准分子激光屈光性角膜切削术治疗超高度近视眼

采用ＶＩＳＸ２０／２０型准分子激光仪对５３例（８４眼）超高度近视（－１０．００～１６．００）行准分子激光屈光性角膜切削术，术后随访１年以上。结果显示，术后裸眼视力≥０．５，１．０者分别占８１．０％和２３．９％；实际矫正屈光度与术前预矫屈光度相差＜±２．００Ｄ者占７５．０％；角膜上皮下雾状混浊≥２级的发生率占１３．１％。     

视网膜内源性NO在形觉剥夺性近视眼中的作用

目的：建立鸡形觉剥夺性近视(form-deprivation myopia，FDM)模型，探讨视网膜内源性NO在FDM发展中的变化及作用。方法：取出生当日的来亨鸡60只，分为A，B两组，A组持续遮盖3周，B组遮盖2周后去遮盖1周。随机遮盖一眼，另眼作对照。于实验前、1，2，3周，行视网膜检影和A超检查。NO酶法试剂盒测定视网膜和脉络膜组织的NO含量。RT-PCR检测iNOSmRNA的表达，免疫组织化学分析iNOS的活性。结果：形觉剥夺使遮盖眼轴长增加，近视屈光度增加，去遮盖后双眼轴长差异减小，近视度下降。形觉剥夺降低视网膜和脉络膜组织NO含量、iNOS的免疫反应和iNOS mRNA的表达，去遮盖后逐渐恢复，去遮盖后1周，iNOS mRNA的表达高于对照组水平。结论：形觉剥夺可以建立近视眼动物模型，NO可能参与FDM的形成，未成熟动物的FDM是可逆的。     

近视豚鼠视网膜超微结构改变及环磷酸鸟苷的表达

目的:建立豚鼠形觉剥夺性近视动物模型,观察豚鼠视网膜超微结构变化,研究环磷酸鸟苷(cyclic guanine monophosphate,cGMP)在近视豚鼠视网膜组织上的表达变化,探讨其发病机制.方法:3周龄的三色豚鼠随机分为未遮盖组(Ⅰ组)、单眼遮盖2周组(Ⅱ组)和单眼遮盖3周组(Ⅲ组),其中右眼遮盖为实验眼,左...     

SKF38393对体外培养大鼠视皮层神经元GABA-激活电流的影响

目的:探讨多巴胺D1受体激动剂SKF38393对体外培养的大鼠视皮层神经元γ氨基丁酸(GABA)-激活电流IGABA的影响.方法:选择培养11～14 d的大鼠视皮层神经元,加入不同剂量的GABA,应用全细胞膜片钳技术记录IGABA并观察SKF38393对IGABA的作用.结果:视皮层神经元IGABA幅值随GABA剂量的增加而增大,且可被足量GABA A受体拮抗剂Bicuculline完全阻断.加入不同剂量SKF38393后视皮层神经元IGABA减小(P均<0.05),SKF38393剂量超过10 μmol/L后产生的作用趋于稳定.联合应用10 μmol/L的D1受体拮抗剂SCH23390与SKF38393后,IGABA抑制率较单独应用SKF38393减小(P均<0.05).结论:IGABA可被SKF38393抑制.多巴胺可通过D1受体作用于IGABA.     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜蛋白激酶C的变化

摘 要：目的 研究豚鼠形觉剥夺性近视眼形成过程中视网膜蛋白激酶C（PKC）的变化.方法 选取3周龄雄性三色豚鼠48只,用半透明眼罩遮盖豚鼠右眼建立近视眼模型,分为遮盖3、7、14 d组,每组16只豚鼠.每组中8只豚鼠遮盖右眼作为实验眼.以对侧未遮盖眼作为自身对照,剩余8只豚鼠作为正常对照.按预定时间观察豚鼠角膜曲率半径、屈光度和眼轴长度的变化,然后处死豚鼠,取视网膜,采用非放射性方法测定视网膜PKC活性,免疫组化染色定位分析PKC蛋白在视网膜的表达情况.各组间角膜曲率半径、屈光度、眼轴长度、视网膜PKC活性及免疫反应强度比较,采用单因素方差分析;组内左、右眼之间的比较采用t检验：视网膜PKC活性与PKC蛋白免疫反应强度的关系采用相关分析.结果 眼罩遮盖能诱导豚鼠遮盖跟眼轴延长、近视形成,且近视程度随遮盖时间的延长而加深.与对照组比较,各组遮盖眼视网膜PKC活性均升高（P〈0.05）.眼罩遮盖3 d后,遮盖眼视网膜PKC活性升高至（0.28±0.08）units/ml,遮盖7 d时PKC活性进一步升高至（0.43±0.10）units/ml,遮盖14 d时降低为（0.32±0.07）units/ml.免疫组化染色结果显示,PKC蛋白表达于视网膜神经节细胞和内核层细胞,呈棕黄色或棕褐色颗粒.与正常对照眼及自身对照眼比较,遮盖眼视网膜内核层细胞PKC蛋白表达上调（P〈0.05）,神经节细胞PKC蛋白表达无变化.遮盖眼视网膜内核层细胞PKC蛋白表达的变化趋势与PKC活性一致,两者之间有明显的相关关系（r=0.994,P=0.000）.结论 视网膜PKC活性升高参与了豚鼠形觉剥夺性近视的形成.     

蛋白激酶C活性调节剂对豚鼠近视眼视网膜Mller细胞的作用及意义

目的研究蛋白激酶C（PKC）激活剂PMA和抑制剂GF109203X对豚鼠近视眼视网膜Mailer细胞生长状态及PKC蛋白表达的影响。方法眼罩遮盖诱导近视模型,酶消化法培养其视网膜Mailer细胞,并鉴定。PMA、GF109203X分别干预近视眼Mailer细胞。MTT测细胞活力,TUNEL染色检测凋亡细胞,Westren blotting测PKC蛋白表达。结果95％以上的培养细胞阳性表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和波形蛋白（Vimentin）。近视组PKC蛋白表达较正常组上调（P〈0．05）。PMA、GF109203X均能引起近视眼Mailer细胞的抑制率升高和诱导其凋亡（P〈0．05）。PMA诱导近视眼Mailer细胞PKC蛋白表达进一步上调,100nmol／L组和1000nmol／L组表达量高于10nmol／L组（P〈0．05）。1μmol／L和10μmol／L GF109203X均能引起近视眼Mailer细胞PKC蛋白表达下调,10μmol／L的抑制作用大于1μmol／L（P〈0．05）。结论PKC蛋白在豚鼠近视眼视网膜Mailer细胞表达升高,且其表达受PMA和GF109203X调控。     

左旋多巴对豚鼠形觉剥夺性近视形成的影响

目的研究腹腔注射左旋多巴（L-dopa）对豚鼠形觉剥夺性近视眼屈光状态及视网膜多巴胺含量的影响。方法眼罩遮盖建立豚鼠形觉剥夺性近视眼模型,分为正常对照组、L—dopa组（10mg／kg）、生理盐水组、遮盖组、遮盖＋L-dopa组、遮盖＋生理盐水组6个组。遮盖10d后,测定角膜曲率半径、眼球屈光度和眼轴长度,高效液相色谱检测视网膜多巴胺含量。结果眼罩遮盖10d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长、近视形成,视网膜多巴胺含量降低（P〈0．05）,但角膜曲率半径无明显变化。腹腔注射L-dopa引起遮盖眼视网膜多巴胺含量增加、近视程度减轻（P〈0．05）,但对正常豚鼠眼球的屈光发育无明显影响（P〉0．05）。腹腔注射生理盐水后,豚鼠眼球屈光状态和视网膜多巴胺含量无明显变化（P〉0．05）。结论腹腔注射L—dopa能通过补充遮盖眼视网膜多巴胺含量,抑制豚鼠形觉剥夺性近视的形成。     

不同剂量左旋多巴对形觉剥夺性弱视鼠闪光视觉诱发电位的影响

目的探讨不同剂量左旋多巴对形觉剥夺性弱视大鼠视觉诱发电位的影响及其可能的作用机制。方法30只14日龄SD大鼠幼鼠,随机分为3组,每组10只,分别为弱视对照组、小剂量给药组及大剂量给药组。3组SD大鼠采用单眼睑缝合30d建立形觉剥夺眼弱视模型。弱视对照组予以生理盐水灌胃．小剂量给药组与大剂量给药组分别予以20mg／kg、80mg／kg左旋多巴溶液灌胃给药。分别于给药前（45日龄）和给药后（75日龄）测量弱视大鼠模型的闪光视觉诱发电位（flash visual evoked potential,FVEP）。并对所测得的数据进行统计学分析。结果给药前．各组剥夺眼较未剥夺眼FVEP的P1波潜伏期均明显延长（P〈0．05）。给药后,小剂量组和大剂量组剥夺眼的P1波潜伏期较弱视对照组剥夺眼明显缩短（P〈0．05）,差异有统计学意义（P〈0．05）,且大剂量组较小剂量组P1波潜伏期缩短更明显（P〈0．05）;而各组未剥夺眼的P1波潜伏期比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。各组剥夺眼与未剥夺眼N1P1和P1N2波振幅比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论左旋多巴能缩短弱视鼠弱视眼的P1渡潜伏期,而对振幅N1P1和P1N2无明显作用。它可能通过改变视网膜内及整个视路的多巴胺含量而影响视功能。     

豚鼠近视眼视网膜Müller细胞近视因子基因的表达

目的研究视网膜近视因子基因在原代培养的豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中的表达变化。方法3～4周龄断乳三色豚鼠40只,取20只建立近视眼模型（以右眼作为实验眼,以对侧未遮盖眼作自身对照）,剩余的20只豚鼠作正常对照。用眼罩遮盖法建立豚鼠近视眼模型,用酶消化法原代培养其视网膜Müller细胞。RT-PCR检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）、诱导型一氧化氮合成酶（induciblenitric oxide synthase,iNOS）、神经型一氧化氮合成酶（neu-ronal nitric oxide synthase,nNOS）、内皮型一氧化氮合成酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）、视黄醛脱氢酶（retinaldehyde dehydrogenase,RALDH）、醛脱氢酶（aldehydedehydrogenase,ALDH）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fi-broblast growth factor,bFGF）、转化生长因子β（transforminggrowth factor-β,TGF-β）的mRNA在正常对照眼、自身对照眼和近视眼视网膜Müller细胞中的表达情况。数据分析采用One-way ANOVA检验。结果眼罩遮盖10d后,遮盖眼眼轴延长,近视形成。酶消化法成功培养出视网膜Müller细胞。正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼视网膜Müller细胞均阳性表达nNOS、bFGF、TH、TGF-βmRNA,且遮盖眼表达nNOS、bFGF和TGF-βmRNA上调（P〈0.05）,TH mRNA下调（P〈0.05）。iNOS mRNA仅在遮盖眼视网膜Müller细胞阳性表达。三组视网膜Müller细胞均不表达eNOS、RALDH和ALDHmRNA。结论豚鼠近视眼视网膜Müller细胞表达nNOS、iNOS、bFGF和TGF-βmRNA上调,TH mRNA下调。Müller细胞是近视眼视网膜信号因子一氧化氮（nitric oxide,NO）、多巴胺（dopamine,DA）、bFGF和TGF-β的一个重要来源。     

重组腺相关病毒介导的HSV-tk/GCV体系对兔晶状体上皮细胞的抑制作用

目的 探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷体系(HSV-tk/GCV)对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的抑制作用,以及晶状体上皮细胞死亡的机制.方法 实验研究.rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染体外培养N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测病毒的转染效率.重组病毒rAAV2/HSV-tk转染体外培养的N/N1003A细胞为实验组,以没有转染重组病毒的细胞作为对照组,MTT法检测HSV-tk/GCV体系对细胞作用的浓度依赖性、时间依赖性和旁观者效应;相差显微镜、透射电镜、Hoechst33258染色观察细胞凋亡、坏死改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化.不同浓度GCV对两组细胞的作用结果采用两因素析因设计的方差分析;两组细胞周期和凋亡的比较采用两样本t检验.结果 rAAV2载体能介导EGFP基因稳定高效转染N/N1003A细胞.GCV对两组细胞的杀伤作用有剂量-效应依赖关系(F=13 076.239,P<0.001);实验组N/N1003A-tk细胞的存活率低于对照组,差异有统计学意义(F=53 947.119,P<0.001).实验组GCV的IC50为2 mg/L,而对照组IC50为524 mg/L.GCV的杀伤效应随时间延长而增强,且存在明显的旁观者效应.N/N1003A-tk细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡和坏死,细胞的凋亡率7.18%±2.04%,与对照组(3.50%±0.56%)比较差异有统计学意义(t=3.83,P<0.01);S期细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(S期细胞比例:t=3.55,P<0.01;G0/G1期细胞比例:t=4.29,P<0.01).结论 GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2/HSV-tk转染的兔晶状体上皮细胞,并具有较强的旁观者效应.