shRNA沉默RAGE基因表达对前列腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:构建针对人晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products , RAGE)基因的特异性短发夹RNA(small hairpin RNA, shRNA)表达载体,探讨其对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用.方法:设计并合成4种针对RAGE基因的特异性短链寡核苷酸,构建含shRNA RAGE的表达载体,转染高表达RAGE的亚克隆细胞株sub DU145-2C1.荧光显微镜下观察细胞转染后的情况,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative -PCR, RFQ-PCR)检测转染shRNA后对RAGE mRNA表达的影响,Western印迹法检测对RAGE蛋白表达的影响,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,划痕实验观察对细胞迁移能力的影响.结果:构建获得的shRNA RAGE表达载体能够有效抑制RAGE基因的表达(P<0.05),其中以shRNA RAGE -1(R1)的抑制作用最强,其对RAGE mRNA表达的抑制率为84%,对蛋白表达的抑制率为27%.细胞增殖结果显示,转染shRNA RAGE后细胞增殖能力明显降低;而细胞迁移能力则无明显变化.结论:shRNA RAGE能有效下调RAGE基因的表达水平,抑制细胞增殖.     

胃肠道间质瘤的误诊因素分析及鉴别

目的:分析胃肠道间质瘤（GIST）的影像误诊因素及鉴别要点。 方法:搜集术前误诊为GIST患者11例,GIST患者术前未正确诊断2例作为此次研究的对象,对所有患者的影像资料进行回顾分析。13例患者均有手术病理,进行MSCT扫描,观察CT影像特征,分析误诊或未正确诊断GIST的影像学因素及鉴别价值。 结果:13例误诊患者中,2例为腹膜后神经鞘瘤、2例为低分化腺癌、2例为异位胰腺、1例为类癌、1例为平滑肌瘤、1例为未分化肉瘤、2例为转移性癌、另外2例小肠间质瘤术前未正确诊断。误诊与肿瘤发生部位、大小、血供来源、生长趋势、观察方法等因素有关。 结论:GIST有一定的影像特点,降低胃肠道间质瘤的误诊,三维重建-肿块准确定位是重中之重,其次应仔细观察肿块细微关键征象,注意肿块血供来源及生长趋势也是鉴别要点。     

嗅敏灵(嗅剂)治疗慢性鼻炎疗效观察

嗅敏灵(嗅剂)是以辛夷花、薄荷等中药为主的治疗鼻炎的一种新型鼻嗅剂.为客观地评价其临床疗效,我科2002年12月～2003年7月对40例慢性单纯性鼻炎、肥厚性鼻炎及变应性鼻炎患者进行了临床验证.医师评估的总有效率为97.5%,患者评估的总有效率为92.5%.现将临床资料综合报道如下.     

值得关注的线粒体12SrRNA C1494T突变——药物敏感致聋靶点

目的探讨线粒体12SrRNA C1494T突变与氨基糖苷类药物致聋的临床表型特征的相关性,警示临床值得关注的又一药物致聋敏感靶点。方法对遗传性聋资源库中两个具有母系遗传特征的耳聋大家系成员进行病史、体检、纯音测听及听性脑干反应检查并绘制系谱图。提取耳聋患者的外周血基因组DNA,运用聚合酶链扩增反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对耳聋患者线粒体12SrRNA基因1228~1984位序列(涵盖12SrRNA1494及1555位点)进行扩增,扩增产物纯化后进行限制性酶切鉴定或测序,运用DNAStar软件对测序结果进行比对分析。结果两个家系分别为一个四代相传的母系遗传家系(196家系)和一个三代相传的母系遗传性耳聋家系(1802家系)。196家系发现8名12SrRNA C1494T携带者,其中3名在接触氨基糖苷类药物后出现重度耳聋,成为聋哑人(Ⅱ:2、Ⅱ:5、III:2);2名无耳毒性药物用药史者(Ⅱ:9、Ⅱ:7),表现为高频听力损失,言语发育正常;1名患者25岁时应用链霉素后致重度耳聋,现交流困难(Ⅱ:3);1名突变者现为2岁幼儿,目前对声音反应正常(Ⅳ:1);1名为听力正常人(Ⅲ:3),现年28岁。1802家系发现12名耳聋患者,其中7名患者为母系后代,全部为聋哑,配偶聋哑人5名。1802家系中母系后代成员10名(3名男性,7名女性),其中7名为聋哑患者(2名男性,5名女性),3名为听力正常人(1名男性,2名女性)。7名母系后代患者中有4名有明确的耳毒性药物用药史(奎宁、链霉素或庆大霉素),3名用药史不详。2名母系患者进行基因检测发现线粒体12SrRNA C1494T突变。结论本研究通过两个线粒体12SrRNA C1494T突变家系警示线粒体12SrRNA C1494T突变又是一个值得非常关注的药物敏感作用靶点。具有此突变的患者接触氨基糖苷类药物会产生重度耳聋,而未接触该药物者可以是正常听力或是高频听力下降者。临床要高度警示线粒体12SrRNA C1494T突变患者,早发现、早预警可避免聋哑患者的出现。     

非综合征型感音神经性聋易感聋病基因检测分析

目的 探讨在病因不明的非综合征型感音神经性聋患者中进行GJB2基因和线粒体12S rRNA A1555G突变检测的临床意义.方法 对317例非综合征型感音神经性聋患者(排除了明确诊断为前庭导水管扩大和听神经病患者),进行线粒体12S rRNA A1555G突变和GJB2基因突变检测.应用聚合酶链反应扩增线粒体12S rRNA基因和GJB2基因编码区,限制性内切酶Alw26 I检测线粒体DNA A1555G突变,对酶切提示A1555G突变的病例和全部GJB2基因扩增产物进行DNA测序.结果 18例为线粒体12S rRNA A1555G突变,阳性率为5.68%(18/317).GJB2基因序列分析发现致病突变纯合和复合杂合者为37例,阳性率为11.67%(37/317),致病突变杂合携带者为17例,检出率为5.36%.317例患者中,17.35%[(18 37)/317]的耳聋患者的致病原因为线粒体12S rRNA A1555G突变和GJB2基因突变导致.结论 对病因不明的非综合征型感音神经性聋患者进行GJB2基因和线粒体12S rRNA A1555G突变的检测,有助于病因诊断.     

中国西北地区耳聋家系中GJB2基因突变频率分析

目的 分析在中国西北地区耳聋家系人群与散发人群之间GJB2基因突变频率的差异性,探讨GJB2基因突变在西北地区耳聋家系人群中的发生频率及其特点.方法 收集中国西北地区29个家系的87例耳聋患者、散发非综合征型感音神经性耳聋患者169例及听力正常人117例血样,提取外周血DNA后,进行聚合酶链反应扩增GJB2基因编码区,将扩增产物进行直接测序.运用DNAStar5.0软件进行测序结果分析,对各组CJB2基因突变频率进行统计学分析.结果 87例家系耳聋患者中存在GJB2致病突变2S例,占32.18%;169例散发耳聋患者中GJB2基因致病突变24例.占14.20%;117例正常对照人群发现GJB2基因突变携带者5例,占4.27%.结论 GJB2基因突变在中国西北地区家系耳聋患者与散发耳聋人群的发生频率存在统计学差异(X2=11.474,P<0.05),对存在CJB2基因突变的耳聋患者进一步对其家系成员重点进行该基因的突变筛查具有重要意义.     

中药复方治疗实验性慢性胃炎的研究进展

按照作用机制的不同,分别从中药复方对实验性慢性胃炎病理形态学、胃液生化、胃肠肽类激素、胃黏膜屏障和胃黏膜血流量、幽门螺杆菌、细胞免疫、细胞因子、自由基代谢、增殖细胞核抗原和环化素的影响角度,综述了近3年来中医治疗慢性胃炎的研究进展,指出应统一动物模型制作标准,运用现代分子生物学手段,深入开展中药复方的组方配伍规律以及不同治法方剂的横向比较实验研究,充分体现复方研究的中医特色。     

重组人HMGB1 A box的表达纯化及对单核细胞的抑制作用

目的:克隆人高迁移率族B1Abox(HMGB1 A box)基因,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株,并探讨其对免疫复合物(IC)刺激单核细胞活化的抑制作用。方法:根据本室优化合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段并插入克隆载体pMD19-T,菌落PCR、酶谱分析及DNA测序鉴定阳性克隆。重组克隆载体经NdeⅠ和XhoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入表达载体pQE-T7-2的相应位点,菌落PCR鉴定重组表达载体。重组菌株经IT-PG诱导,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定重组蛋白。Ni2+-NTA层析柱纯化重组人HMGB1 A box,RT-PCR检测其对IC刺激单核细胞活化的抑制作用。结果:获得重组人HMGB1 A box的表达菌株,目的蛋白占菌体总蛋白的40%左右。Western blot显示重组蛋白能与抗人HMGB1多克隆抗体和抗His-Tag多克隆抗体特异反应。目的蛋白纯度高达90%以上,并能有效抑制IC诱导单核细胞分泌BAFF、IFN-γ及TNF-α。结论:成功构建了重组人HMGB1 A Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效抑制IC刺激单核细胞活化后细胞因子的分泌。     

阿托伐他汀联合曲美他嗪治疗冠心病的效果分析

目的 分析冠心病患者采用阿托伐他汀联合曲美他嗪治疗的效果。方法 100例冠心病患者,根据用药方案不同分为对照组与实验组,各50例。对照组应用曲美他嗪治疗,实验组应用阿托伐他汀联合曲美他嗪治疗。比较两组疗效、治疗前后的血管皮内功能和炎症因子水平。结果 实验组治疗总有效率96.00%高于对照组的84.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血管相关内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、丙二醛(MDA)均较本组治疗前改善,且实验组ET-1(61.39±1.25)ng/L、MMP-9(32.19±1.05)ng/ml、MDA(8.34±1.28)nmol/ml低于对照组的(70.67±1.99)ng/L、(42.34±1.69)ng/ml、(10.06±1.49)nmol/ml, NO(389.17±2.69)μmol/L高于对照组的(330.22±2.49)μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 阿托伐他汀联合曲美他嗪方案治疗冠心病疗效理想,值得推广。