基于斑马鱼模型的枸杞子改善骨质疏松活性部位筛选及其机制初探

利用斑马鱼幼鱼筛选枸杞子改善骨质疏松的活性部位,并通过斑马鱼成鱼骨质疏松模型验证筛选结果。以泼尼松龙为诱导剂构建斑马鱼幼鱼及成鱼骨质疏松模型,给予枸杞子不同提取物及化学部位共9组样品,通过茜素红染色后统计第一椎骨面积及光密度值,椎骨骨节数量以筛选枸杞子抗骨质疏松的活性部位。采用茜素红染色观察斑马鱼成鱼鳞片基质矿化及骨吸收情况;采用碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP/TRACP)染色检测鳞片中成骨细胞和破骨细胞活性;采用qRT-PCR法测定鳞片中骨代谢相关基因alp、骨桥蛋白(opn)、成骨细胞特异性转录因子(sp7)、组织蛋白酶K (ctsk)、tracp、Runx家族转录因子2b (runx2b)的表达情况。结果显示,枸杞子各样品组均能够不同程度地改善斑马鱼幼鱼第一椎骨形成面积、染色光密度值和椎骨骨节数量,其中以枸杞子多糖部位效果最优。枸杞多糖能够显著抑制斑马鱼鳞片中骨吸收陷窝的形成,增强鳞片中ALP活性,降低TRAP活性,上调alp、sp7、opn基因,下调ctsk、tracp基因的表达。研究结果表明,枸杞多糖能够调节成骨细胞与破骨细胞活性,减少骨吸收,促进骨形成,...     

SYBR-Green实时定量PCR用于Vero宿主细胞DNA残留量的检测

目的:建立基于SYBR-Green荧光染料实时定量PCR检测Vero宿主细胞DNA残留量的方法。方法:提取Vero细胞基因组DNA,设计细胞基因组高度重复顺序AGMr(HindIII)-1基因片段的特异性引物,通过PCR扩增AGMr(HindIII)-1序列中一段特异性cDNA片段,克隆至pGEM-T Vector,重组质粒经酶切及测序鉴定合格后命名为pGEM-T/AGMr(HindIII)-1-S。结果:使用重组质粒和细胞基因组DNA分别作为检测标准品,均取得了良好的结果,其检测灵敏度分别达到了0.03 fg.μL-1和0.03 pg.μL-1。结论:SYBR-Green实时定量PCR可用于Vero宿主细胞DNA残留量的准确定量。     

有限稀释法筛选轮状病毒LD9株纯化方法的建立及应用

目的:建立有限稀释法克隆纯化轮状病毒的试验方法,筛选出感染性强、遗传特性稳定的轮状病毒基因重配株LD9。方法:梯度稀释LD9毒种,用5个稀释度(10-4～10-8)的病毒感染铺满单层Vero细胞的96孔板细胞,培养6 d,-20℃冻融,培养物传代至24孔板继续培养6 d,显微镜下观察细胞病变(CPE),-20℃冻融后检测。以相同方法重复克隆纯化3次,筛选获得病毒滴度稳定、具有稳定遗传特性的纯化病毒,由T25、T75到2,4,10层细胞工厂逐级放大培养。结果:筛选出适用于疫苗生产用的遗传特性稳定、感染性强的LD9疫苗候选株。结论:建立了适用于轮状病毒克隆纯化的筛选方法。     

荧光灶试验和TCID50-ELISA方法在Ⅲ价轮状病毒重配疫苗感染滴度测定中的对比研究

目的:对比荧光灶试验和TCID50-ELISA方法测定III价轮状病毒基因重配疫苗感染滴度的精确性,重复性和可行性。方法:同时采用TCID50-ELISA方法和荧光灶试验方法测定Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度,对测定结果进行比较分析。结果与结论:在Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度测定中,荧光灶试验方法和TCID50-ELISA方法各有其特点,荧光灶试验方法更加精确和快速,相对于TCID50-ELISA方法,具有更低的变异性,即其重复性较高;而TCID50-ELISA方法受主观因素的影响较低。     

复方木尼孜其颗粒对盆腔炎性疾病后遗症大鼠血清细胞因子的影响

目的 研究复方木尼孜其颗粒(MNZ)对盆腔炎性疾病后遗症的作用及其机理,为临床上选择复方木尼孜其颗粒治疗盆腔炎性疾病后遗症提供依据.方法 复方木尼孜其颗粒对盆腔炎性疾病后遗症大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)细胞因子的作用研究,以此探讨复方木尼孜其颗粒对盆腔炎性疾病后遗症的影响.结果 各给药的TNF-α、IL-1β水平低于模型组.小、中剂量组IL-10水平与模型组相当,大剂量组IL-10水平高于模型组.结论 各给药组对炎性因子均有降低作用,这种降低现象在疾病后期通常是炎症减轻,机体逐渐恢复的现象,因此MNZ在盆腔炎性疾病后遗症的临床应用中具有一定的优势.     

模式生物斑马鱼在中药活性筛选和毒性评价中的应用进展与展望

斑马鱼作为一种非哺乳类模式生物,因其具有体积小、易饲养、发育快速、繁殖力强、便于观察等优势,在医药研究领域得到了广泛应用。近年来,随着技术和方法的不断改进,模式生物斑马鱼在中药领域的应用也逐渐深入,特别是对中药复杂的有效成分、活性物质以及毒性的评价与筛选。斑马鱼作为一种整体动物模型,能够较为客观地对中药活性物质以及毒性进行评价,实现快速有效的高通量筛选。通过对近年来国内外相关文献的查阅与归纳整理,综述了模式生物斑马鱼在中药活性筛选和毒性评价中的应用进展,主要从抗炎、抗血管生成、促血管生成、抗骨质疏松、抗酒精性肝损伤、抗神经性疾病等活性成分筛选以及肝毒性和胚胎毒性等方面进行总结分析,以期为中药安全性与有效性评价提供新的方法和技术。      

PE对正常及糖尿病大鼠心脏变时作用的比较

目的比较苯肾上腺素(PE)对正常及糖尿病大鼠心脏变时作用的差异,分析其可能的机制。方法采用心电图及膜片钳全细胞式的记录方法,观察苯肾上腺素对正常及糖尿病大鼠离体心脏心率矫正QT间期(QTc)及左心室肌细胞动作电位的差异作用。结果与正常动物相比,苯肾上腺素更明显延长糖尿病大鼠离体心脏QT间期及左心室肌细胞复极90%水平的动作电位(APD90)。结论与正常动物相比,苯肾上腺素明显延长糖尿病大鼠离体心脏QTc是由于其更显著延长左心室肌细胞复极90%水平的动作电位(APD90)。     

实验性高眼压动物模型

1动物1．回兔家兔眼球便于操作和观察，因而是眼科研究中最常用的动物。家兔虹膜内通常有色素细胞，眼睛的颜色即由这种细胞决定；白化家兔眼睛虹膜完全缺乏色素，故呈现血管内血色，即红色。Bartels等”，”报道，用有色兔（Pigmentedrabbits）和白化兔试验抗青光眼药惯吗洛尔（timolol）。结果后者的药效持续时间小于前者。作者认为这是因为暖吗洛尔与色素发生可逆性结合，然后缓慢释放，延长了其生物利用度的缘故。因为人的眼中也存在色素细胞，故有色免用于卜受体桔抗剂降眼压效果的研究更为合适。1．2猴Hayreh通过人工控制猴全身血压…     

运用唾液腺治疗重症干眼的应用解剖

背景唾液腺移植或导管转位可提供持续性分泌的、生理性的泪液替代物,为重症干眼的理想治疗方法,但其相关解剖学资料较少,且一些研究中的结论尚存在争议,限制了其在临床应用中的改良和推广。目的探讨三大唾液腺移植或其导管移位治疗重症干眼的解剖学基础、手术可行性及各自的优缺点,为进一步的临床应用提供依据。方法在手术显微镜辅助下对34侧颈动脉灌注红色乳胶的成人头颈部标本进行解剖,观察面神经腮腺外分支与腺体的关系,三大唾液腺的形态、大小,导管的长度和外径,追寻其血供来源及分支走行、血管外径、毗邻关系等,并对眼眶周围及额面部血管进行解剖,寻找可供吻合的受区动静脉。在人体标本上模拟腮腺导管转位、下颌下腺及舌下腺游离移植手术。结果腮腺导管位置较固定,导管长度为（4．20±1．10）cm,外径为（0．60±0．30）cm,腮腺导管转位术部分需用颊黏膜或静脉等做导管延长,术中应避免损伤面神经颊支、颧支和颞支;下颌下腺移植术,血管蒂为面血管,外径为（2．70±0．28）mm,移植血管蒂长（1．90±0．30）cm,受区血管为颞浅血管;舌下腺移植术,血管蒂为舌下血管（30侧,占88．2％）或颏下血管（4侧,占11．8％）,其外径分别为（1．92±0．36）mm和（1．96±0．54）mm,移植血管蒂长分别为（2．60±1．10）cm和（3．50±0．40）cm,受区血管为颞浅血管额支,本组中3侧标本舌下腺阙如,占8．8％。结论基于解剖学研究,三大唾液腺移植或其导管移位治疗重症干眼是可行的,并各具优势。腮腺导管转位和下颌下腺移植已应用于临床,舌下腺移植尚需动物实验进一步证实其应用价值。     

外固定架联合髂腰固定术治疗垂直不稳定型骨盆骨折

目的 探讨应用外固定架联合髂腰固定术治疗垂直不稳定型骨盆骨折的临床效果.方法 对2008年1月至2009年3月收治的9例垂直不稳定型骨盆骨折患者进行手术治疗.男4例,女5例;年龄19～56岁,平均37岁.9例均为Tile C型骨折,其中C1.2型3例,C1.3型6例.采用后路患侧下腰椎旁切口入路,垂直移位复位后,椎弓根钉棒系统固定L4.5椎体和髂后上棘,前路双侧髂前上棘组合式外固定器固定.结果 9例患者术后获得12～18个月随访,平均14.3个月.术后X线片均示骨盆骨折复位满意,后环形态恢复良好;根据Matta骨盆骨折复位评定标准,优6例,良3例.术后2例患者骶丛损伤压迫症状解除,未出现医原性神经、血管损伤.下肢行走、蹲屈功能恢复满意.术后12个月Majeed评分:优7例,良2例.结论 外固定架联合髂腰固定术治疗垂直不稳定型骨盆骨折疗效满意,且具有操作简便、并发症少的特点.

Abstract：

Objective To evaluate the clinical outcomes of external fixator with lumbopelvic distraction spondylodesis in treatment of vertically unstable pelvic fractures. Methods From January 2008 to March 2009, 9 patients (4 males and 5 females) with a vertically unstable pelvic fracture were treated with modular external fixator with lumbopelvic distraction spondylodesis. According to the classification of Tile, 9fractures were classified as type C. This fixation construct comprises a vertical lumbopelvic distraction component which fixed L4.5 and the posterior superior iliac spine and a transverse fixation which fixed anterior iliac spine with external fixator. Results All patients were followed up 12-18 months after surgery, with an average of 14.3 months. Postoperative X-ray showed satisfactory reduction of pelvic fracture. Pelvic fractures healed in all patients without loss of reduction 3-6 months after operation. According to Matta reduction evaluation criteria, 6 patients were excellent and 3 good. For the two patients with sacral neurological injuries,appropriate surgical decompression was performed to improve the symptom and minimize the deformity. No iatrogenic complications of neurovascular injury occurred. Patients now walk unassistedly without pain in the waist or legs, and with no shortening of lower limbs or claudication. By considering symptom and satisfactory scores, the Majeed functional assessment revealed that seven patients had excellent results and two good at one year. Conclusion External fixator with lumbopelvic distraction spondylodesis that allowed early mobilization and ambulation, with general applicability and definite safety, is an effective surgical technique for the treatment of vertically unstable pelvic fracture.