小儿先天性胆管扩张症囊肿内胆汁酸盐的LC-MS/MS分析

目的 探讨小儿先天性胆管扩张症囊肿内胆汁中胆汁酸谱的特点及其意义.方法 通过建立人类已知的全部15种胆汁酸改良的液相色谱串联质谱定量检测方法 ,以我院2002年10月至2004年6月收治小儿先天性胆管扩张症(CBD)16例为研究对象,其中男11例,女5例,年龄11～134个月,平均(44.8±24.6)个月,术前B超和(或)CT、术中胆道造影确诊为先天性胆管扩张症.对16例先天性胆管扩张症囊肿内胆汁进行胆汁酸定量检测.结果 先天性胆管扩张症囊肿内总胆汁酸的浓度与对照组比较明显降低,组成胆汁酸谱的各种胆汁酸与对照组比较相应减少,未见致癌性胆酸浓度增高.儿童胆汁中甘氨熊脱氧胆酸含量较高,总胆汁酸的降低与肝纤维化程度呈正相关.结论 先天性胆管扩张症患儿存在胆汁酸代谢异常,可能与肝脏继发性损伤程度有关,异常的胆汁酸谱可能与胆结石的发生相关.     

HPLC法测定大黄凝胶剂中大黄素的含量

目的建立一种简便的测定大黄凝胶剂中大黄素含量的HPLC方法.方法色谱柱为DiamonsilTM(钻石)C18柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(9010);检测波长为288 nm;流速为1 mL/min.大黄素的保留时间为9.91 min,凝胶剂预处理采用流动相超声溶解法.结果大黄素在0.2000～0.8000 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9994);平均回收率为100.9%;平均加样回收率为99.96%;RSD为0.83%～1.05%(n=5).结论本法简便可靠,可较好地满足大黄凝胶剂质量控制的需要.     

裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平的检测

目的 检测生长期和成年期裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平,以了解裸鼹鼠的正常免疫水平.方法 通过眼眶静脉丛采集6月龄和12月龄裸鼹鼠外周血,提取外周血白细胞mRNA,反转录成cDNA后,实时定量PCR检测各组裸鼹鼠外周血中白细胞IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-12、TN F-α、IFN-γ的mRNA表达水平.结果 除了IFN-γ、IL-4各组间无显著差异,6月龄裸鼹鼠的IL-2、TNF-α显著高于12月龄裸鼹鼠,尤其是6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平显著较高.而细胞因子IL-1,IL-6中,6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平也显著高于12月龄裸鼹鼠.另外,对细胞因子IL-8、IL-12表达检测结果表明,12月龄雌性裸鼹鼠的IL-8表达水平最低,而12月龄雄性裸鼹鼠的IL-12表达最低.结论 生长期雄性裸鼹鼠的细胞免疫水平和体液免疫水平均高于同龄的雌性动物和成年动物.     

抑癌基因p53在裸鼹鼠不同组织中表达水平的差异

目的 比较裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠组织中抑癌基因p53表达的差异,并分析p53基因在不同年龄裸鼹鼠不同组织中表达水平的差异.方法 采用Western blotting检测新生裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠肝脏、肺脏、脑、肾脏中p53蛋白的表达,进一步比较了不同年龄裸鼹鼠肝脏、肺脏、脑、肠道中p53蛋白的表达,同时采用RT-PCR检测了裸鼹鼠肝脏、肺脏中p53基因的转录水平.以及低氧处理裸鼹鼠皮肤成纤维细胞中p53基因的表达水平.结果 新生裸鼹鼠肝脏、肺脏、脑、肾脏组织中p53蛋白的表达低于新生C57BL/6J小鼠组织,成年裸鼹鼠肝脏、肺脏组织中p53蛋白表达量亦显著高于幼年裸鼹鼠.裸鼹鼠成纤维细胞在低氧条件下p53蛋白的表达量较高,并且随着低氧处理时间的延长,表达量进一步升高.结论 新生裸鼹鼠组织中抑癌基因p53表达水平显著低于C57BL/6J小鼠,并且p53基因随着年龄增长而发生变化.     

HPLC法测定人血清中头孢呋肟浓度

本文建立了快速、简便测定人血清中头孢呋肟反相HPLC法,采用5×20mn不锈钢柱内填10um YWG-C_(18)H_(37)17定相,流动相甲醇:水:冰醋酸(28:71:1v/v),流速1.2ml/min,以头孢噻肟为内标物,紫外检测波长290nm,用10％三氯醋酸作蛋白沉淀剂,与血清之比为1:2(v/v)。头孢呋肟的日内回收率为100.34±6.60％,日间回收率为99.69±6.33％。头孢呋肟最低检测限为2ng,最低检测浓度为0.2μg/ml。在0.25～10μg/ml浓度范围内线性良好,相关系数r=0.9999。     

从研究者角度谈Ⅰ期临床试验健康受试者的管理和权益保护

Ⅰ期临床试验是药物临床研究的起始阶段,是整个药物研发链中十分重要的一环。Ⅰ期临床试验通常是以健康受试者为主要研究对象的单中心临床研究,健康受试者不但不能获得疾病治疗的益处,还常常需要承受高剂量试验药物所引起的不良反应。对Ⅰ期临床试验受试者的保护应贯穿在试验的整个过程中,从方案设计、伦理审查和知情同意、保险和研究协议、身份识别和个人信息保护、临床观察及安全性评价等方面进行严格管理。     

血清中脱甘氨酸米多君的液相色谱-荧光检测法测定

建立了血清中脱甘氨酸米多君的反相高效液相色谱－荧光检测法。血清样品经C2小柱固相萃取后，采用Diamonsil C18分析柱，甲醇－0．1％三氟醋酸溶液（28：72）为流动相，荧光激发波长为288nm，发射波长为328nm。以甲氧明为内标。脱甘氨酸米多君在0．5－32ng/ml范围内线性关系良好。方法的检测限为5pg，提取回收率大于86％，批内、批间精密度为1．2％－5．4％。     

健康人口服盐酸黄连素片剂后的尿药分析与药物代谢初步研究

本文以13-甲基小檗碱为内标,用正相高效液相色谱-荧光检测的方法定量分析尿液中的小檗碱.考察了健康人一次口服 0.2g 盐酸黄连素糖衣片后 96h内小檗碱尿药排泄量变化,按矩量法求得其体内药物平均滞留时间(MRT)为32.63±6.15 h,累积尿药排泄量为 27.49±4.74μg;首次检测到小檗碱在人体内有四个未知的代谢峰.     

Rp－HPLC法测定血清中的抗生育甾体药物利洛司酮

以ＲＵ４８６为内标，建立了血清样品中新型抗孕激素甾体药物利洛司酮（ｌｉｌｏｐｒｉｓｔｏｎｅ）的反相高效液相色谱法。色谱分析条件为μＢｏｎｄａｐａｋＣ１８柱１０μｍ，３００ｍｍ×３．９ｍｍＩＤ；流动相为甲醇－二氯甲烷－１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷酸盐缓冲液（ｐＨ４．０）（６７：５：２８ｖ／ｖ）；紫外检测波长为３０２ｎｍ。利洛司酮的检测限为１ｎｇ（Ｓ／Ｎ≥４：１）。血清样品经二次液一液超声振荡萃取后，得到了较好的净化。血清样品中利洛司酮的方法回收率为１０３．３％，日内精密度及日间精密度平均ＲＳＤ为３．５１％及２．９２％。在浓度为１０～１０００ｎｇ·ｍｌ－１血清范围内呈线性关系。