A30Pα-synuclein原核表达载体的构建及表达

目的构建A30Pα-synuclein基因的原核表达载体,分析其在大肠杆菌中的表达。方法酶切质粒pcDNA3.0-A30Pα-synuclein,获得A30Pα-synuclein基因的目的片段,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21。IPTG诱导后,经考马斯亮蓝染色和Western-blot分析目的蛋白的表达。结果 A30Pα-synuclein基因克隆至pGEX-6P-1载体中,考马斯亮蓝染色及Western-blot检测到A30Pα-synuclein蛋白在BL21中的表达。结论成功构建A30Pα-synuclein的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达了A30Pα-synuclein融合蛋白,为进一步研究A30Pα-synuclein在帕金森病中的作用奠定了良好基础。     

胃癌组织中核因子κB和环氧合酶2的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的 观察胃癌组织中核因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)的表达,探讨二者与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系.方法 采用免疫组织化学染色法(SP法)检测10例正常胃黏膜组织及50例胃癌患者手术切除胃黏膜组织中NF-κB和COX-2的表达,用快速尿素酶诊断法和13C呼气试验两种方法检测胃癌患者H.pylori感染状况,分析NF-κB和COX-2的表达及H.pylori感染与胃癌的关系.结果 胃癌组织NF-κB和COX-2的阳性表达率[分别为74%(37/50)和86%(43/50)]显著高于正常胃黏膜组织(分别为0/10和1/10),差异有统计学意义(P＜0.01).胃癌组织中NF-κB与COX-2的表达呈正相关(r=0.524,P＜0.01).H.pylori感染者胃癌组织中NF-κB、COX-2的阳性表达率[分别为93%(27/29)和86%(25/29)]显著高于未感染者[分别为52%(11/21)和48%(10/21)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胃癌组织中NF-κB和COX-2的表达增加,且NF-κB与COX-2表达呈正相关;H.pylori感染可能上调胃癌组织中NF-κB、COX-2的表达.     

胃癌组织中NF-κB和COX-2的表达及临床意义

目的：探讨核因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的表达与胃癌发生发展的关系，为开展以NF-κB和COX-2为靶标的胃癌防治提供理论依据。方法：采用免疫组织化学染色法（SP法）检测对照组10例正常胃黏膜及实验组50例胃癌组织中NF-κB和COX-2的表达情况，分析它们在不同组织中的表达、相互关系及与胃癌的关系。结果：实验组NF-κB和COX-2的表达阳性率明显高于对照组（P<0.001）；NF-κB表达与胃癌淋巴结转移、分化程度有关（P<0.05），COX-2 表达与淋巴结转移有关（P<0.05）；胃癌组织中NF-κB与COX-2的表达呈正相关关系，相关系数r=0.5238 （P<0.01）。结论：NF-κB和COX-2参与胃癌的形成，且与胃癌的侵袭、转移及预后有一定的关系。NF-κB与COX-2表达呈正相关，提示它们在胃癌的发生发展中起协同作用。     

TfR、sTfR表达与2型糖尿病大鼠大血管病变的关系

目的 研究2型糖尿病(T2DM)大鼠伴大血管病变时转铁蛋白受体(TfR)、可溶性转铁蛋白受体(sTfR)表达,探讨TfR、sTfR表达与T2DM大鼠大血管病变的关系.方法 将20只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组各10只.3个月后生化检测血糖(BS)、血脂各项指标；计算胰岛素敏感指数(ISI)；ELISA法检测血清sTfR水平；RT-PCR法检测平滑肌细胞TfR mRNA表达；透射电镜观察主动脉平滑肌细胞超微结构改变.结果 ①模型组BS、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平均明显高于对照组,而ISI、高密度脂蛋白(HDL)明显低于对照组(P＜0.05)；②模型组sTfR值较对照组明显升高(P＜0.05),模型组TfR mRNA表达较对照组明显升高(P＜0.05)；③sTfR水平与BS、HbA1c、INS呈明显正相关(P＜0.05),与HDL呈负相关(P＜0.05)；④模型组模型组可见主动脉壁平滑肌细胞成退行性改变,核内电子密度升高,异染色质增多,胞质内大量线粒体出现明显的嵴断裂、空泡样变、髓鞘样变,高尔基复合体内出现大空泡.结论 TfR水平升高可能是糖尿病大血管病变的原因之一.     

复方中药合剂对肾性贫血患者红细胞系及铁代谢的影响

目的观察使用复方中药合剂治疗肾性贫血对患者红细胞系及铁代谢的影响。方法对69例肾性贫血患者给予复方中药合剂治疗连续8周,同时补充铁剂、叶酸和维生素B12;在治疗前和治疗8周后分别取血测促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）及血清转铁蛋白受体（soluble Transferrin Receptor,sTfR）血清浓度,并行骨髓穿刺进行骨髓显微图像分析和铁染色、部分骨髓标本行电镜观察,在治疗前及治疗后每2周分别取血测RBC,Hb,HCT,Ret％和SI,SF水平;观察治疗前后骨髓形态学变化,并对骨髓增生情况、sTfR、E％、各类幼红细胞比率、G／E、外铁、铁粒幼细胞百分数等进行自身对照分析。结果①患者在治疗后2周Ret％,RBC,Hb,HCT等开始上升,8周时比用药前有显著增高（P〈0.01）,总有效率89.85％。②治疗前骨髓显微图像4例（8％）示骨髓增生减低,可见棘细胞和环状红细胞,电镜下可见中幼红细胞核周间隙增宽,晚幼红细胞的胞膜厚薄不均匀;治疗后骨髓红系增生较治疗前明显活跃,各类幼红细胞比率及E％均显著升高（P〈0．01）,其中以晚幼红增生最为明显。③治疗后sTfR显著升高,而其它铁指标均明显降低。结论①对慢性肾脏疾病3—5期的患者给予复方中药合剂治疗可有效地刺激骨髓红系增生,证实该中药合剂治疗肾性贫血疗效显著。②该中药合剂治疗后红细胞形态有明显改善。③sTfR作为一种新的铁参数,不仅准确地反映机辩扶贮存状况,而且也反映机体骨髓红细胞的增殖活性。     

青心酮对ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞5-脂氧合酶的影响

目的 观察青心酮防治ApoE(-/-)小鼠主动脉粥样硬化病变(atherosclerosis,AS)与5-脂氧合酶的关系.方法 传代培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分成4组:正常对照组,模型组,青心酮组,辛伐他汀组.收集各组细胞蛋白,应用Western-blot 检测5-脂氧合酶含量;收集上清液,用ELISA检测白三烯B4(leukotriene B4,LTB4).以C57BL/6小鼠作正常对照组,24只雄性ApoE(-/-)小鼠随机分成3组:模型组(等量乙醇),青心酮治疗组(20 mg·kg-1·d-1),辛伐他汀治疗组(20 mg·kg-1·d-1),给药8周.所有实验小鼠饲以普通饲料至16周.取血检测LTB4,剪取主动脉根部行组织切片,HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况;剪取主动脉根部斑块组织,Western blot 法测定斑块中5-脂氧合酶水平.结果 青心酮处理后LTB4降低,5-脂氧合酶含量减少,AS病灶形成数目、面积减少.结论 青心酮能减轻ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变,可能与其抑制5-脂氧合酶,减少LTB4有关.     

梓醇抑制AGEs诱导的EA.hy926细胞炎症反应及RAGE表达

目的:研究梓醇对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导的EA.hy926内皮细胞炎症反应的抑制作用并探讨其可能机制。方法:将常规培养的EA.hy926细胞随机分为对照组、梓醇对照组、AGEs组以及梓醇高剂量(0.5 mmol/L)、中剂量(0.25 mmol/L)和低剂量(0.05 mmol/L)保护组。激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧簇(ROS)的生成;RT-PCR和Western blot检测细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及晚期糖基化终产物受体(RAGE)的mRNA及蛋白的表达。结果:梓醇保护组ROS生成均明显减少,MCP-1、TNF-α和VCAM-1的mRNA及蛋白表达均显著降低,RAGE蛋白表达明显受抑制,且呈剂量依赖性(P0.05)。结论:梓醇能够有效抑制AGEs诱导的EA.hy926细胞内氧化应激,减轻炎症反应,其机制可能与其降低RAGE表达有关。     

提高基础医学实验技能的探索与实践

实验教学是高等医学教育的重要环节,是理论联系实际的桥梁,在医学教育中具有举足轻重的作用。基础医学实验技能大赛是培养医学生实践能力的重要手段,也是提高大医学生综合能力有效途径。本文介绍了潍坊医学院基础医学实验技能大赛的组织实施,实践证明,基础医学实验技能大赛调动了学生学习的积极性,对学生动手能力的提高和综合能力的培养起着有力的促进作用。     

降糖调脂灵对2型糖尿病大血管病变的保护作用研究

目的研究降糖调脂灵对2型糖尿病(T2DM)大鼠大血管病变的保护作用,并探讨其可能机制。方法将40只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为4组:对照组、模型组、双胍组、中药组,各10只。对照组大鼠喂以标准饲料且不做任何处理;其余各组大鼠通过高糖高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病,继续喂以高糖高脂饲料。同时双胍组大鼠给予二甲双胍134 mg.kg-1.d-1灌胃,中药组大鼠给予降糖调脂灵690 mg.kg-1.d-1灌胃;而对照组和模型组给予相当量的0.9%氯化钠注射液灌胃。3个月后检测各组大鼠血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素、血脂〔总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)〕水平;计算胰岛素敏感性指数(ISI);酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)水平;RT-PCR法检测平滑肌细胞转铁蛋白受体(TfR)mRNA表达量;透射电镜观察主动脉平滑肌细胞超微结构改变。结果 (1)4组大鼠血糖、HbA1c、胰岛素、ISI、血脂、sTfR水平及主动脉壁平滑肌细胞TfR mRNA表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中模型组大鼠血糖、HbA1c、胰岛素、TC、TG、LDL、sTfR水平及TfR mRNA表达量高于对照组,ISI及HDL水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);双胍组大鼠胰岛素、血脂、sTfR水平及mRNA表达量与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而中药组大鼠血糖、HbA1c、胰岛素、TC、TG、LDL、sTfR水平及TfRmRNA表达量均低于模型组,ISI及HDL水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)模型组大鼠可见主动脉壁平滑肌细胞成退行性改变,细胞核内电子密度升高,异染色质增多,细胞质内大量线粒体出现明显的嵴断裂、空泡样变、髓鞘样变,高尔基复合体内出现大空泡。双胍组大鼠主动脉壁平滑肌细胞也出现类似变化。中药组大鼠主动脉壁平滑肌细胞损坏轻微,但也有少量平滑肌细胞的线粒体、高尔基复合体和粗面内质网呈现退行性改变,可见部分空泡变、髓鞘样变线粒体和空泡变的粗面内质网。结论降糖调脂灵对T2DM大血管病变具有保护作用,其机制可能与其降低血糖、血脂,从而改善铁代谢紊乱有关。