参附注射液对心肺复苏后大鼠心肌细胞保护作用的研究

目的探讨参附注射液对心肺复苏后大鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax、NF-κB等蛋白表达的影响,为防治心肌细胞的凋亡提供理论依据.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参附治疗组,采用窒息合并冰氯化钾致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型,运用免疫组织细胞化学方法观察复苏后不同时间点心肌细胞bcl-2、bax基因的蛋白表达,采用末端标记技术(TUNEL)检测各组心肌细胞的凋亡情况;并在电镜下观察各组心肌细胞超微结构.结果复苏后3 h CK-MB开始升高,复苏后24h明显升高达顶峰,各时相点参附治疗组与模型对照组比较CK-MB显著降低(P＜0.05).复苏后各时相点参附治疗组bcl-2表达明显增强(P＜0.01),而bax表达无明显差异(P＞0.05),参附治疗组NF-κB的表达明显降低(P＜0.05).bcl-2阳性表达率在复苏后24 h达到高峰,参附治疗组阳性表达率明显高于模型组(P＜0.01).各时相点参附治疗组bax表达与复苏模型组比较无显著差异(P＜0.05).在心肺复苏后的不同时段心肌细胞均有凋亡发生.参附治疗组各时相点凋亡细胞阳性指数均明显低于复苏模型组(P＜0.05);而假手术组无明显凋亡现象发生(P＞0.01).超微结构显示参附治疗组心肌损伤较模型组明显减轻,假手术组心肌超微结构正常.结论细胞凋亡参与了心肺复苏后大鼠心肌细胞的损伤,参附注射液可降低NF-κB活性,上调bcl-2蛋白表达,改善心肌细胞的超微结构,抑制细胞凋亡的发生,对心肌细胞具有明显的保护作用.     

结核分支杆菌ESAT6-MPT64融合蛋白的构建及应用性初步研究

目的:构建表达结核分支杆菌ESAT6和MPT64融合蛋白,并评价其在血清学诊断中的价值。方法:PCR法扩增esat6和mpt64基因,构建原核表达载体pProEX HTb-EM,表达、纯化ESAT6-MPT64融合蛋白,Western-blot分析其抗原性。用该重组蛋白ELISA法检测结核病患者血清。结果:原核表达的ESAT6-MPT64融合蛋白约40 000,Western-blot证实重组蛋白与ESAT6和MPT64多克隆抗体特异结合。重组蛋白用于检测结核病患者血清,敏感性为67.7%,特异性为82%。结论:重组的ESAT6-MPT64融合蛋白有可能用于结核病免疫诊断试剂的制备。     

结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌免疫学特性

目的:研究结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫学特性.方法:用分泌表达MPT64的重组母牛分枝杆菌疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类.分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应.毒株攻击后对脾脏细菌负荷计数.结果:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖明显,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显,对MTB H37Rv攻击后有一定的保护作用.结论:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗候选.     

萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮（XX0335）抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法 实验分为4组：对照组（含0.1% DMSO的培养液）、另外3组为不同浓度（6.25、12.5、25 μg/mL）的XX0335（该化合物需DMSO溶解,但工作浓度中DMSO的终浓度均低于0.1%）。通过CCK-8和EdU实验分别测定各组对A549细胞活力及增殖的影响,通过流式细胞术测定上述浓度的XX0335对A549细胞凋亡及周期的影响;通过免疫印迹实验测定不同浓度的XX0335对增殖相关蛋白Akt、mTOR、Akt/mTOR磷酸化水平、凋亡相关蛋白cleaved PARP及细胞周期相关蛋白CyclinD1表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验探究XX0335对A549增殖的影响,动物实验使用4周龄小鼠共10只,随机均分为2组。将2×106A549细胞植入小鼠左侧腋下,待26 d后瘤体长径长至1 cm时,对照组小鼠注射无菌生理盐水（200 μL）,对实验组注射化合物XX0335（12.5 μg/mL,200 μL）,隔天注射1次,共5次之后取肿瘤观察每组瘤体大小。结果 CCK-8实验表明,A549细胞活力在XX0335的作用下比对照组呈剂量依赖性下降（P<0.01）。EdU实验发现XX0335能显著抑制A549细胞增殖（P<0.001）。流式细胞术检测结果表明,细胞凋亡较对照组呈剂量依赖性上升（P<0.01）,且细胞停滞于G1期。与对照组相比,AKT、mTOR的磷酸化受到了明显抑制,cleaved PARP表达量升高,且CyclinD1的蛋白表达量下降。裸鼠荷瘤实验结果显示注射XX0335后肿瘤体积明显减小（P<0.01）。结论 XX0335抑制了肺癌A549细胞增殖并诱导细胞发生了凋亡,且细胞周期阻滞于G1期,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。     

急性肺栓塞症35例临床观察

肺栓塞(PE)是指肺动脉因各种栓子阻塞引起肺循环障碍的临床和病理生理综合征。常发病急骤，也可表现为慢性进行性损伤，其发病率至今不清，死亡率高。笔者回顾性统计了近年来本院收治的35例肺栓塞病例，综合其病因、诊断及治疗等方面的资料，进行分析，加以总结。     

结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

目的研究结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法用表达MPT64的真核表达质粒pcDNA-M免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、流式细胞仪计CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。结果MPT64基因免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖显著,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+细胞和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显。结论MPT64 DNA疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗的组分。     

补肾活血方通过调控circ0036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响

目的探究补肾活血方可能通过调控circ₀036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常及椎间盘退变(IDD)髓核细胞中circ₀036763、miR-583表达水平;将IDD髓核细胞分为pcDNA组、pcDNA circ₀036763组、pcDNA circ₀036763+mimic NC组、pcDNA circ₀036763+miR-583 mimic组, 采用qRT-PCR检测各组髓核细胞circ₀036763、miR-583表达水平, MTT检测细胞增殖(A值), 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测髓核细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、collagen Ⅰ、collagen Ⅱ蛋白表达, 双荧光素酶报告实验验证circ₀036763与miR-583靶向关系。将27只小鼠分为假手术组、IDD组、补肾活血方组, 除假手术组外均建立IDD模型。建模成功后...     

喉罩替代气管插管在心肺复苏中的临床应用

目的探讨心肺复苏(CPR)时盲插喉罩通气对复苏成功率的影响。方法将我科2003-06~2007-05所接诊的心跳骤停患者51例作为观察组,应用盲插喉罩通气;另选同期所接诊的心跳骤停患者46例作为对照组,应用气管内插管通气。结果插管所需时间:观察组(28.1±12.6)s;对照组(130±56)s,两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。一次插管成功率:观察组盲探下插入喉罩一次成功47例(成功率92%);对照组气管内插管一次成功19例(成功率41.3%),两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。复苏成功率:观察组复苏成功25例(成功率49%);对照组复苏成功12例(成功率26%),两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论在CPR时,盲插喉罩通气具有操作简便、迅速、复苏成功率高的优点,可以代替气管内插管。