半乳糖凝集素-1的表达纯化与生物活性分析

目的：获得重组人半乳糖凝集素-1（galectin-1）蛋白,并分析其生物学活性。方法：PCR方法扩增目的基因,将其克隆到原核表达载体pET21a（＋）,获得重组质粒pET-galectin;将其转化至表达宿主菌BL21（DE3）中,用IPTG进行诱导,获得目的蛋白的表达;采用Ni-NTA亲和层析柱对目的蛋白进行纯化,用红细胞凝集试验分析其生物学活性。结果与结论：成功构建重组原核表达质粒pET-galectin,目的蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱一步纯化后,得到的蛋白纯度可达80%以上。红细胞凝集试验结果表明获得的重组蛋白具有较好的生物学活性,可进一步用于半乳糖凝集素-1功能研究。     

抗耐药菌中草药成分的研究进展

耐药菌,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的出现是抗生素广泛应用于临床后产生的越来越严重的难题：普通抗生素难以奏效,虽然万古霉素是MRSA感染的最有效的抗生素,临床上广泛应用可导致严重的不良反应,而且对万古霉素耐药的细菌已见报道。由抗生素应用引起的耐药性问题使国内外医药界把注意力转向具有抗菌活性的中草药,如何从中草药中筛选出抗耐药菌的活性成分引起更多的关注,本文介绍抗耐药菌中草药成分的研究进展。     

中草药成分抗缺血性脑卒中药理作用的研究进展

脑卒中后脑损伤涉及多种机制,临床上一般用溶栓治疗来解除梗死,建立缺血区域血流再灌注,而对于缺血引起的脑组织损伤尚无有效治疗药物。中药因具有多治疗靶点而日益受到人们的关注,从中草药中筛选出治疗缺血性脑卒中的活性成分具有良好的开发前景。     

结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb。方法:采用杂交瘤技术,获得了11株针对结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的5株进行了小鼠腹水的制备及相关鉴定。结果:5株mAb的腹水效价达到1∶32 000～1∶512 000,将这5株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)均为IgG1/κ型,ELISA结果显示制备的mAb与结核分枝杆菌Rv3881c抗原可发生特异反应。结论:制备了抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb,为结核分枝杆菌Rv3881c生物学功能的研究奠定基础。     

金黄色葡萄球菌黏附因子ClfA作为金黄色葡萄球菌疫苗组分的研究

目的研究黏附因子丛生因子A（clumping factor A,ClfA）在金黄色葡萄球菌（SAU）不同菌株中的分布情况,为开发具有广泛保护效果的SAU疫苗奠定基础。方法采用PCR法扩增目的基因,构建重组质粒,以大肠杆菌BL21（DE3）为表达宿主,对目的蛋白进行表达、纯化。PCR及点杂交法检测ClfA在不同菌株中的分布情况。结果得到纯度较高的目的蛋白,PCR及点杂交结果显示ClfA存在于菌株USA300,而在菌株546、1884、1885中并无分布。结论 ClfA在SAU各菌株中分布不广泛,可能难以作为具有广泛保护效果的SAU疫苗组分。     

近20年来药用植物成分体外抗HBV活性的研究进展

我国具有庞大的乙型肝炎患者群,同时又是药用植物资源十分丰富的国家.从药用植物中筛选具有抗乙肝病毒(HBV)活性的天然目标化合物,对以开发出抗病毒的高效价廉药物,对控制乙肝流行具有非常重要的意义.本文对近20a来药用植物的木脂素、多酚、生物碱、萜类、黄酮和香豆素类等70余个化学成分体外抗HBV活性的研究进展进行评述,以供参考.     

抗炭疽保护性抗原人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达和活性研究

目的 在CHO细胞中表达抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原(rPA)人-鼠嵌合抗体,并对其活性进行分析.方法 RT-PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻、重链可变区基因,分别与人Kappa型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建了轻重链嵌合抗体基因.将轻重链嵌合抗体基因克隆表达载体上,构建了嵌合抗体的双启动子表达载体pSeeTag-5E1.将pSecTag-5E1转染CHO-dhfr(DG44)细胞,撤掉胸腺嘧啶和次黄嘌呤并不断提高氨甲蝶呤(MTX)的浓度,筛选表达量高的克隆,扩大培养,收集上清,并纯化,用纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western blot、抗原结合活性、体外细胞保护试验和动物试验.结果 在MTX的浓度为5×10~(-8)mol/L时,获得稳定表达细胞株,表达量为18 mg/L.结论 成功在CHO-dhfr(DG44)细胞中表达了具有中和活性的抗rPA人-鼠嵌合抗体,为制备抗炭疽的被动免疫制剂奠定了良好的基础.     

人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性。结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础。     

人参皂甙Rg3联合槐耳颗粒对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

目的：探讨人参皂甙Rg3联合槐耳颗粒对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法实验小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺模型组、人参皂甙Rg3组以及联合用药组（人参皂甙Rg3＋槐耳颗粒）。正常对照组腹腔注射生理盐水,其余各组注射环磷酰胺建立免疫低下模型。正常对照组与模型组每日灌胃生理盐水,人参皂甙Rg3组每日灌胃200mg／kg人参皂甙Rg3,联合用药组每日灌胃100mg／kg人参皂甙Rg3和900mg／kg槐耳颗粒,7d后测定小鼠免疫功能。结果与模型组比,人参皂甙Rg3组及联合用药组的脾指数、胸腺指数、吞噬指数、血清溶血素含量、淋巴细胞转化率明显提高,联合用药组效果更显著。结论人参皂甙 Rg3联合应用槐耳颗粒可改善免疫抑制小鼠的免疫功能,两种药物有一定的协同辅助作用。