时间注射PMSG和HCG对小鼠超排卵效果的影响

目的探讨不同时间注射孕马血清激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）对小鼠超排卵效果的影响。方法选用40只6周龄F1昆明小鼠,随机分成4组,分别在同一天的11：00,13：00,15：00,17：00注射PMSG5IU,48h后注射HCG5IU,然后与公鼠合笼;次日晨检查阴栓,阳性者于当日10：00处死取卵,计数受精卵的数量。结果11：00,13：00,15：00和17：00组平均每只获取可用受精卵9．8枚、24．8枚、11．5枚、4．7枚。结论在13：00注射PMSG,48h后注射HCG对小鼠超排效果最好。