补阳还五汤诱导脑缺血后血管生成促进侧脑室下区神经母细胞迁移

目的: 研究补阳还五汤诱导脑缺血后血管生成对侧脑室下区神经母细胞迁移的影响及机制. 方法: 采用线栓法诱导小鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血30 min,分假手术组、模型组、补阳还五汤组和内皮抑素组.补阳还五汤组缺血后24 h开始灌胃补阳还五汤(20 g·kg^-1),内皮抑素组在灌胃补阳还五汤同时皮下注射内皮抑素(10 μg/只),每天1次,连续14 d.缺血后第14天,采用免疫荧光法检测缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和蛋白表达. 结果: 与模型组比较,补阳还五汤组缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量显著增多(P<0.01),SDF-1和BDNF mRNA和蛋白表达增加(P<0.01);与补阳还五汤组比较,内皮抑素组小鼠缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量显著减少(P<0.01),SDF-1和BDNF mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.01). 结论: 补阳还五汤促进脑缺血后血管生成有助于侧脑室下区神经母细胞向缺血周边区迁移,机制可能与上调SDF-1和BDNF表达有关.     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤的长期保护作用

目的:观察补阳还五汤对大鼠脑缺血损伤后感觉运动功能和脑损伤的长期影响。方法:实验于2005-06/08在浙江中医学院实验动物中心完成。①取33只健康雄性SD大鼠,随机分为3组:补阳还五汤组(n=12)、缺血组(n=11)和假手术组(n=10)。前2组采用线栓法诱导大鼠大脑中动脉阻塞模型;假手术组只分离血管,不插栓线。补阳还五汤组:从缺血前7天开始按13.3g/kg剂量灌服补阳还五汤水煎剂(补阳还五汤处方来源于《医林改错》,成分:黄芪120g,当归6g,川芎4.5g,赤芍4.5g,地龙3g,红花3g,桃仁3g,药材购自浙江中医学院附属门诊部并经鉴定,煎2次,40min/次,合并后浓缩为含生药2g/mL),持续到缺血后14d,1次/d;其余各组同时灌等量生理盐水,干预时间同补阳还五汤组。②通过肢体放置实验[包括7个步骤。评分标准:正常,2分;延迟(2s)和/或不完全,1分;不反应,0分]在缺血后1～7,10,14,21和28d评价前后肢对触觉和本体感觉的反应。通过横木行走实验(用噪音刺激大鼠跨过横木。评分标准:大鼠不能呆在横木上,0分;大鼠能呆在横木上但不动,1分;大鼠试图跨过横木但摔下,2分;大鼠跨过横木,但损伤的后肢滑落次数超过50%,3分;超过1次但不到50%,4分;仅滑落1次,5分;顺利通过,6分)评价运动的协调和整合缺损。通过黏胶揭除实验(评分标准:1分为≤10s;2分为10～19s;3分为20～29s;4分为30～39s;5分为40～49s;6分为50～59s;7分为≥60s)评价躯体感觉功能。2块同面积的医用胶布分别贴在两前肢腕部腹侧面作为触觉刺激,记录大鼠揭除胶布的潜伏期。③缺血后第29天处死大鼠,取脑,冠状冰冻切片,采用甲苯胺蓝染色测定梗死体积。④肢体放置和横木行走实验结果差异比较采用非参数Mann-WhitneyU检验,黏胶揭除实验结果和梗死体积差异比较采用单因素方差分析。结果:大鼠33只均进入结果分析。①肢体放置实验评分:缺血后1～10,14,21,28d缺血组明显低于假手术组(u=0～9,P<0.01)。补阳还五汤组大鼠在缺血后1～7,10,14d明显高于缺血组(u=4.5～35,P<0.05～0.01)。②横木行走实验评分:缺血后1～7d缺血组明显低于假手术组(u=0～10,P<0.05～0.01)。缺血后1～3d补阳还五汤组明显高于缺血组(u=26.5～31,P<0.05)。③黏胶揭除实验评分:缺血后1,7,14,21,28d缺血组明显高于假手术组(t=2.56～21.91,P<0.05～0.01)。缺血后1,7,14,21d补阳还五汤组明显低于缺血组(t=2.36～3.88,P<0.05～0.01)。④脑梗死体积:缺血后29d,补阳还五汤组明显小于缺血组[(95±25),(123±22)mm3,t=2.75,P<0.05]。结论:补阳还五汤能显著改善脑缺血大鼠长期感觉运动功能,减轻脑损伤。     

补阳还五汤上调miRNA-210表达促进人脑微血管内皮细胞血管生成

目的体外研究miRNA-210在补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BYHWD)促进人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成中的作用及其机制。方法制备BYHWD含药血清,脂质体2000将miRNA-210inhibitor转染至HBMECs,HBMECs分为空白血清组(10%正常对照血清)、BYHWD含药血清组(10%BYHWD含药血清)、miRNA-210inhibitor阴性对照组(NC 10%BYHWD含药血清+miRNA-210inhibitor NC)和miRNA-210inhibitor组(10%BYHWD含药血清+miRNA-210inhibitor);采用MTT、Transwell和管腔形成实验分别检测HBMECs增殖、迁移和管腔形成;qRT-PCR检测miRNA-210、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)mRNA表达,Western Blot检测VEGF和VEGFR2蛋白表达。结果与空白血清组比较,BYHWD含药血清组HBMECs增殖、迁移和管腔形成增加(P0.01),miRNA-210、VEGF和VEGFR2mRNA和蛋白表达增加(P0.01)。与BYHWD含药血清组比较,miRNA-210inhibitor组HBMECs增殖、迁移和管腔形成减少(P0.01),VEGF、VEGFR2mRNA和蛋白表达减少(P0.01)。结论 BYHWD可促进HBMECs血管生成,其机制可能与其上调miRNA-210表达激活VEGF信号通路有关。     

预防医学专业中医药特色课程群的建设与实践

目的探索兼具中医与预防理念的结合型人才培养途径。方法通过信息检索法调研国内中医药高等院校开设预防专业情况,基于文献研究、专家共识法构建浙江中医药大学预防医学专业中医药特色课程群,通过问卷评价课程教学效果。结果我国共15所高等中医药院校开设相关专业,主要通过《中医学》、《中药学》等课程培养学生的中医预防思维。自2013年起,浙江中医药大学将中医"治未病"的理念和实践融入到教学过程中,构建中医药特色课群体系,开发能体现学科融合与交叉的《中医预防医学》创新课程,并取得一定成效。在课程结束一年后对学生调研,结果显示学生对该课程知识掌握较为牢固,对所学内容亦持积极态度,53. 52%学生认为中医保健技术对很多疾病有确切效果,30. 99%学生在今后工作中会主动向患者推荐中医预防保健服务。讨论在人才培养过程中,将"治未病"理念与预防医学相结合,可为社区及公共卫生领域提供交叉型人才,有利于我国中西医结合疾病预防保健体系的构建。     

黄芪甲苷上调miR-199a-5p表达抑制氧糖剥夺/再灌注诱导的神经干细胞凋亡

[目的] 探讨黄芪甲苷是否通过上调miR-199a-5p抑制氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)诱导的神经干细胞凋亡。 [方法] 分离14 d胎龄SD大鼠的大脑皮层神经干细胞并鉴定,随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂组(拮抗剂组)和黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂对照组(拮抗剂对照组)。除正常对照组外,其余组神经干细胞先行氧糖剥夺8 h,再灌注72 h,拮抗剂组和拮抗剂对照组分别采用脂质体2000转染miR-199a-5p拮抗剂和拮抗剂对照。采用2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐[2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfonic acid benzene)-2H-tetrazole monosodium salt,CCK-8]法检测神经干细胞活性,异硫氰酸荧光素标记磷脂结合蛋白/碘化丙啶(Annexin-fluorescein isothiocyanate isomer/propidium iodide,AnnexinⅤ-FITC/PI)双染法检测神经干细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测miR-199a-5p表达,免疫印迹法检测切割型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达。[结果] 分离培养的神经干细胞纯度为98.41%,黄芪甲苷能够提高OGD/R损伤的神经干细胞存活率,其中50 μmol·L-1黄芪甲苷效果最佳(P＜0.01);与模型对照组比较,50 μmol·L-1黄芪甲苷能抑制OGD/R损伤的神经干细胞凋亡(P＜0.01),上调miR-199a-5p表达(P＜0.01),下调cleaved caspase-3蛋白表达(P＜0.01),而miR-199a-5p拮抗剂能显著逆转上述效应(P＜0.01)。 [结论] 黄芪甲苷能够促进OGD/R损伤的神经干细胞存活,抑制其凋亡,作用机制可能与其上调miR-199a-5p表达,抑制cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

地黄饮子对阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆功能的影响

目的：探讨地黄饮子对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆功能的影响。方法：选取ICR小鼠40只,随机分成空白组（8只）、AD模型组（32只）,采用D-半乳糖复合给药造模25 d后,将造模成功的小鼠随机分为AD模型组（13只）、地黄饮子组（13只）,地黄饮子组连续灌胃25 d（16 g/kg）,采用水迷宫检测阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆能力。结果：与模型组比较,地黄饮子组与模型组潜伏时间相比P=0.024,给药组与模型组经过目标象限次数相比P=0.009 8,两组之间有显著性差异（P〈0.05）;地黄饮子能缩短潜伏时间,增加经过目标象限次数。结论：地黄饮子能改善阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆。     

川芎嗪提高心脏保存效果的实验研究

在改良的Ｅｕｒｏ－Ｃｏｌｌｉｎｓ心脏保存液中添加川芎嗪,简单冷保存离体大鼠心脏６ｈ,观察川芎嗪对心脏的保存效果。结果发现川芎嗪能提高保存后心脏的心功能和冠脉流量,降低心肌含水量,减少心肌细胞乳酸脱氢酶和肌酸激酶的漏出,提高心肌细胞超氧化物歧化酶活性并降低过氧化脂质的含量。     

米诺环素对大鼠和小鼠脑外伤的部分保护作用

目的：研究半合成四环素类药物米诺环素对中枢神经损伤的保护作用。方法：在大鼠开放性脑外伤、小鼠闭合性脑外伤和脑冷冻伤3种脑损伤模型，于手术前2d开始，每天2次预先给予米诺环素45mg／kg ip；手术前30min及手术后1h，各给药1次；手术后第1、2天，每天给药1次。观察手术后行为学变化，14d后计算脑损伤面积及神经元数量。结果：米诺环素对大鼠开放性脑撞击伤，除了加快肢体功能（爬板角度）恢复外，对其他指标无明显作用；对小鼠脑闭合伤，能抑制神经元减少，但对行为学变化无明显作用；对小鼠脑冷冻伤，能减少死亡率及损伤面积，对神经元减少的作用不明显。结论：米诺环素对不同动物的不同脑外伤有部分保护作用。     

灯盏花素不同途径给药对大鼠实验性脑缺血防治作用的比较研究

目的 比较灯盏花素鼻腔给药、口服给药与静脉给药对大鼠实验性脑缺血的防治作用.方法 采用Lon-ga线栓法制备SD大鼠右侧局部脑缺血模型,脑缺血1h,再灌注24h,随机分为假手术组,模型组,灯盏花素鼻腔给药高、低剂量组,灯盏花素口服给药与静脉给药组,每组6只,分别给予相应药物,观察各组对脑缺血大鼠神经功能、脑梗死体积的影响.结果 脑缺血1h,再灌注24h时模型组大鼠神经功能缺损严重,而经鼻腔多次给药后神经功能得到有效的保护;模型组脑梗死体积平均为21.82%,鼻腔给药组的脑梗死体积为9.37%和12.14%,口服组给药组、静脉给药组为16.76%与14.01%,4个给药组与模型组比较均有显著性差异;鼻腔给药组明显优于口服给药组、静脉给药组,均有统计学意义;鼻腔给药高剂量优于低剂量,但无统计学意义.结论 灯盏花素鼻腔给药对大鼠实验性脑缺血的防治作用优于口服给药与静脉给药.     

黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用

目的:观察黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用.方法:以大脑中动脉阻塞(MCAO)15 min诱导小鼠短暂性局灶性脑缺血.从术前7 d开始,用药组灌服黄连解毒汤2 g/kg和4 g/kg,实验对照组和假手术组灌服生理盐水,均连续给药21 d,一日一次.缺血后35 d(5周)内进行神经症状评分、斜板试验,并记录小鼠的最终生存率.实验结束后,测定脑损伤体积和神经元数量.结果:黄连解毒汤4 g/kg能显著提高小鼠MCAO术后35 d的最终生存率,2 g/kg和4 g/kg均明显改善术后的神经症状,降低脑梗死体积、减轻脑萎缩.黄连解毒汤4 g/kg可明显增加缺血侧海马CA1区、纹状体和皮层的神经元密度,2 g/kg明显增加缺血侧海马CA1区的神经元密度.结论:黄连解毒汤对小鼠局灶性脑缺血慢性神经损伤有保护作用,能提高小鼠的最终生存率并促进神经功能的恢复.