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目的:探讨破骨细胞传代、冻存与复苏的可行性,为开展破骨细胞的相关研究提供新的技术手段与方法。方法:破骨细胞的传代:取成年SPF级雄性SD大鼠1只,体重250 g,腹主动脉采血,分离周围血单个核细胞,经RANKL、M-CSF诱导培养2周,形成多核破骨细胞后,采用胰蛋白酶消化、震荡、吹打法,制成细胞悬液,离心后用含RANKL、M-CSF的α-MEM完全培养基重悬,接种至6孔培养板与直径35 mm培养皿中。破骨细胞的冻存:取上述细胞悬液,离心后用DMSO、FBS、α-MEM(1∶2∶7)冻存液,按常规程序将细胞冻存于-196℃液氮中。破骨细胞的复苏:从液氮中取出冻存的破骨细胞,37℃水浴中快速解冻,加PBS离心清洗后,用含RANKL、M-CSF的α-MEM完全培养基重悬,接种至6孔细胞培养板与直径35 mm培养皿中。同时对传代与复苏培养中破骨细胞的消化与贴壁过程,采用倒置相差显微镜与活细胞工作站进行观察记录与动态成像,3 d后作TRAP染色。结果:破骨细胞经胰蛋白酶消化、震荡、吹打后,细胞基本上脱壁、悬浮,可以制成细胞悬液,用于传代与冻存。破骨细胞传代培养后,大多在2 h内开始贴壁,贴壁后胞内细胞核清晰可见。经液氮冻存的破骨细胞,复苏培养后2~3 h开始贴壁,胞质展开,可见多个细胞核。传代与冻存复苏培养后的破骨细胞,TRAP染色呈阳性反应。结论:破骨细胞虽然贴壁比较牢固,但经适当的消化、震荡及吹打,多数可脱壁悬浮,并能实现传代培养,同时还可采用常规方法进行细胞冻存与复苏培养,经传代与冻存的破骨细胞仍可保持破骨细胞的活性。破骨细胞的传代与冻存,可以按实验计划与用量需求,随时进行分量传代与复苏培养,为开展破骨细胞的相关研究提供新的技术手段与方法。 相似文献
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Colle's 骨折,即桡骨下端伸直型骨折,在骨伤科临床上十分常见,其手法整复方法也不尽相同,主要有拔伸牵抖法,单手推板法,以及双手推板法等。在整复过程中,有的采取骤然猛力牵抖折端,有的加大畸形反折断端,有的将桡、背侧移位作先后矫正、所施手法各有利弊。笔者认为,对折端采取骤然猛抖,或 相似文献
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目的应用活细胞成像技术观察脉冲电磁场作用下大鼠成骨细胞的生长、增殖过程,探讨不同脉冲电磁场强度对大鼠成骨细胞生长、增殖的影响。方法首先采用MTT法检测在15Hz,0.1、0.3、0.5、1.0mT脉冲电磁场连续刺激下,4种脉冲电磁场强度组与对照组的成骨细胞存活与增殖能力,筛选出最佳的脉冲电磁场刺激强度。根据筛选结果,选用频率15Hz、强度0.1mT的脉冲电磁场,应用活细胞成像技术,以Time-Lapse方式,对脉冲电磁场刺激组与对照组成骨细胞的生长、增殖过程,作多点平行对照记录,动态观察两组成骨细胞的贴壁速率与分裂速率。并采用MTT法同步检测两组细胞的增殖情况。结果原代培养3d的成骨细胞,在15Hz脉冲电磁场中连续刺激3d,经MTT法检测,1.0mT组细胞几乎全部死亡,0.5mT组与对照组比较细胞增殖能力无明显差别,0.3、0.1mT组与对照组比较细胞增殖能力增强(P0.05、P0.01)。活细胞成像Time-Lapse平行对照记录,动态观察分析表明,15Hz、0.1mT脉冲电磁场组观察野的细胞贴壁速率与对照组比较无明显差别,分裂速率较对照组观察野增快(P0.05),MTT法同步检测也证明0.1mT脉冲电磁场刺激组的细胞增殖能力较对照组增强。结论 15Hz、0.1mT脉冲电磁场对体外培养的大鼠成骨细胞增殖具有促进作用,但强度超过0.5mT的脉冲电磁场对成骨细胞增殖无明显促进作用,如果强度≥1mT反而会导致成骨细胞的死亡。 相似文献
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目的 评估各种诱发电位模式的波形改变在脊髓手术监护中的临床意义。方法 18只成猫在气管插管、麻醉机控制下,于脊髓R、k背侧行定量渐增性压迫,记录SCEP、Tc-MEP、sMEP的波形变化,观察各组术后神经功能和脊髓病理组织学改变。结果在脊髓压迫下,SMEP的波形衰减较SCEP、Tc-MEP快,且出现较早。SMEP波形消失组的脊髓病理组织学检查未发现明显改变。结论 SMEP对脊髓后方压迫反应最为敏感,SMEP的消失并不意味术后一定出现脊髓功能障碍。 相似文献
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目的 研究破骨细胞的形成及其特殊细胞生物学行为。方法 采用活细胞成像技术连续动态观察大鼠周围血单核细胞在核因子κB 受体激活物配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子 (macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导下向破骨细胞分化及形成具有骨吸收功能的多核细胞的全过程。采用倒置相差显微镜观察、抗酒石酸酸性磷酸酶染色、骨磨片扫描电镜观察法对破骨细胞进行鉴定。结果 细胞诱导培养2周后,倒置相差显微镜观察可见大量多核细胞形成;抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示绝大部分多核细胞与单核细胞均呈阳性反应;骨磨片扫描电镜观察可见较多的骨吸收陷窝、坑洼、沟道及破骨细胞。活细胞成像观察表明多核破骨细胞是由单核细胞、单核细胞与多核细胞及多核细胞之间相互融合而成,其细胞间的融合均发生在贴壁状态;显微缩时电影观察显示破骨细胞形态复杂多变,多核破骨细胞可以发生分裂。结论 大鼠周围血单核细胞在RANKL和M-CSF诱导下可向破骨细胞分化,形成具有骨吸收功能的破骨细胞。破骨细胞能够通过多种方式融合形成巨大的多核细胞,使其核数增加、体积增大、形态伸缩多变、质膜贴附面积广泛扩展,同时破骨细胞还可通过分裂来缩小体积、减少核数,以适应局部形态学、生物力学及骨吸收动力学的需求。这提示破骨细胞的融合及非有丝分裂方式可能是其发挥功能效应与骨吸收效率的一种特殊细胞生物学行为。 相似文献
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肱骨髁上骨折,临床上十分常见,好发于5—10岁的儿童。根据致伤暴力和骨折移位特点,可分为伸直型和屈曲型两种。在整复肱骨髁上骨折时,必须恢复其正常的前倾角和携带角,这对伤后功能和形态的恢复是十分重要的。与此同时,对骨折端的旋转移 相似文献
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X线电视尤其是移动式C型臂X线电视系统,在骨伤科临床应用十分广泛。但通常使用的X线电视设备只有单向透视功能,无法同时观察不同角度上二个平面的影像,因而难以进行三维实时动态的空间定位与导向,给手术操作带来一定的困难,有时甚至造成失误。为此作者根据国外进修所见,就双向X线电视设备的种类、组合方式,以及在骨伤科临床的应用作一介绍,供各位同行参考。 相似文献
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