从自由基角度初探蝎毒及蝎毒多肽对大鼠心肌缺血的作用

目的初步探讨蝎毒(SV)及其主要成分蝎毒多肽(PSV)是否有预防大鼠心肌缺血作用以及是否对自由基造成一定作用。方法采用垂体后叶素构建心肌缺血大鼠模型,用琥珀酸脱氢酶(SDH)染色法制作心肌组织切片进行形态学观察。分光光度法检测血清及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果SV组、PSV组在同等条件诱导心肌缺血情况下,其心肌细胞结构得到较好保护。自由基含量在缺血血清及缺血组织中均升高,SV和PSV能降低自由基含量,其中SOD在PSV组的缺血心肌局部甚至高于正常组。结论SV及PSV可能有保护缺血心肌的作用。     

医学机能实验教学改革探索

目的 探索适合当前医学机能实验教学的新模式.方法 广州医学院依托学科优势,整合传统实验技术和现代生命科学新技术,探索医学机能实验教学体系和内容的改革,合理开发应用机能实验中心和临床技能实验中心的优质实验教学资源,将机能实验与临床实验进行结合.结果 经过十余年的探索与改革,完善了学科融合,充实了医学机能实验教学体系和内容,拓展实验教学空间,提高实验教师教学水平,架起了基础通向临床的桥梁,激发了学生的学习兴趣.结论 改革后的医学机能实验教学模式对提高医学生的实验技能、综合素质及创新能力具有积极作用,为高校实验室建设提供可参考的实例.     

蛇毒组分对K562阿霉素敏感株和耐药株的抑制作用

目的：通过对中华眼镜蛇毒进行分离和各组分的初筛,寻找逆转K562对阿霉素耐药的活性成分KD-Ⅲ-1．为今后研究肿瘤耐药性奠定工作基础。方法：通过凝胶分离得到的蛇毒组分分别作用于K562对阿霉素耐药株K562／A和敏感株K562／S,筛选有效活性组分;通过荧光探针Rhl23测定P-gP蛋白活性和PI染色进一步确定该组分的逆转K562／A的耐药活性。结果：分别给予2μg／mL阿霉素（Adr）和各浓度蛇毒组分处理24h后,可以发现蛇毒组分对阿霉素敏感株K562／S和耐药株K562／A都有明显的抑制作用,并呈现出剂量-效应关系。1μg／mL蛇毒组分处理组与2μg/mL蛇毒处理组抑制作用明显;在药物持续作用48h后对K562／A的活性仍有抑制作用在0．5、1、2μg／mL的蛇毒组分组表现的更加明显。通过Rho外排实验发现蛇毒粗毒组平均荧光强度（MFI）与阴性对照组没有明显差异,而2．5μg／mL蛇毒组分组的MFI明显降低,与对照组相比具有统计学意义（P〈0．05）。2．5μg／mL蛇毒粗毒和分离组分分别对K562／S敏感株和K562／A耐药株作用3h后。K562／S的PI染色阳性率明显升高,而K562／A的PI染色阳性率并没有明显升高。结论：蛇毒组分KD-Ⅲ-1对K562／A和K562／S细胞均有明显抑制的作用,抑制作用可能与诱导凋亡有关。     

蛇毒多肽和蝎毒多肽对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用和Caspase-3表达的影响

目的:检测蛇毒多肽(卡迪,KD)和蝎毒多肽(polypeptide from Buthus martensii venom,PBMV)对肝癌移植瘤(H22)带瘤小鼠瘤重的抑制作用,并观察肿瘤细胞Caspase-3表达,初步探讨其作用机理.方法:昆明种系近交小白鼠,60只,复制肝癌移植瘤模型,随机分为6组:阴性对照组(生理盐水),阳性对照组(环磷酰胺0.010 mg/mL),KD 0.016、0.010 mg/mL组和PBMV 0.016、0.010 mg/mL组,分别注射KD、PBMV和阳性药物10 d后,分析统计带瘤小鼠的体重变化、脾指数和肿瘤生长抑制率;并采用免疫组织化学方法,观察治疗后Caspase-3表达的改变.结果:KD 0.016、0.010 mg/mL组和PBMV 0.016、0.010 mg/mL组的平均瘤重显著地减小,均具有明显的肿瘤生长抑制率,与阴性对照组相比有显著差异(P＜0.05),而与阳性对照组相比没有显著差别(P＞0.05).免疫组化显示:阴性对照组胞浆无着色或着色很浅;阳性对照组胞浆浅红棕色,着色胞浆分布较集中;两组待测组胞浆均显红棕色,分布面积广,而且随着用药浓度的增加而增多.结论:KD和PBMV对H22生长和增殖具有抑制作用,其抑制作用的机制可能是通过增强Caspase-3蛋白的表达而促使肿瘤细胞的凋亡.     

中药诱导大鼠骨髓间质干细胞分化的实验

背景体外定向诱导分化可使骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)转化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨、肌肉细胞、神经元样细胞等,而中药是否能对大鼠骨髓间质干细胞有诱导分化作用呢?目的研究SD大鼠MSCs体外扩增培养及用中药定向诱导分化为神经元样细胞的功效.设计以细胞为研究对象,重复观察测量,探索性研究.单位一所医学院病理生理学教研室.材料实验用骨髓取自经检验健康的SD雄性大鼠.方法通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养,流式细胞仪检测其表面抗原表达,多种中药成分定向诱导MSCs分化为神经元样细胞.光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志.主要观察指标①MSCs分离和扩增结果.②MSCs表面抗原及神经元样细胞鉴定结果.结果大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增.流式细胞仪检测结果显示CD14,D11α,D34,D38,D45,D80,D86为阴性,D29,D44,D90,D105,D166呈阳性.黄芪、天麻、人参、当归、脑新舒、人参蜂王浆等多种中药诱导1～3 h后大部分MSCs转变为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色神经元特异性烯醇酶、巢蛋白呈阳性,胶质纤维酸性蛋白阴性.结论SD大鼠骨髓间质干细胞是具多向分化潜能的细胞,具有较强的增殖、自我更新能力.在适宜的诱导条件下,可以分化为神经元样细胞.     

蝎毒及蝎毒多肽对小鼠免疫功能和外周血细胞计数的作用

目的　观察蝎毒 (SV)及蝎毒多肽 (PSV)对正常小鼠免疫功能和外周血细胞计数的作用 .方法　取正常小鼠 4 5只 ,随机分为 3组 :SV组、PSV组、对照组 ,分别腹腔注射 ,1次 /d ,连续 5d .于首次给药 6h、2 4h、8d后 ,每组取小鼠 5只 ,称体重 ,眼球取血 ,计数外周血细胞、处死后脾脏、胸腺 ,计算脾重指数、胸腺指数 .8d取外周血后测试体能 .结果　SV组 6h、2 4h、8d白细胞计数增加 (p <0 .0 5 ) ;PSV组略高于对照组 .SV组 6h中性粒比例明显增多 ,2 4h淋巴细胞比例明显增加 (p<0 .0 5 ) ,8d二者比例恢复正常 ;PSV组 6h、2 4h中性粒略有增加 ,8d恢复正常 .两组单核细胞均有增高 .血小板计数SV组维持正常 ,PSV组升高 .SV、PSV组脾重指数、胸腺指数和红细胞计数与对照组相比均不减少或略有增加 (p >0 .0 5 ) ,两组体能增强明显 .结论　SV及PSV均可提高正常小鼠的免疫功能 ,维持或增加外周血各类细胞数目 ,改善机体整体功能状态     

骨髓间质干细胞定向分化的实验研究

为了探讨体外定向诱导人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞的机制,本研究将分离的人MSC进行体外扩增培养,并观察脑心舒定向诱导MSC分化为类神经元样细胞的效应。在光镜下观察细胞形态,用免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志。结果显示人MSC可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。脑心舒诱导120min后大部分MSC转变为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE、nestin呈阳性和GFAP阴性。上述结果提示人骨髓间质干细胞可在体外诱导分化为神经元样细胞。     

大鼠骨髓间质干细胞用中药绞股蓝诱导为神经细胞的研究

目的　体外诱导大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)分化为神经细胞。方法　用SD大鼠股骨骨髓细胞体外培养。用绞股蓝总甙加入无血清L DMEM诱导MSC分化为神经细胞。免疫细胞化学鉴定有神经元烯醇化酶 (NSE)、神经干细胞标志物巢蛋白 (nestin)和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果　大鼠骨髓间质干细胞在体外扩增 5～ 2 2代 ,对照组不加任何诱导剂 ,MSC可分化为神经样细胞 (5 3 1%± 4 3% )。加入绞股蓝诱导剂诱导 1～ 5h ,MSC形态转变为典型的神经样细胞(90 0 %± 4 6 % )。免疫细胞化学染色显示诱导出的神经样细胞 ,NSE、nestin、GFAP表达阳性。继续培养 12～ 19d ,5d后对照组所有细胞逐渐死亡。绞股蓝组持续诱导 12～ 19d后神经样细胞形态完好 ,大部分细胞变为圆形并聚集成团 ,NSE、nestin、GFAP表达阳性。如果换回正常培养液 ,神经样细胞可逆转回MSC并传代。结论　骨髓本身可能存在神经干细胞。大鼠骨髓间质干细胞用中成药绞股蓝诱导可分化为多种形态的神经样细胞。     

蝎毒和蝎毒多肽对家兔血小板聚集的影响

目的检测蝎毒(SV)和蝎毒多肽(PSV)对家兔凝血系统的影响.方法麻醉家兔,颈动脉取血制备富含血小板血浆(PRP),分别加入SV和PSV,测定二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集作用.结果较低浓度的SV即可使血小板聚集曲线明显下降;PSV对血小板聚集影响不大,即使用较高的浓度,血小板聚集曲线亦仅轻微下降.结论 SV对血小板聚集起抑制作用(抗凝血作用);PSV对凝血系统的影响远远小于蝎毒.     

蝎毒和蛇毒对小鼠骨髓细胞增殖的作用研究

目的　对比观察蝎毒、蛇毒对小鼠骨髓细胞增殖的影响 .方法　健康昆明种小鼠 70只 ,随机分为 5组 :①空白对照组 ;②蝎毒低剂量组 ;③蝎毒高剂量组 ;④蛇毒低剂量组 ;⑤蛇毒高剂量组 .小鼠腹腔注射 ,每天 1次 ,连续给药 5d .每组分别在 2 4h、8d、15d取 4只小鼠股骨骨髓进行骨髓象检查分析及骨髓有核细胞计数 .结果　高剂量蛇毒后 ,骨髓有核细胞数明显增多 (p <0 .0 1) ,蝎毒高剂量组比蛇毒高剂量组增多更显著 (p <0 .0 1) ;两低剂量组有核细胞数明显增多 (p <0 .0 5 ) .注射蝎毒和蛇毒后均可使小鼠骨髓有核细胞中单个核细胞比例先增高后下降 ,而分叶核细胞比例随之升高 ,但蝎毒的作用更明显 .结论　蝎毒、蛇毒均具有促进骨髓细胞增殖、分化和成熟的作用 ,蝎毒的促进作用更明显