冬凌草乙素对白血病NB4细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的:探讨冬凌草乙素(PON)对急性白血病NB4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的PON(0～50 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡时的形态学变化.应用免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP的表达水平,并对凋亡调节蛋白Bax、Bd-2、Bak、Bad及Survivin的表达水平进行检测.结果:>20 μmol/L的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,>20 μmol/L的PON作用48 h后,凋亡细胞逐渐增多,在Hoechst染色后可见典型的细胞凋亡现象.蛋白质印迹法检测结果表明,药物作用48 h后Caspase-3被活化出现17×103的亚单位,同时PARP被裂解出现89×103的亚单位片段.蛋白质印迹法检测结果显示,凋亡抑制蛋白Survivin的表达水平明显降低,促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高,而其他凋亡调节基因Bcl-2、Bak、Bad则无明显变化.结论:PON可以通过诱导白血病NB4细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,降低Survivin以及升高Bax的表达水平可能是PON诱导白血病细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

PPAR-α激活对ET-1诱导的心肌肥大和转录因子NFATc4的影响

目的： 研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α（PPAR-α）激活对内皮素-1（ET-1）诱导的心肌肥大和活化T细胞核因子c4(NFATc4)的影响,探讨在心肌肥大发病过程中PPAR-α和NFATc4的相互作用。方法: 培养新生SD大鼠心肌细胞,采用［3H］亮氨酸法和RT-PCR法观察PPAR-α激动剂非诺贝特对ET-1诱导的心肌细胞肥大的影响;应用免疫荧光和免疫共沉淀技术分别检测非诺贝特对ET-1诱导的NFATc4核转位以及PPAR-α和NFATc4相互作用的影响;用Western blotting法检测NFATc4的胞浆和胞核表达。结果: （1）PPAR-α激动剂非诺贝特显著抑制ET-1诱导的肥厚反应。(2)非诺贝特阻止ET-1诱导NFATc4由胞浆到胞核的转位。(3)在心肌细胞中,PPAR-α和NFATc4之间存在相互作用,非诺贝特加强了这种相互作用。结论: PPAR-α激活后可以通过调控转录因子NFATc4来抑制ET-1诱导的心肌肥大反应。     

抑制PPAR-α表达对ET-1诱导的心肌肥大和PI3K/Akt/GSK3β-NFATc4通路的影响

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α（PPAR-α）在病理性心肌肥大中的作用及其信号机制。方法:应用Invitrogen's Stealth RNAi抑制心肌细胞PPAR-α的表达;采用［3H］-亮氨酸掺入法和RT-PCR检查心肌细胞蛋白质合成和心房利钠因子(ANF) mRNA的表达;采用Western blotting法检测Akt/GSK3β的磷酸化表达;应用免疫荧光技术检测NFATc4的胞核移位。结果: (1)RSS304168 是最有效的PPAR-α RNAi,特异性地抑制了PPAR-α 的表达。(2)非诺贝特预处理抑制了内皮素-1(ET-1)诱导的心肌细胞肥大（蛋白质合成和ANF mRNA的表达）;SS304168加强了ET-1的诱导效应,而且逆转了非诺贝特对心肌肥大的抑制效应。(3)非诺贝特降低了ET-1诱导的Akt/GSK3β的磷酸化表达,RSS304168增强了ET-1的诱导效应,ET-1和RSS304168的上述作用可被PI3K阻断剂LY294002所阻断;RSS304168逆转了非诺贝特对Akt/GSK3β的磷酸化表达的负性调控作用。(4)非诺贝特抑制了ET-1诱导的NFATc4的胞核移位;而RSS304168加强了ET-1的诱导作用,逆转了非诺贝特对NFATc4胞核移位的抑制作用。结论:PPAR-α激活可以通过PI3K/Akt/GSK3β-NFATc4通路抑制ET-1诱导的心肌肥大反应。     

丹参酮ⅡA抑制肾性高血压大鼠氧化应激和心肌肥厚

背景血管还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(磷酸)[NAD(P)H]氧化酶激活产生的活性氧增多所产生的氧化损伤在左心室肥厚的发生发展中起重要作用,丹参酮ⅡA被证实能通过抗氧化作用阻滞粥样硬化斑块的发展,但它对左心室肥厚的发生发展有无影响尚未见实验证实。目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对两肾两夹手术造成的肾性高血压大鼠左心室肥厚的作用,并与缬沙坦的作用相比较,探讨TanⅡA防治心室肥厚的作用机制。方法实验分5组:对照组、模型组、缬沙坦组[30 mg/(kg.d)]、TanⅡA高剂量组[TanH,70 mg/(kg.d)]和TanⅡA低剂量组[TanL,35 mg/(kg.d)]。术后4周开始药物处理,连续给药6周,测定血压和左室质量指数,行超声心动图检查,采用共聚焦显微镜检测左心室和主动脉中O2.-的产生情况,用化学发光仪测定NAD(P)H氧化酶的活性。结果两肾两夹大鼠手术后4周血压升至180 mm Hg左右,显著高于对照组(P<0.05),模型组大鼠术后10周,左心室肥厚较对照组明显(P<0.05),心肌和主动脉壁中O2.-的产生明显增多(P<0.01),NAD(P)H氧化酶活性明显升高(P<0.05);TanⅡA治...     

冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及β-catenin表达水平的影响

目的:探讨冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的冬凌草乙素作用于体外培养的U937细胞,MTF法检测细胞生长抑制率,应用hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡;采用RT-PCR对细胞凋亡前后β-catenin的表达水平进行检测.结果:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.在冬凌草乙素抑制细胞增殖过程中β-catenin的表达水平显著下降.结论:冬凌草乙素能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低β-catenin的表达水平可能是其重要作用机制之一.这为冬凌草乙素抗白血病的进一步研究提供了有力的实验依据.     

前胡丙素对高血压大鼠血管肥厚、细胞内钙、胶原及NO的影响

目的　研究前胡丙素对自发性高血压大鼠SHR及肾型高血压大鼠RHR的血管肥厚、细胞内钙、胶原、NO及血管收缩的反应性影响。方法用显微测微仪测定血管中膜层厚度,细胞大小,用Fura-2/AM为荧光指示剂,测定单细胞内［Ca²⁺］i,以测定羟脯氨酸含量反映胶原含量,用Griess法测定NO含量,以血管环观察收缩反应。结果　前胡丙素抑制血管中膜层增厚,维持细胞内［Ca²⁺］i稳态。减少胶原形成,增加SMCs释放NO。抑制血管环高反应状态。结论　前胡丙素抑制高血压血管肥厚,降低胶原含量及血管异常反应。     

抵当汤改良方抗家兔实验性动脉粥样硬化效应及机制初探

目的　探讨抵当汤改良方抗家兔实验性动脉粥样硬化效应及其可能机制。方法　运用图像分析法测定主动脉内膜脂质斑块面积百分比 ;脂代谢指标分别运用酶动力学法、一步法、免疫透射比浊法等方法测定 ;血浆超氧化物歧化酶与丙二醛分别运用微量快速测定法、改良的八木国夫法测定 ;用薄层色谱法进行神经酰胺含量测定。用TUNEL法检测主动脉脂质斑块部泡沫细胞凋亡数量。结果　抵当汤改良方能有效减轻主动脉脂质斑块面积 ,调节脂代谢紊乱 ,提高机体抗氧化酶活性 ,降低主动脉脂质斑块部神经酰胺含量及泡沫细胞凋亡数量。结论　抵当汤改良方具有较好的抗家兔实验性动脉粥样硬化效应 ,其作用机制与其调节脂代谢、抗氧化损伤、阻抑泡沫细胞的凋亡等有关。     

丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠左心室谷胱甘肽-s-转移酶μ2表达的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠（SHR）左心室谷胱甘肽-s-转移酶μ2（glutathione-s-transferase μ2,GSTμ2）表达的影响,探讨丹参酮ⅡA防治左心室肥厚的机制。方法：实验分3组：（1）正常对照组;（2）SHR组;（3）丹参酮ⅡA组。处理后检测血流动力学指标、左室重量指数及大鼠左心室GSTμ2的活性,采用共聚焦显微镜检测左心室O2^.-的产生情况,Western blotting检测GSTμ2的表达情况。结果：SHR组血压与左室重量指数均显著高于正常对照组,左心功能明显下降;丹参酮ⅡA显著逆转了SHR的左心室肥厚,但未明显改善高血压。SHR组左心室O2^.-的产生较正常对照组显著增多,而丹参酮ⅡA治疗后,O2^.-产生较SHR组显著减少。GSTμ2的表达及活性在SHR组显著降低,而丹参酮ⅡA显著增加了GSTM2的表达及活性。结论：丹参酮ⅡA能逆转SHR的左心室肥厚,这可能与其增加GSTμ2表达,减少活性氧产生,消除氧化应激有关。     

冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用

目的研究冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用。方法以人急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的骨髓原代细胞为研究对象,以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的白血病细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡。结果冬凌草甲素体外可明显地抑制白血病原代细胞的增殖,并能诱导细胞发生凋亡,而且呈现出明显的量-效与时-效关系。结论冬凌草甲素能有效地抑制APL细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,是一种潜在的抗白血病药物。     

ZLY18通过抑制TGF-β1/Smads通路改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化

目的 探究化合物ZLY18对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌纤维化的作用及机制。方法 采用Ang II在细胞水平和动物水平上建立心肌纤维化模型。体外实验：将心肌成纤维细胞分为对照组、模型组、ZLY18(L)组、ZLY18(M)组和ZLY18(H)组,分别给予ZLY18 1、2、5μmol·L^-1;体内实验：将小鼠随机分为对照组、模型组、ZLY18(L)组、ZLY18(M)组和ZLY18(H)组,分别给予ZLY18 10、20和50 mg·kg^-1,模型组和药物组同时给予AngⅡ诱导心肌纤维化模型。通过免疫印迹和免疫荧光检测蛋白水平的变化;通过超声心动检测小鼠心功能指标;通过HE染色等方法观察心肌细胞形态、细胞排列和胶原纤维沉积等。结果 体内、外成功建立了AngⅡ诱导的心肌纤维化模型,给予ZLY18处理后均能改善由AngⅡ引起的纤维化相关蛋白升高,小鼠心功能异常等。此外,ZLY18能够抑制由AngⅡ引起的TGF-β1、Smad3的磷酸化水平升高,Smad2/3入核增加,提示ZLY18抗纤维化作用可能与TGF-β1/S...