猴副流感病毒SV5 PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。方法根据GenBank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。结果利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccⅢ限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。结论初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。     

生物活性肽与高血压性心肌肥大

高血压患者持续血压增高,尤其是夜间持续升高,对左心室肥大的发生发展起着重要的作用。高血压导致心肌肥大的因素可分为机械性和化学性刺激两大类,其化学刺激指心脏的自分泌、旁分泌和内分泌系统所分泌的生物活性物质,在心肌肥大的发生、发展中起到重要作用,研究其具体经过对指导心血管疾病的康复具有重要的理论和实践意义。     

苯并呋喃衍生物的合成

【目的】设计、合成具有扩张冠状动脉活性的新型苯并呋喃衍生物。【方法】在参阅文献的基础上,利用格氏反应等化学方法进行合成,并对未见文献报道的目标化合物进行核磁共振和质谱分析。【结果】合成了11个目标化合物,波谱鉴定及数据分析结果表明,其中有9个为新化合物。【结论】经核磁共振和质谱确认,合成的新化合物与设计的化合物结构一致。     

两种HSV-1及猴B病毒相关抗体测定方法的比较

目的以人单纯疱疹病毒(HSV-1)做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释,取1 mL接种于已经长成单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数,算出病毒悬液中每毫升所含蚀斑单位,即滴定出HSV-1的TC ID50。同时,用免疫荧光方法(IFA)对猴和人疱疹阳性血清进行滴定,得到其血清的效价。其次,用滴定出的病毒液分别与两种阳性血清体外中和后,接种到单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数。最后,计算出其蚀斑减少率。结果用1%甲基纤维素作覆盖层的蚀斑数量平均为10-5PFU,能形成115~116个/mL蚀斑,形状呈黍米大小的规则圆形,其蚀斑边缘清晰。IFA滴定的人HSV-1阳性血清与猴BV阳性血清的中和抗体均为1∶80。人HSV-1和猴BV两种阳性血清的空斑减少率均为100%。结论确定了利用1%甲基纤维素做为覆盖层可得到清晰可靠的蚀斑,由此方法检测到用人HSV-1可以代替猴B病毒,筛查猴B病毒抗体。且为将来进行药物筛选和中和实验中利用病毒空斑法建立方便、可靠的方法。     

双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量

【目的】建立双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷含量的方法。【方法】采用薄层扫描法测定黄芪甲苷含量，展开剂为氯仿-甲醇-水（14：7：2），扫描波长：λS：530nm，λR：700nm。【结果】薄层色谱斑点清晰，黄芪甲苷在1．000～7．000μg／ml范围内线性关系良好，加样回收率97．31％，RSD=1．85％（n=6）。【结论】以双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量，方法灵敏，准确。     

SARS恢复猴和灭活疫苗免疫实验猴再次感染SARS-CoV研究

目的研究SARS-CoV实验感染恢复猴，以及灭活疫苗免疫猴对SARS—CoV再次感染的疾病状况。方法动物分四组，分别为SARS感染恢复动物组，灭活疫苗免疫不同时间2组和SARS模型对照组。动物分别接种病毒，1～7d进行病毒检测和血清学检测，7d后安乐处死动物，进行病理检测。结果实验感染SARS-CoV猴和灭活疫苗免疫猴均产生了中和抗体，猴体内SARS-CoV复制得到一定程度的抑制，病理变化也比SARS-CoV模型组轻。结论SARS-CoV感染恢复猴对SARS-CoV再次感染有一定抵抗作用；灭活疫苗免疫是预防实验猴感染SARS—CoV的有效方法。     

荧光RAA检测小鼠微小病毒的研究和应用

目的 病毒培养、组织学、免疫学及普通PCR方法等在小鼠微小病毒(minute virus of mice, MVM)的检测方面都存在一定的不足,不能满足目前实验动物饲养机构现场检测MVM病毒的需要,因此探索开发一种新的、简单易用,便于现场检测MVM的检测方法具有重要的意义。方法 根据Genbank公布的MVM序列,对MVM高度保守序列区域Ns1基因设计荧光重组酶介导链替换核酸扩增的引物和探针,建立了一种MVM荧光法重组酶介导链替换核酸扩增技术(Real-time RAA)检测方法,对其特异性、室温储存稳定性、灵敏度及临床样本验证方面与qPCR法进行对比分析。结果 荧光RAA法在39℃20 min内即可检测到MVM病毒特异性扩增曲线;其灵敏度为10 copies/μL;与Reo-3、MHV-1、MHV-3、MHV-A59、MHV-JHM病毒均无交叉反应;检测试剂室温储存20 d无明显的扩增性能下降;分别对15份阳性模拟样品进行荧光RAA法与qPCR法的检测比对,结果显示两种方法的符合率为15/15;对两种方法的相关性进行统计学分析,结果显示相关系数R²=0.85,两...     

生物传感器在医药领域中的应用研究

目的:着重介绍电化学生物传感器在基因诊断、药物分析等方面的医学应用,并展望应用前景和发展方向。资料来源:应用计算机检索Medline2000-01/2005-11的文章,检索词为“ElectrochemicalDNABiosensor”,限定文章语言种类为English;同时检索http://www.wanfangdata.com.cn和http://dx2.cqvip.com2000-01/2005-11的文章,检索词为“生物传感器,医药学,药物分析,基因诊断”,限定文章语言种类为中文。资料选择:纳入标准:①电化学生物传感器的研究。②在医药领域中的应用研究。排除标准:①较陈旧的文献。②综述文献。③重复研究。资料提炼:共收集到86篇与电化学DNA生物传感器相关的文献,其中15篇符合纳入标准,排除的71篇文章系同一类重复性研究和综述文献。资料综合:①DNA传感器的基础研究:电化学生物传感器不仅可以用来识别特定碱基序列的DNA,还可以用来检测DNA的损伤,它能在短时间内对细胞蛋白质、基因及其他与生命过程相关的物质进行信息采集,可以帮助医生从基因层次上了解疾病的发生、发展过程,有助于对疾病的及时诊断和治疗。②临床研究:电化学生物传感器可以广泛地应用于对体液中的微量蛋白、小分子有机物、核酸等多种物质的检测。③生物制药:电化学生物传感器可用于生物制药,原理是采用DNA重组技术或其他生物技术来研制的蛋白质或核酸类药物。④生物传感器的未来:由于生物传感器潜在的巨大优越性,在未来的医学检验中的应用范围必将不断拓展,而广阔的市场需求又将进一步推动生物传感器的迅速发展。结论:随着计算机技术、微制造技术和生物材料学的不断发展,生物传感器技术在医学领域的应用将越来越广泛,它将取代医学上一些传统的检测、化验方法,成为广泛普及的常规分析检测仪器。     

低氧及跑台运动训练对大鼠左心室超微结构的影响

目的观察低压低氧和跑台训练对大鼠左心室超微结构的影响,为正确认识高原低氧训练与左心室超微结构的关系提供实验资料。方法大鼠随机分为常氧对照组、常氧运动组、低氧对照组和低氧运动组。用MPA-心功能分析系统记录血压和心率。用透射电镜观察了左心室的超微结构。结果低氧对照组大鼠心肌纤维排列紊乱,闰盘扭曲,细胞核变形,肌质网扩张。低氧运动组大鼠心肌纤维排列有序,肌节各带清晰,间隙水肿,糖原丰富,胞核染色质稀疏。常氧运动组：心肌纤维排列整齐,细胞核形态正常,染色质均匀,可见核仁,两端基质中含中等量线粒体,闰盘密度均匀,线粒体嵴清晰。常氧对照组：心肌纤维排列整齐,细胞核居中,染色质均匀。结论低氧对大鼠左心室心肌纤维、肌节、闰盘及肌质网等有不同程度的损伤;跑台训练可部分抵消低氧对左心室超微结构的影响。     

生物传感器在医药领域中的应用研究

目的：着重介绍电化学生物传感器在基因诊断．药物分析等方面的医学应用，并展望应用前景和发展方向。资料来源：应用计算机检索Medline 2000—01／2005-11的文章，检索词为“Ekctmchemical DNA Biosensor”，限定文章语言种类为English；同时检索http：//www．wanfangdata．com．cn和http：//dx2．cqvip．com 2000-01／2005-11的文章，检索词为“生物传感器，医药学，药物分析，基因诊断”，限定文章语言种类为中文。资料选择：纳入标准：①电化学生物传感器的研究。②在医药领域中的应用研究。排除标准：①较陈旧的文献。②综述文献。③重复研究。资料提炼：共收集到86篇与电化学DNA生物传感器相关的文献，其中15篇符合纳入标准，排除的71篇文章系同一类重复性研究和综述文献。资料综合：①DNA传感器的基础研究：电化学生物传感器不仅可以用来识别特定碱基序列的DNA，还可以用来检测DNA的损伤．它能在短时间内对细胞蛋白质．基因及其他与生命过程相关的物质进行信息采集，可以帮助医生从基因层次上了解疾病的发生、发展过程，有助于对疾病的及时诊断和治疗。②临床研究：电化学生物传感器可以广泛地应用于对体液中的微量蛋白．小分子有机物．核酸等多种物质的检测。③生物制药：电化学生物传感器可用于生物制药．原理是采用DNA重组技术或其他生物技术来研制的蛋白质或核酸类药物。④生物传感器的未来：由于生物传感器潜在的巨大优越性，在未来的医学检验中的应用范围必将不断拓展，而广阔的市场需求又将进一步推动生物传感器的迅速发展。结论：随着计算机技术．微制造技术和生物材料学的不断发展，生物传感器技术在医学领域的应用将越来越广泛，它将取代医学上一些传统的检测．化验方法，成为广泛普及的常规分析检测仪器。