川芎嗪对缺氧大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、p53基因表达的影响

【目的】观察川芎嗪对缺氧大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、p53基因表达的影响,探讨脑缺血后神经元损伤途径以及川芎嗪的保护作用机制。【方法】采用大鼠海马神经元体外原代培养法复制缺氧模型。海马神经元培养第14天,分为模型对照组及川芎嗪高、中、低剂量组(剂量分别为800、200、50μg/mL),分别持续缺氧1.5 h。采用流式细胞仪定量分析神经细胞凋亡率,原位杂交法检测海马神经元bcl-2、p53 mRNA的表达。【结果】川芎嗪中剂量组在缺氧1.5 h凋亡率与模型对照组及其他剂量组比较均有显著性差异(P<0.05)。对缺氧1.5 h大鼠海马神经元bcl-2、p53 mRNA原位杂交阳性信号进行分析,川芎嗪中剂量组bcl-2、p53 mRNA的表达与其他各组比较均有显著性差异(P<0.05)。【结论】在无血清培养条件下给予缺氧处理证实了凋亡是脑缺血后神经元损伤途径之一。一定剂量范围的川芎嗪具有抑制神经细胞凋亡的作用,而抑制p53基因的过度表达,上调bcl-2基因表达可能是其作用机制之一。     

延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞膜L型Ca~(2+)通道动力学的影响

【目的】观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞膜L型Ca2+通道动力学的影响,并探讨其防治再灌注损伤的作用机制。【方法】将清洁级成年SD大鼠48只随机分为6组:延胡索碱高、中、低剂量预处理组(剂量分别为1.0、0.5、0.2 g.kg-1.d-1),缺血预处理组,模型组和假手术组,结扎左冠状动脉前降支近段30 min后再灌注60 min,之后断头放血取心脏。采用酶解技术分离大鼠心室肌细胞,应用膜片钳细胞吸附式单通道电流记录与分析方法,观察记录心肌细胞膜L型Ca2+通道平均开放概率、平均开放时间及平均电流幅值。【结果】与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱预处理各组心肌细胞L型Ca2+通道平均开放概率显著降低(均P0.01),但平均开放时间比较差异无显著性意义(均P0.05);与缺血预处理组比较,延胡索碱预处理中、低剂量组可降低L型Ca2+通道电流幅值(P0.05)。【结论】延胡索碱预处理防治再灌注损伤的可能作用机制与其能减少心肌细胞膜上L型Ca2+通道的开放概率,降低钙内向电流,避免细胞内钙超载,从而保护心肌细胞有关。     

采用超低温液氮保存成年大鼠心室肌细胞的分离法

背景：进行一些以心肌细胞学为基础的检测技术,首先必需采用心肌细胞分离方法提取心肌细胞,由于使用器械的限制或分离方法的缺陷,往往提取不到足够数量和高质量的心肌细胞.采用超低温液氮保存的成年大鼠心室肌细胞分离法是解决这一技术问题有效的方法之一.目的：探讨成年大鼠心室肌细胞超低温液氮保存分离法制备心肌细胞悬液的可行性.设计：以实验动物为观察对象的心室肌细胞分离方法.单位：广州中医药大学第一附属医院心内科和广州医学院第二附属医院中医科.材料：实验于2001-10/2002-04在广州中医药大学第一附属医院内科实验室及细胞分子生物技术实验室完成.选用200～220 g SD大鼠30只;Krebs-Henseleit缓冲液（pH 7.4）：NaCl 118 mmol/L,KCl 4.8 mmol/L,MgSO41.2 mmol/L, KH2PO4 1.2 mmol/L,NaHCO3 25 mmol/L,Glucose 11 mmol/L.方法：麻醉大鼠开胸后,迅速取出心脏,置于冷Krebs-Henseleit液中,洗去残存的血液,弃去大血管、心房和右心室,将左心室肌剪成两块,然后置于含600 mL/L甘油的DMEM的冻存管中,程序冷冻,即4℃30min,-20℃30 min,-80℃30 min,最后保存于-196℃的液氮中备用.分离心肌细胞时,从液氮中取出冻存的左心室肌,迅速放入40℃水浴中解冻;用DMEM清洗心脏;将左心室肌剪碎成1 mm^3的小块,于冷KrebsHenseleit液中吹打10 min,以分离心室肌细胞;将含心肌细胞的悬液用100目网筛过滤,800 r/min,离心5 min.弃上清,0.1 mol/L磷酸盐缓冲液清洗沉淀2次,800 r/min离心5 min;必要时可再次吹打左心室肌碎片以获得更多的左心室肌细胞;将沉淀轻轻加入40 g/L的Ficoll上,400r/min离心4 min,弃上清,沉淀即为高纯度的杆状的心肌细胞.主要观察指标：是否分离出高纯度的符合质量的心肌细胞.结果：采用成年大鼠心室肌细胞超低温液氮保存分离法,成功地分离出足够数量符合质量的杆状心肌细胞.结论：运用液氮冻存的大鼠心室肌来分离心室肌细胞的方法是可行的,可作为以细胞学为基础一些分子生物学甚至基因组学、蛋白组学研究中的一种最基本的实验方法.该方法具有无需特殊昂贵设备、简单易行、消耗低廉、耗时短、适于大样本研究.     

不同剂量脑醒喷鼻剂对再灌注损伤脑组织自由基及一氧化氮合酶变化的干预

背景脑醒喷鼻剂由川芎和石菖蒲等中药组成,<神农本草经>谓其"主脑卒中入脑"之功效.目的观察脑醒喷鼻剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织自由基及一氧化氮合酶变化的影响,并与经典西药尼莫地平相比较.设计随机对照实验.单位一所中医药大学医院的内科.对象清洁级成年雄性Wistar大鼠70只,随机分为7组脑醒喷鼻剂高剂量组(高剂组),脑醒喷鼻剂中剂量组(中剂组),脑醒喷鼻剂低剂量组(低剂组),尼莫地平腹腔注射组(尼莫地平组),生理盐水喷鼻剂组(生理盐水组),溶酶喷鼻剂组(溶酶组),假手术组,每组10只.方法除假手术组外,其他6组阻断大鼠左侧大脑中动脉建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型.在造模前3 d及再灌注期间,脑醒喷鼻剂高、中、低剂组分别以含川芎嗪和石菖蒲生药5.4,2.7,1.08 mg/(kg·d)和1 35,0.54,0.27g/(kg·d)的剂量滴鼻,3次/d;生理盐水组和溶酶组以生理盐水、溶酶喷鼻剂0.18 mL/(kg·d)滴鼻,3次/d;尼莫地平组用尼莫地平注射液0.8 mg/(kg·d)腹腔注射,2次/d;假手术组按常规饲养至实验取材.用比色法检测丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮合酶.主要观察指标①不同剂量脑醒喷鼻剂及其他组动物脑组织丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮合酶活性变化.②将不同剂量脑醒喷鼻剂组与尼莫地平组做比较.结果造模时死亡8只动物,进入结果分析62只.①丙二醛含量高剂组、尼莫地平组明显低于生理盐水组[(0.92±0.32),(0.87±0.39),(1.35±0.34)μmol/g,P＜0.05],但高剂组和尼莫地平组间无差异.②超氧化物歧化酶活性高剂组、尼莫地平组明显高于生理盐水组[(35.64±11.67),(33.88±7.15),(20.70±3.88)NU/mg,P＜0.05],但高剂组和尼莫地平组间无差异.③一氧化氮合酶活性及超氧化物歧化酶活性高剂组、尼莫地平组明显高于生理盐水组[(4.64±1.22),(5.00±1.10),(3.08±1.12)mkat/g,P＜0.05],但高剂组和尼莫地平组间无差异.④中、低剂组和溶酶组超氧化物歧化酶及一氧化氮合酶活性有所升高,丙二醛含量有所降低,但与生理盐水组比较无差异.结论脑醒喷鼻剂高剂量组能防止脑缺血缺氧所致的脂质过氧化,使丙二醛生成减少,清除自由基损害,并增加一氧化氮合酶活性,对脑组织的缺血再灌注损伤有保护作用,与尼莫地平的作用相当.     

益气温阳活血利水药对心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能和脑钠肽的影响

目的观察益气温阳活血利水中药不同配伍对心肌梗死后心力衰竭（心衰）大鼠不同时相血清脑钠肽（BNP）和心功能的影响。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支,制作大鼠心肌梗死后心衰模型,并分别于心衰早期和心衰期使用益气温阳活血利水中药不同配伍进行干预,检测干预后大鼠心功能、血清脑钠肽水平。结果和假手术组相比,各模型组心功能明显下降,血清脑钠肽明显升高。干预后,在心衰早期和心衰期,益气温阳活血利水组心功能均明显优于其他中药组和阳性对照组（P〈0.05）,脑钠肽水平则明显低于其他中药组和阳性对照组（P〈0.05）。在心衰早期,活血利水组心功能稍优于空白组,脑钠肽水平亦较低,但均无统计学意义（P〉0.05）,而在心衰期则有统计学意义（P〈0.05）。结论益气温阳活血利水中药可降低心肌梗死后心衰大鼠血清脑钠肽水平并改善其心功能,在心衰早期和心衰期均以益气温阳活血利水相配伍为最佳。     

补肾益心片对高血压大鼠血液流变学的影响

[目的]探讨补肾益心片对高血压大鼠血压及血液流变学的影响.[方法]采用双肾一夹型(2K1C)高血压模型大鼠,随机分为高、低剂量中药组各13只,生理盐水(NS)组、尼群地平组各12只,10只假手术组作正常组.分别给高、低剂量中药组灌胃补肾益心片水溶液25g@kg-1@d-1,6.25g@kg-1@d-1,尼群地平组灌胃尼群地平10mg@kg-1@d-1,NS组灌胃NS 2 mL@d-1,假手术组正常喂食,各组测定鼠尾动脉血压.治疗4周后取血,测定全血粘度、红细胞聚集指数和变形性指数.[结果]高血压造模大鼠血压升高,高、中、低切全血粘度均较正常大鼠明显升高,红细胞聚集指数明显增加,红细胞变形指数明显降低.与生理盐水组比,治疗后补肾益心片组和尼群地平组血压均显著降低,全血粘度下降,红细胞变形指数增加(P＜0.05),中药高剂量组红细胞聚集指数显著下降(P＜0.05).[结论]补肾益心片可降低2K1C模型大鼠的血压,降低全血粘度,抑制红细胞聚集,改善红细胞变形性.     

脑醒喷鼻剂对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织超微结构的影响

目的 研究脑醒喷鼻剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织超微结构的影响。方法 将30只Wistar大鼠随机分为脑醒喷鼻剂高剂量组（高剂组），脑醒喷鼻剂中剂量组（中剂组），脑醒喷鼻剂低剂量组（低剂组），尼莫通腹腔注射组（对照组），生理盐水喷鼻剂组（NS组），假手术组（正常组），给药3d后，用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉建立左大脑中动脉栓塞（L-MCAO）模型。缺血1h再灌注24h后，取左额叶皮层脑组织作电镜观察。结果 脑醒喷鼻剂高，中剂组的神经细胞，胶质细胞及毛细血管等超微结构的损伤程度明显低于NS组，其中以高剂组损伤最轻，与尼莫通对照组无明显差别。结论 从组织形态学角度证实，脑醒喷鼻剂能减轻脑缺血大鼠大脑皮层神经组织的损伤，对脑组织的缺血再灌注损伤有明显的保护作用。     

解毒活血方对动脉粥样硬化易损斑块兔模型CD40及白细胞介素-1β表达的影响

[目的]探讨解毒活血方对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔模型CD40、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响.[方法]采用球囊损伤主动脉内膜联合高脂饲料法复制实验性动脉粥样硬化易损斑块兔模型,造模兔随机分为中药低、高剂量(剂量分别为40、80 g·kg-1· d-1)组,辛伐他汀(剂量为2.6 mg· kg-1.d-1)组,模型对照组,另设正常对照组以生理盐水灌胃,疗程10周.观察主动脉病理改变,检测血清sCD40L (soluble CD40L)、IL-1β及斑块CD40 mRNA、IL-1β mRNA表达.[结果]模型对照组呈易损斑块特点,中药高剂量组呈稳定斑块特征,各干预组均能不同程度降低血清sCD40L、IL-1β表达水平,高剂量解毒活血方能显著降低斑块内CD40 mRNA、IL-1β mRNA表达.[结论]解毒活血方能下调CD40L、IL-1β表达,具有一定稳定易损斑块的作用.