肾移植受者人类白细胞抗原体液免疫致敏状态的监测及其临床意义

背景:器官移植受者在受到同种抗原人类白细胞抗原(HLA)免疫致敏后,外周血中容易产生群体反应性抗体,如何提高致敏受者肾移植的成功率和移植物长期存活率值得深入研究.目的:通过检测肾移植受者的HLA-IgG抗体水平及其特异性,评估受者体液免疫致敏状态,并观察HLA交叉反应组配型可接受性错配情况与移植肾存活率的关系.设计:临床观察.单位:南方医科大学附属珠江医院.对象:选择1998-01/2005-12在南方医科大学附属珠江医院器官移植科接受肾移植1297例患者,男824例,女473例,平均(42±16)岁,其中HLA-IgG抗体阳性受者165例,阴性受者1 132例.初次肾移植受者1217例,2次移植77例,3次移植2例,4次移植1例.所有患者在接受本实验相关检测及治疗前均签署知情同意书,本实验经过医院伦理委员会批准许可.试剂:莱姆德抗原板和混合抗原板购自美国One Lambda公司.HLA-Ⅰ类单克隆抗体湿板和HLA-Ⅱ类DNA分型试剂购自美国OneLambda公司:Taq多聚酶购自美国PE公司:DNA抽提试剂购自德国QIAGEN公司.抗人C4d多克隆抗体和显色底物DAB购自奥地利Biomedica公司.方法:①通过酶联免疫吸附试验筛查受者术前血清中的HLA-IgG抗体,对阳性血清进一步用抗原板(LAT1240和LATIHDS)检测抗体阳性率及其特异性,采用序列特异性引物聚合酶链反应技术进行HLA基因分型.②对40例Scr升高的受者进行抗HLA抗体检测和移植肾穿刺活检,并通过免疫组织化学染色观察肾小管周围毛细血管壁上C4dd的沉积.⑧移植受者术后1,3,5年移植肾存活率及性别、移植与抗体阳性率的关系,并分析不同HLA交叉反应组错配数受者移植肾存活率的差别.主要观察指标:①肾移植患者手术前后HIA-IgG抗体阳性率及HLA分型.②移植肾活检组织中肾小管周围毛细血管壁上C4d的沉积特征.③移植肾存活率差别.结果:患者1297例均进入结果分析.①HLA-IgG抗体阴性受者1132例,阳性受者165例,Ⅰ类HLA-IgG抗体阳性受者126例,Ⅱ类HLA-IgG抗体阳性受者90例,51例受者同时存在Ⅰ类和Ⅱ类HLA-IgG抗体,抗体阳性率＞50%的高致敏受者94例.②40例移植肾穿刺活检标本中,13例患者观察到肾小管周围毛细血管壁上存在C4d的沉积.27例未见C4d沉积;13例C4d阳性受者中10例外周循环中抗HLA抗体阳性.③抗体阳性受者移植物功能延迟恢复的发生率显著高于阴性受者(P＜0.01).抗体阳性受者的1,3及5年移植肾存活率与抗体阴性受者无明显学显著性差异(P＞0.05).女性受者中抗体阳性率明显高于男性受者(P＜0.01),再次移植受者中抗体阳性率显著高于初次移植受者(P＜0.01);随着HLA交叉反应组错配数的增加,移植肾存活率呈下降趋势,0错配受者的1,3,5年移植肾存活率分别为97%,94%和92%.2错配受者1.3,5年移植肾存活率分别为91%,82%和77%,3错配受者较0错配受者下降更为明显,分别为9%,15%和24%.结论:肾小管周围毛细血管壁上C4d的沉积可作为抗体介导体液性捧斥反应的客观指标,供受者间良好的HLA配型能显著降低排斥反应发生率和改善移植物存活.     

C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠对脓毒症反应的差异

目的 探讨C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力.方法 C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠各30只,分别随机分成假手术组与脓毒症组,每组15只.脓毒症组用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立小鼠脓毒症模型.术后6h,每组随机选出5只,Bio-plex悬浮蛋白芯片系统检测其外周血IL-1β、IL-2、IL-4,IL-5、IL-10、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α的浓度.剩余小鼠用于1周存活率分析.结果 两品系小鼠假手术组1周存活率均为100%.C57BL/6小鼠脓毒症组1周存活率为10%,BALB/c小鼠脓毒症组存活率为50%.C57BL/6小鼠脓毒症组的存活率显著低于BALB/c小鼠脓毒症组(P＜0.05).与假手术组相比,C57BL/6小鼠脓毒症组分泌的IL-4、TNF-α和IL-10明显升高.而BALB/c小鼠脓毒症组分泌的8种细胞因子较假手术组均未见明显增加.结论 C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力有差异,C57BL/6小鼠反应更敏感.     

再次免疫应答导致肾移植后早期严重急性体液排斥反应

背景：国内外有关预防高致敏受者肾移植后发生超急性、急性排斥反应提高人肾存活率取得满意效果,然而临床对群体反应性抗体检测阴性既往致敏受者肾移植后发生再次免疫应答研究则罕见报道。 目的：探讨群体反应性抗体阴性的既往致敏受者肾移植后早期发生严重急性体液性排斥反应机制,为其早期诊断和治疗既提供参考依据。 方法：选择21例群体反应性抗体阴性术后早期发生严重急性体液性排斥的首次肾移植患者,动态分析移植后14 d内反映急性体液性排斥的相关指标,包括IgG型抗HLA抗体,病理苏木精-伊红染色、C4d及细胞表面分子原位检测。 结果与结论：21例患者既往均有输血或妊娠史;18例患者移植后第7天抗HLAⅠ类IgG抗体阳性率>80%,11例于移植后第7天抗HLA Ⅱ类IgG抗体> 80%;5例女性患者于移植后第5~8天发生移植肾破裂,抗HLAⅠ类和Ⅱ类IgG抗体均>96%;21例受者均检出抗供者特异性抗体(DSA),13例(61.90%)供、受者存在HLA-A2和HLA-A11的错配并产生对应DSA,包括5例移植肾破裂受者;病理组织形态学均有不同程度急性损伤,免疫组化可见管周毛细血管区(PTC)C4d沉积,原位染色CD34(+)、CD68(+)、CD4(+)。提示移植前群体反应性抗体监测不能完全反映受者的预致敏状态;移植后早期监测群体反应性抗体可预测和诊断既往致敏受者急性体液性排斥的发生;C4d、CD68(+)作为其的辅助诊断指标,可提高诊出率;HLA-A2和HLA-A11在既往致敏受者是高危致敏基因。     

肾源性脓毒性休克合并严重肺毛细血管渗漏的液体复苏策略

目的 分析肾源性脓毒性休克合并严重肺毛细血管渗漏的疾病特点,探讨液体复苏对休克治疗的影响以及脉搏指示连续心排血量(PiCCO)监测的意义.方法 采用回顾性分析方法,选择8例在重症监护病房(ICU)进行PiCCO监测并成功复苏的肾、输尿管碎石手术后并发肾源性脓毒性休克伴严重肺毛细血管渗漏患者,均以入院为起点,休克纠正或转出为终点,记录全心舒张期末容积指数(GEDVI)、血管外肺水指数(EVLWI)、液体出入量、液体净平衡、氧合指数(PaO2/FiO2)、动脉血乳酸水平和X线胸片等指标,分析其内在联系,探讨肾源性脓毒性休克疾病的特点和PiCCO监测在休克液体复苏治疗中的意义.结果 8例患者手术后4.5 d(中位数)出现脓毒性休克,均伴有不同程度的肺毛细血管渗漏和低氧血症.入ICU时EVLWI均值为(22±7)ml/kg,PaO2/FiO2为(164±82) mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa);液体复苏均采用保守性策略,平均液体入量为(2412±1121) ml/d,液体净平衡-553 ml/d;中心静脉压(CVP)和GEDVI分别维持在(9±3)mm Hg和(749±236) ml/m2.其中6例使用呋塞米利尿,平均剂量(264± 133) mg;7例需要血管活性药物维持血压,去甲肾上腺素/多巴胺平均使用天数为(4±1)d;7例需要机械通气,通气时间(8±6)d.8例患者治疗后脓毒性休克均纠正,EVLWI下降至(11±3) ml/kg,肺部渗出吸收好转,平均住ICU天数(17±11)d.相关分析显示:EVLWI与PaO2/FiO2和动脉血乳酸水平显著相关,相关系数(r)值分别为-0.91和0.70(均P＜0.05).结论 准确评估血容量状态尤其是血管外肺水程度,参照血流动力学指标采取保守性液体复苏策略以及强调控制血管外肺水是成功救治肾源性脓毒性休克的关键,PiCCO是判断患者容量状态、指导液体复苏和评价治疗效果的有用工具.     

α-硫辛酸降低脂多糖诱导的Raw264.7细胞TNF-α的分泌

目的观察α-硫辛酸(ALA)对脂多糖(LPS)在体外诱导的Raw264.7细胞TNF-α释放及机制。方法用ALA或者ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂或者激活剂预处理2 h,再用LPS(1 mg/L)体外刺激巨噬细胞Raw264.7;采用MTT法检测ALA对Raw264.7细胞活力影响,利用ELISA方法对Raw264.7释放在培养上清中的细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度,及用Western blot方法检测T-p ERK、p ERK和NF-κB的表达。结果 ALA可抑制LPS诱导的Raw264.7细胞TNF-α表达(P0.05),用ALA联合ERK或NF-κB的激活剂预处理后可减弱ALA产生的抑制效果(P0.05)。同时ALA抑制LPS诱导的Raw264.7细胞p ERK和NF-κB的表达(P0.05),用ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂预处理后可加强ALA产生的抑制效果(P0.05)。结论 ALA可能通过抑制LPS诱导的Raw264.7细胞的ERK和NF-κB信号通路来抑制TNF-α释放。     

基于高级精简指令系统处理器的无创持续气道正压通气呼吸机的评价

目的 设计一种基于高级精简指令系统处理器(ARM)的无创持续气道正压(CPAP)通气呼吸机,并评价其性能.方法 没计和构建CPAP呼吸机,以4例健康人为实验对象,德国德尔格RespiCare CV无创通气呼吸机作对照,验证新设计的呼吸机性能.对比两种呼吸机压力输出的稳定性、漏气补偿能力和对呼吸做功的影响.结果 成功构建CPAP呼吸机.实验设计的CPAP呼吸机压力输出在2 ～ 25 cm H2O(1 cm H2O=0.098 kPa)范围内可调,输出压力稍高于设定值.当CPAP水平分别没为4、8和12 cm H2O时,实际测定的健康人气道压力均值分别为(4.35±0.32)、(9.65±0.12)和(14.07±0.36)cm H2O,高于对照呼吸机实际测定的健康人气道压力[(4.27±0.08)、(8.04±0.02)和(12.07±0.36)cmH2O](均P＜0.05).漏气实验显示设计的呼吸机CPAP水平下降了(2.41±0.03)cm H2O,高于对照呼吸机下降幅度(0.29±0.01)cm H2O(P＜0.05).当CPAP水平分别为4、8和12 cm H2O时,实验设计的呼吸机对健康人呼吸做功分别为(5.93±0.39)、(6.81±0.51)和(9.05±0.40) cm H2O/L,也高于对照呼吸机对健康人呼吸做功[(4.41±0.77)、(2.16±0.12)和(4.80±0.31)cm H2O/L](均P＜0.05).结论 基于ARM处理器的无创CPAP呼吸机压力输出高于设定值,在漏气补偿和减少呼吸做功方面略显不足,然而新设计呼吸机的性能基本达到了临床使用的要求.     

CVVHDF前后稀释对不同相对分子质量溶质清除的影响

目的 通过建立血液净化连续静-静脉血液透析滤过(CVVHDF)模式前、后稀释方法的体外实验,探讨该模式前、后稀释法对各种不同大小的溶质分子清除效率的影响.方法 建立等容CVVHDF前、后稀释及CVVH单循环(无稀释、无透析)对照体外实验装置,比较不同相对分子质量物质钾(K+)、肌酐(Cr)、万古霉素(vancomycin)、胰岛素(insulin)和白细胞介素-6(IL-6)的清除率,实验重复4次(n=4).结果 CVVHDF后稀释法对K+、Cr、Vancomycin和Insulin清除率明显高于CVVHDF前稀释;CVVHDF前、后稀释对IL-6清除差异无统计学意义;对照组Insulin和IL-6实验结束时明显降低.结论 CVVHDF后稀释总体上对各种不同相对分子质量物质清除率高于前稀释,但随着相对分子质量的增大,两者间的差别缩小;对照组提示实验用滤器(AN69)对Insulin及IL-6有吸附作用.     

温经活血汤联合依帕司他胶囊、硫辛酸片治疗糖尿病痛性神经病变寒凝血瘀证临床观察

目的观察温经活血汤联合依帕司他胶囊、硫辛酸片治疗糖尿病痛性神经病变(DPN)寒凝血瘀证的临床疗效。方法将112例DPN寒凝血瘀证患者按照随机数字表法分为2组。对照组56例采用西医常规治疗,治疗组56例采用温经活血汤联合依帕司他胶囊、硫辛酸片治疗。2组疗程均为1个月。比较2组治疗前后疼痛视觉模拟评分(VAS)、正中神经和腓总神经的感觉神经传导速度(SCV)和运动神经传导速度(MCV),并统计疗效。结果治疗组总有效率96.4%(54/56),对照组总有效率83.9%(47/56),治疗组疗效优于对照组(P <0.05)。治疗后2组疼痛VAS均较本组治疗前降低(P <0.05),且治疗后治疗组低于对照组(P <0.05)。治疗后2组正中神经和腓总神经MCV、SCV均较本组治疗前升高(P <0.05),且治疗后治疗组均高于对照组(P <0.05)。结论温经活血汤联合依帕司他胶囊、硫辛酸片治疗DPN疗效显著,且无不良反应,值得临床推广。     

再次免疫应答导致肾移植后早期严重急性体液排斥反应

背景:国内外有关预防高致敏受者肾移植后发生超急性、急性排斥反应提高人肾存活率取得满意效果,然而临床对群体反应性抗体检测阴性既往致敏受者肾移植后发生再次免疫应答研究则罕见报道。目的:探讨群体反应性抗体阴性的既往致敏受者肾移植后早期发生严重急性体液性排斥反应机制,为其早期诊断和治疗既提供参考依据。方法:选择21例群体反应性抗体阴性术后早期发生严重急性体液性排斥的首次肾移植患者,动态分析移植后14d内反映急性体液性排斥的相关指标,包括IgG型抗HLA抗体,病理苏木精-伊红染色、C4d及细胞表面分子原位检测。结果与结论:21例患者既往均有输血或妊娠史;18例患者移植后第7天抗HLAⅠ类IgG抗体阳性率>80%,11例于移植后第7天抗HLAⅡ类IgG抗体>80%;5例女性患者于移植后第5～8天发生移植肾破裂,抗HLAⅠ类和Ⅱ类IgG抗体均>96%;21例受者均检出抗供者特异性抗体(DSA),13例(61.90%)供、受者存在HLA-A2和HLA-A11的错配并产生对应DSA,包括5例移植肾破裂受者;病理组织形态学均有不同程度急性损伤,免疫组化可见管周毛细血管区(PTC)C4d沉积,原位染色CD34(+)、CD68(+)、CD4(+)。提示移植前群体反应性抗体监测不能完全反映受者的预致敏状态;移植后早期监测群体反应性抗体可预测和诊断既往致敏受者急性体液性排斥的发生;C4d、CD68(+)作为其的辅助诊断指标,可提高诊出率;HLA-A2和HLA-A11在既往致敏受者是高危致敏基因。     

高渗高糖非酮性昏迷2例

老年糖尿病者三多症状可不明显,常以并发症首诊。现将以癫痫样发作为首发症状2例报道如下: 例1:患者,女,67岁。主因阵发性抽搐4天,于1986年12月20日住院。半月前曾患“腹泻”用中药治愈。于3天前出现阵发性抽搐,短