放射诱导启动子的合成与鉴定及质粒pcDNA3．1（＋）／E-CDglyTK的构建

【目的】合成放射诱导启动子序列并构建其调控双自杀基因的真核表达质粒peDNA3．1（＋），E-CDglyTK。【方法】利用人工寡核苷酸片段合成放射诱导启动子，以绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因转染Tca8113细胞，经流式细胞仪鉴定其辐射诱导特性。将pCEA-CDglyTK中双自杀基因CDglyTK亚克隆到pcDNA3．1（＋），然后把合成启动子插入到CDglyTK上游构建质粒peDNA3．1（＋），E-CDglyTK并酶切鉴定，阳离子脂质体介导其转染舌鳞癌Tea8113细胞，RT-PCR观察CDglyTK表达及诱导放疗的增效作用。【结果】合成启动子序列分析与设计序列完全一致；低剂量放射线照射可诱导这种人工启动子增强GFP在Tea8113细胞中的表达；重组质粒的酶切图谱与预期一致；3Gy放疗显著增强CDglyTK在Tea8113细胞中的表达。【结论】成功合成放射诱导启动子并构建由其调控双自杀基因的真核表达质粒peDNA3．1（＋）／E-CDglyTK，为进一步研究肿瘤放射一基因治疗奠定了基础。     

放射诱导启动子介导p53上调凋亡调控因子基因靶向治疗舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤

目的探讨放射诱导启动子介导p53上调凋亡调控因子(PUMA)基因靶向治疗舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)裸鼠移植瘤的疗效。方法构建放射诱导启动子介导PUMA基因表达的真核表达质粒pcDNA(+)3.1/E-PUMA,建立人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型,以脂质体为载体进行瘤内转染,辅以3Gy放疗,描述肿瘤生长曲线,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PUMA的mRNA水平,免疫组化检测细胞核增殖抗原的表达,原位末端标记法检测细胞凋亡。数据分析采用SPSS 11.0统计软件,两样本均数比较采用χ2检验。结果放射诱导启动子介导的PUMA基因转染对舌鳞癌裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用,诱导放疗显著增强了PUMA的mRNA表达水平,RT-PCR检测发现其电泳条带灰度值从(0.325±0.075)上调至(0.371±0.096),P<0.01;诱导放疗可显著提高疗效,增殖指数由32.27%下降至22.77%,P<0.01;凋亡指数从14.43%上升为27.98%,P<0.01。结论放射诱导启动子作为基因治疗分子开关可介导PUMA基因在人舌鳞癌裸鼠移植瘤中靶向表达促进细胞凋亡,为舌鳞癌放射基因治疗提供了新思路。     

黄芪注射液浓缩液微乳促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的 探讨黄芪注射液浓缩液微乳对鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响.方法 三黄肉鸡种蛋随机分为4组,孵育5 d后,将黄芪注射液浓缩液微乳、黄芪注射液浓缩液、空白微乳,生理盐水对照品分别加于CAM表面的载体(Ⅰ型胶原)上,作用后制备CAM标本,解剖显微镜下计数新生血管数目.结果 促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成作用强弱的顺序依次为:黄芪注射液浓缩液微乳＞黄芪注射液浓缩液(P＜0.05)>生理盐水(P＜0.01)>空白微乳;生理盐水与空白微乳组无显著差异.结论 黄芪注射液浓缩液微乳具有明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用.     

转基因载体聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球的制备

目的　制备聚乙二醇 聚谷氨酸两嵌段共聚物 (PEG PBLG )纳米微球并观察其转基因能力。方法　合成两亲嵌段共聚物PEG PBLG ,红外光谱 (IR)、核磁共振谱 ( 1H NMR )、凝胶渗透色谱法 (GPC)测定其组成和结构 ;乳化溶剂蒸发法制备DNA/PEG PBLG纳米微球 ,透射电镜观察其形态 ,DNaseⅠ消化实验测试其DNA保护能力 ,以GFP为报告基因转染Tca8113细胞观察其转基因能力。结果　IR图谱证实两嵌段共聚物的形成 ,GPC和1H NMR测定PEG PBLG分子量约 80 0 0 ,PEG PBLG纳米微球直径约 70nm ,对质粒DNA有较好的保护作用并有较强转基因能力。结论　成功制备两亲嵌段共聚物PEG PBLG纳米微球并证实其载基因能力 ,为进一步开展纳米微球介导基因治疗奠定了基础     

环丙沙星治疗下呼吸道感染100例临床分析

目的 观察环丙沙星治疗下呼吸道感染的疗效。方法 100例患者(男性52例,女性48例,年龄(45±8)a用药剂量为500mg,每12h口服1次,疗程一般为7～21d.结果：临床总有效率为92.0%,细菌清除率为87.2%,对革兰氏阳性及阴性菌均有效,敏感菌百分率达88.5%,特别对铜绿假单胞菌感染也有较好的疗效。结论 环丙沙星治疗下呼吸道感染疗效满意,副作用少,是安全、方便、可靠的有效药物。     

聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因对Tca8113细胞的杀伤作用

目的:观察聚乙二醇-聚谷氨酸(PEG-PBLG)纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK对舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用,为口腔鳞癌的治疗探索新的途径和方法。方法:以PEG-PBLG纳米微球为载体介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3.1( )-CDglyTK转染Tca8113细胞,通过RT-PCR检测CDglyTK的mRNA表达,MTT法描绘细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡并评价其疗效。统计分析采用SPSS10.0统计软件包完成,两样本均数的比较采用t检验。结果:PEG-PBLG纳米微球可介导质粒pcDNA3.1( )-CDglyTK转染Tca8113细胞,RT-PCR可检测到转染细胞中CDglyTK的mRNA表达。转染后,细胞在滴加5-FC和GCV后生长受到明显抑制,5-FC和GCV联合使用对Tca8113细胞的生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组,凋亡指数显著高于对照组(P<0.01),同时也高于单独使用5-FC或GCV组(P<0.05)。结论:PEG-PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK,可有效杀伤舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的基因治疗提供了新的途径。     

脉冲Nd:YAG激光促进氟保护漆治疗牙齿敏感症临床观察

目的　观察脉冲Nd :YAG激光促进氟保护漆治疗牙齿敏感症的临床疗效。方法　用计算机程序控制脉冲Nd :YAG激光照射经涂一层氟保护漆的牙齿敏感症患牙 ,并分别与单纯涂一层氟保护漆或单纯脉冲Nd :YAG激光照射的疗效相比较。结果　涂氟保护漆加脉冲Nd :YAG激光照射治疗牙齿敏感症优于单纯涂保护漆或单纯脉冲Nd :YAG激光照射 ,疗效有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　涂氟保护漆和脉冲Nd :YAG激光照射的联合应用是一种治疗牙齿敏感症较为有效的手段     

腮腺腺淋巴瘤中5种免疫组化标志物的定位研究

目的：检测腺淋巴瘤和腮腺正常组织中癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、抗糜蛋白酶(α_1- antichymotrypsin,α_1-ACT)、抗胰蛋白酶(α_1-antitrypsin,α_1-AT)、乳铁蛋白(lactoferrin,LF)、转铁蛋白(transferrin,TF)的表达及定位,对腺淋巴瘤上皮的组织发生学进行探讨。方法：应用免疫组织化学技术(SABC法)检测36例腺淋巴瘤和正常腮腺CEA、α_1-ACT、α_1-AT、LF和TF的表达,进行阳性着色评价和定位分析。统计分析采用SPSS10．0统计软件包进行数据处理。结果：正常腮腺中腺泡细胞和闰管细胞对CEA、α_1-ACT、LF和TF呈阳性反应；纹管细胞中CEA、LF和TF阳性表达,未见α_1-ACT和α_1-AT着色；排泄管腔细胞对LF及CEA着色,排泄管基底细胞仅对CEA阳性；肌上皮细胞仅对TF阳性。腺淋巴瘤上皮成分中,TF主要分布于基底细胞,CEA、α_1-ACT、LF和α_1-AT主要分布于腔细胞。结论：腺淋巴瘤上皮成分中2层细胞形态结构与免疫表达不同,功能分化有差异；腺淋巴瘤上皮成分和腮腺腺泡细胞、闰管细胞有相似的免疫特征,提示两者间可能存在组织发生学联系。     

胃食管反流相关性哮喘25例临床分析

1995年4月～1998年4月我院收治胃食管反流(GER)相关性哮喘25例,现报告如下. 临床资料 一、一般资料 25例患者中,男15例,女10例.年龄20～65岁,平均52.5岁.病程5个月～16年,平均6.5年.均符合1997年全国哮喘会议修正的支气管哮喘诊断标准并具有GER的典型症状:胸骨后及剑突下疼痛、胸骨后烧灼感、嗳气、反酸和吞咽痛等.GER先于哮喘者12例,哮喘发作期内GER症状加重,哮喘先于GER者10例,3例不详.应用支气管扩张剂及激素治疗5个月～16年,平均32个月.     

骨形态发生蛋白受体2在维甲酸诱导腭裂小鼠胚胎腭突中的表达

目的 探讨全反式维甲酸（atRA）对小鼠胚胎腭突中骨形态发生蛋白受体 2（BMPR2）表达的影响。方法 通过 atRA灌胃的方法建立 atRA诱导的小鼠腭裂模型,取妊娠 15 d（GD15）和 17 d的（ GD17）的胚胎腭部进行苏木精-伊红染色,并用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应技术检测 BMPR2在胚胎腭部的表达。结果 atRA诱导小鼠形成体积较小的畸形腭突和明显的中缝腭裂畸形。 BMPR2在GD15和GD17正常胚胎腭部有高水平的阳性表达,但在腭裂胚胎腭部的表达水平明显减弱。正常胚胎腭部 Bmpr2 mRNA在GD15和GD17的表达水平均明显高于腭裂胚胎（ P<0.05）。结论 atRA可导致小鼠胚胎腭突发育不良形成腭裂,并显著下调 BMPR2表达水平,从而影响腭部发育的正常分子调控过程。