铜绿假单胞菌对环丙沙星的抗药性和耐药性机制研究

目的研究铜绿假单胞菌对环丙沙星的抗药性(resistance)和耐药性(tolerance)机制,并予以区分。方法分离养殖场和医院铜绿假单胞菌33株,用微量肉汤稀释法测定铜绿假单胞菌临床分离株对喹诺酮类抗生素的最低抑菌浓度(MIC),筛选喹诺酮抗药菌5株;体外连续培养诱导铜绿假单胞菌标准菌株P.aeruginosa ATCC27853,得到对环丙沙星和头孢噻肟的高抗药性菌株PA34。检测及分析铜绿假单胞菌喹诺酮耐药决定区(QRDR)的基因突变;荧光比色法检测不同抗药性表型的铜绿假单胞菌外排泵活性;荧光定量RT-PCR法检测铜绿假单胞菌外排泵、跨膜转运蛋白及喹诺酮靶酶编码基因的mRNA表达水平。结果 临床分离的5株喹诺酮抗药表型的铜绿假单胞菌,其外排泵活性均显著高于标准菌株(P<0.01),外排泵、喹诺酮靶位酶编码基因的mRNA的表达量上调、跨膜转运基因表达量下调,DNA旋转酶A亚基gyrA基因均发生点突变Thr-83→Ile。PA34和这5株抗药性菌株表现一致,但其MIC远高于这5株抗药性菌株,主要由于PA34除了gyrA基因发生点突变Thr-83→Ile外,parC基因发生多点突变Glu-84→Gln、Gln-91→Lys,且跨膜转运基因表达量极低。结论 在喹诺酮类抗生素选择压力下,铜绿假单胞菌能发展多种可能的机制以消除抗生素对细菌代谢的损伤,对类似gyrA、parC基因突变称为抗药性,其他生理性适应机制称为耐药性,其抗药性突变和耐药性调节共同决定了抗药性表型,但对其加以区分并分别研究,更容易集中研究单纯的抗药性突变机制,采取相应的用药措施。     

药敏试验方法的局限性及改进的建议

以CLSI提出的两种细菌药敏试验方法(纸片扩散法和肉汤稀释法)和对"breakpoint"标准的拟定为例,基于菌群生长动力学和临床对抗菌药物选择的需要,分析现行药敏试验存在的问题,并就病原菌的生态学、breakpoint制定、药敏试验方法的规范和抗药性网络建设等方面提出建议。     

大肠杆菌在恩诺沙星作用下形态的变化

目的观察大肠杆菌在恩诺沙星作用下菌的形态变化,为临床诊断提供依据。方法利用荧光染色剂与流式细胞术相结合技术观察丝状菌的情况,利用激光共聚焦扫描显微镜观察丝状菌内的核酸情况。结果大肠杆菌在恩诺沙星药物作用下,变成丝状菌,且直径也明显增加,随着药物浓度增加,活菌数量明显减少。结论通过对菌连续的观察和进一步实验,证实了丝状菌的形成过程。丝状菌抗药性明显增加。     

p16INK4A和细胞凋亡

1 p16INK4Ap16INK4A是一个重要的细胞周期调节因子,它是细胞周期蛋白依赖激酶抑制子(CDKIs)之一。CDKs、CDKIs与CD-Ks的正调控因子cyclins之间的相互作用,通过对细胞周期各检验点的调控,控制着细胞周期的进程。p16INK4A通过与CDK4/6结合引起CDK4/6构象改变抑制cyclinD-CDK4/6的     

基于CNKI的表观遗传学在中医药研究中应用的文献计量分析＊

目的 为总结表观遗传学在中医药研究中的应用情况。方法 以CNKI为检索数据库，检索时间是建库时间至2019年1月9日，检索式是SU=("表观遗传"+"甲基化"+"组蛋白修饰"+"miRNA")*("中医"+"中药"+"针"+"灸"+"证")；采用Notexpress进行文献筛选；利用EXCEL2016进行文献计量分析，分析内容包括：各年份、各地区及各研究单位发表文献数量、文献类型、发表期刊、表观遗传机制内容。研究方向、所涉及疾病、研究方法。结果 近3年，中医药表观遗传研究的发文量达到高峰；发文量较多的集中在北京、广东、上海等发达地区；北京中医药大学是发文量最多的单位；大部分以期刊论文或学位论文的形式发表；发文量最多的是杂志中华中医药杂志；研究内容以miRNA、DNA甲基化为主；研究方向主要是中药药效机制、证候本质研究；研究的热点疾病是肿瘤、冠心病；临床研究及基础研究均有涉及。结论 表观遗传在中医药领域的应用尚属于探索阶段，无法达到精准的程度，建议加强机构间合作，使中医药表观遗传研究更加具体和深入。