基于代谢组学技术分析四物汤治疗原发性痛经证的作用机制

目的:从内源性代谢物的角度研究四物汤治疗原发性痛经证的作用机制。方法:构建苯甲酸雌二醇-缩宫素联用致大鼠痛经模型;采用UPLC-Q-TOF-MS技术分析痛经大鼠血浆中代谢物的指纹图谱,电喷雾正离子模式(ESI+)和负离子模式(ESI-)对样品进行检测,m/z 50~1 000,结合质谱信息和公共数据库检索对检测到的代谢物进行鉴定;运用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)筛选正常组、痛经模型组和四物汤组之间的差异代谢物;对差异代谢物进行KEGG(京都基因与基因组百科全书)代谢通路分析。结果:痛经模型大鼠中检测鉴定23种内源性代谢产物;其中痛经模型组与正常组相比,黄体酮,11-脱氧皮甾醇,牛磺熊去氧胆酸和溶血磷脂酸为差异代谢物[变量重要性投影值(VIP)1,P0.05]。四物汤组与痛经模型组相比,L-苯丙氨酸,L-酪氨酸,N-苯甲酰甘氨酸,L-蛋氨酸,11-脱氧皮甾醇和硬脂酸甘氨酰胺为差异代谢产物(VIP1,P0.05)。结论:四物汤对原发性痛经证大鼠体内差异代谢物有一定的回调作用,其作用机制主要与影响类固醇激合成、溶血磷脂酸代谢、氨基酸代谢相关。     

经典名方葛根芩连汤基准样品的HPLC指纹图谱及量质传递规律研究

目的 建立经典名方葛根芩连汤（Gegen Qinlian Decoction,GQD）基准样品的HPLC指纹图谱及指标性成分含量测定方法,研究GQD基准样品量质传递规律。方法 根据《伤寒论》记载方法遵古制备了15批GQD基准样品,并建立了15批基准样品的HPLC指纹图谱,明确指纹图谱中峰归属和相似度范围,并对出膏率范围、指标性成分含量范围及转移率范围等量质传递指标进行分析,初步建立GQD基准样品的质量控制体系。结果 15批GQD共标定了34个共有峰,且相似度良好（＞0.99）。基准样品中11种指标性成分质量分数分别为葛根素0.803 1%～1.093 8%,大豆苷0.104 8%～0.178 9%,大豆苷元0.011 7%～0.024 4%,黄芩苷0.470 9%～0.736 9%,汉黄芩苷0.211 2%～0.219 9%,黄芩素0.001 1%～0.002 2%,汉黄芩素0.001 2%～0.002 2%,盐酸小檗碱0.053 2%～0.115 4%,巴马汀0.022 4%～0.042 3%,甘草苷0.118 8%～0.195 4%,甘草酸0.087 6%～0.099 2%。饮片至水煎液、水煎液至基准样品的平均转移率分别为葛根素17.71%～19.69%、84.18%～104.00%,大豆苷10.32%～13.65%、86.90%～105.38%,大豆苷元21.13%～27.65%、64.64%～104.09%,黄芩苷22.46%～23.99%、71.58%～107.61%,汉黄芩苷21.38%～28.16%、82.54%～106.78%,黄芩素2.15%～3.81%、51.85%～83.33%,汉黄芩素4.83%～9.55%、43.75%～73.33%,盐酸小檗碱6.33%～8.70%、60.33%～99.95%,巴马汀11.09%～15.79%、60.56%～76.94%,甘草苷57.82%～76.53%、80.98%～103.70%,甘草酸14.98%～18.08%、87.96%～106.12%。15批基准样品干膏率传递率的均值为81.35%。结论 通过指纹图谱、出膏率及指标性成分含量测定相结合,对经典名方GQD基准样品的量质传递过程进行分析,可为后续GQD经典名方制剂的质量控制研究提供参考。     

附子理中丸大蜜丸、水蜜丸和浓缩丸3种剂型的化学特征关键质量属性辨识研究

目的 建立附子理中丸（Fuzi Lizhong Pills,FLP）处方的大蜜丸（Dami Pills,FLP-D）、水蜜丸（Shuimi Pills,FLP-S）及浓缩丸（Nongsuo Pills,FLP-N）的HPLC指纹图谱,同时测定7种药效成分含量,寻找FLP处方与剂型关联的化学特征关键质量属性。方法 采用分层抽样法结合研究实际,随机抽取市售FLP-D 30批,FLP-S 12批,FLP-N 12批,建立以上54批FLP的HPLC指纹图谱,并同时测定甘草苷、苯甲酰新乌头原碱、党参炔苷、6-姜酚、白术内酯III、白术内酯I、10-姜酚7种有效成分含量;利用主成分分析（principal component analysis,PCA）和偏最小二乘法-判别分析（partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA）方法对FLP-D、FLP-S和FLP-N各自的HPLC指纹图谱特征峰及7种有效成分进行分析。结果 FLP-D、FLP-S和FLP-N的HPLC指纹图谱分别标定出20、25、20个特征峰,通过PCA和PLS-DA,筛选出14个差异性标志物,其中8、9、12、17、18、25号峰来自甘草,29、32号峰来自干姜,22号峰来自白术。含量测定结果表明,甘草苷、苯甲酰新乌头原碱、6-姜酚、白术内酯III、白术内酯I在FLP-D、FLP-S和FLP-N中的含量差异显著,其中6-姜酚为变量重要性投影（variable importance in projection,VIP）值＞1.0的差异性标志物。结论 建立的HPLC指纹图谱与多成分同时测定方法能有效评价FLP-D、FLP-S和FLP-N的化学成分差异;识别出的14个差异性标志物可作为区分FLP-D、FLP-S和FLP-N的潜在化学特征关键质量属性;甘草苷、苯甲酰新乌头原碱、白术内酯III、白术内酯I可作为区分FLP-D与FLP-N或区分FLP-S与FLP-N的化学特征关键质量属性,6-姜酚可作为同时区分FLP-D、FLP-S和FLP-N 3种不同剂型的化学特征关键质量属性。为进一步完善FLP系列制剂的质量标准提供了参考,同时为解决同方异剂中药的质控指标同质化问题提供了新思路。     

经典名方桃红四物汤化学指纹图谱及9种成分含量测定研究

目的建立15批桃红四物汤汤剂化学指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为桃红四物汤经典名方的质量控制及评价提供参考。方法采用Thermo Hypersil Gold C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0m L/min,柱温30℃,检测波长225nm;建立HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)进行相似度分析,结合聚类分析评价15批样品的化学信息差异。进一步通过HPLC多成分波长切换法,测定样品中9种指标成分的含量,采用SIMCA 14.1软件进行偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),以寻找样品间的质量差异成分。结果建立了15个批次桃红四物汤汤剂HPLC指纹图谱,相似度均0.96,并确认35个共有锋,指认出没食子酸、绿原酸、苦杏仁苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、苯甲酰芍药苷、藁本内酯10个色谱峰(分别对应2、8、9、13～16、25、31、32号色谱峰)。含量测定显示,没食子酸、5-羟甲基糠醛、绿原酸、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎内酯Ⅰ 9种成分线性关系良好(r≥0.999 6),含量测定结果分别为187.5～344.4、6.2～154.8、413.2～459.2、507.5～923.5、873.8～1 202.0、2 122.3～2 782.9、59.2～121.3、6.4～26.9、38.9～79.6μg/g,其中以芍药苷、羟基红花黄色素A、芍药内酯苷等成分含量较高;更进一步将15批不同产地的样品分为3类。通过PLS-DA分析含量测定结果,发现芍药苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A和5-羟甲基糠醛是影响不同批次桃红四物汤汤剂质量贡献较大的4种成分。结论 HPLC指纹图谱结合多指标成分含量测定方法适用于桃红四物汤复方制剂的质量控制与评价。     

HPLC测定甘松中的蒙花苷

目的 建立测定甘松药材中蒙花苷含量的方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(60:40),流速1.0 ml·min-1,柱温30℃,检测波长327 nm.结果 蒙花苷色谱峰分离度良好,线性范围为0.2～2.0μg(r=0.9999),平均加样回收率为99.30%,RSD=1.32%.结论 所建方法准确、重复性好、专属性强,可为甘松药材的质量控制提供依据.     

高通量测序技术研究附子理中丸对脾阳虚IBS-D大鼠肠道菌群的影响

目的 研究附子理中丸对脾阳虚腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠肠道菌群的影响和作用机制,同时探讨脾阳虚证与肠道菌群的关系.方法 选取60只雄性SD大鼠随机平均分为空白组、模型组、附子理中丸低剂量组、附子理中丸高剂量组.空白组正常饲喂,模型组和附子理中丸低、高剂量组采用"饮食失节+劳倦过度+番泻叶灌胃"复合因素法造模2...     

高良姜的酒炙工艺及炮制前后药效对比研究

目的优选高良姜酒炙工艺,并比较炮制前后对小鼠胃肠运动的影响,为高良姜酒炙提供理论依据。方法采用正交试验设计,以浸出物、挥发油、高良姜素含量为评价指标,筛选酒炙高良姜的工艺参数,并比较高良姜酒炙前后对正常小鼠胃排空和肠推进的影响。结果酒炙高良姜最佳炮制工艺参数:100g饮片加黄酒15mL,炒制温度120℃,炒制时间20min。药效结果表明,高良姜酒炙后对小鼠胃排空和肠推进作用明显优于生品(P0.05)。结论筛选得到的高良姜酒炙工艺简便可行,可应用于大生产。药效试验结果也初步证明了古人高良姜酒炙的合理性。     

基于ICP-MS分析蓬莪术醋制前后煎液及沉淀物重金属转移率变化

中药饮片多以煎煮所得汤液服用,且静置冷却后往往有沉淀形成并被患者弃去;醋制一定程度上会改变饮片的特性,改变重金属转移至汤液的量。为探究蓬莪术醋制前后重金属在煎液及其沉淀中转移率的变化,该文采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS),以微波消解样品,以铟(In)为内标,以国家一级标准物质茶叶GBW10016(GSB-7茶叶)为质控标准物质,建立蓬莪术中铜(Cu)、砷(As)、镉(Cd)、铅(Pb)、汞(Hg)共5种重金属的ICP-MS测定方法,并测定6批次蓬莪术生品及其醋制品的饮片、煎液、沉淀中5种重金属的含量,通过换算得到重金属由饮片经过煎煮转移到煎液及沉淀中的百分率。结果显示醋制后Pb和Hg总转移率显著降低,Cd和Cu总转移率略降低,As总转移率略增高,而沉淀中重金属均有所降低,表明醋制对各重金属的转移率有不同程度的影响,说明醋制蓬莪术起到一定的增效减毒作用。     

甘草酸和甘草苷对乌头碱诱导斑马鱼心脏毒性的拮抗作用

目的:探究甘草主要有效成分甘草酸和甘草苷对乌头碱诱导斑马鱼心脏毒性的拮抗作用。方法:选择48hpf斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的乌头碱中后,选择心脏毒性表型最明显的乌头碱浓度,将其分别联用甘草苷和甘草酸。利用10μM乌头碱和30μM甘草苷,10μM乌头碱和10μM的甘草酸分别处理48hpf斑马鱼胚胎,在显微镜下观察斑马鱼生长状态、存活率,并对胚胎心包水肿情况进行拍照记录;置荧光倒置显微镜下,观察斑马鱼心脏收缩和舒张形态,并记录各项心脏功能指标(心跳、每搏输出量、心输出量以及心室短轴缩短率)。结果:随着乌头碱浓度的升高,斑马鱼出现心包水肿、心律增加、心脏结构异常等改变,且存活率下降,心脏毒性表型最明显的乌头碱浓度为10μM以上,而分别联用30μM甘草苷和10μM的甘草酸后,各项心脏指标得到有效恢复。结论:甘草主要有效成分甘草酸和甘草苷对乌头碱诱导的心脏毒性具有一定的拮抗作用。     

基于网络药理学的厚朴“发汗”科学内涵探究

目的利用网络药理学方法建立厚朴"发汗"前后的差异成分-靶点网络,并探究厚朴"发汗"前后药理作用差异的分子机制,进而揭示其发汗的科学内涵。方法通过查阅文献并筛选厚朴"发汗"前后的差异成分。利用SwissTarget Prediction预测差异成分的潜在靶点。利用STRING数据库筛选出最高置信度(得分0.900)的靶点并通过Cytoscape 3.6.0软件构建蛋白-蛋白互作网络。最后利用RProject中的clusterProfiler包对蛋白-蛋白互作网络进行GO注释和KEGG通路富集分析。结果通过查阅文献共筛选出9种差异成分(阿西米诺宾、β-桉叶醇、和厚朴酚、厚朴三酚B、木兰花碱、厚朴酚、紫丁香苷、瑞枯灵和magnoloside A)并预测得到137个靶点(除重后共86个)。通过对蛋白-蛋白互作网络GO注释及通路富集分析,共得到550个GO注释和30条KEGG通路。结论数据分析结果表明,"发汗"后厚朴药理作用的改变是化学成分相互作用的最终结果。其中,厚朴主要是通过5-羟色胺能突触、花生四烯酸代谢和钙信号通路发挥镇痛和抗胃溃疡作用。厚朴酚、和厚朴酚及β-桉叶醇等化学成分含量的改变是厚朴"发汗"前后疗效差异的主要原因。