电转化技术在噬菌体抗体库构建中的应用

目的 :探讨电转化技术在构建噬菌体抗体库中的应用价值。方法 :用国产电转化仪将重组噬菌粒p3 -V2转化入E.COLIXL1-Blue中。结果 :应用电转化技术构建噬菌体抗体库库容为 :3.9×107单个scFv重组子 ,其转化效率为 :107～108 转化子/μg ,本实验最佳条件为场强 (7.5kv/cm) ,电容 (21.0μF) ,细菌浓度 (XL1 -Blue :4.0×1010/ml) ,外源DNA量 (p3 -V2:0.6μg)。结论 :经优化电转化条件 ,所得库容符合建库要求     

含三聚氰胺奶粉致婴幼儿泌尿系统损伤282例的临床分析

目的:鉴于三聚氰胺奶粉事件引起的广泛关注,分析三聚氰胺奶粉致婴幼儿泌尿系统损伤的情况.方法:对因服用含三聚氰胺奶粉的2 032例就诊婴幼儿进行尿常规、尿沉渣和肾B超检查.结果:2 032例中存在泌尿系统损伤282例,阳性检出率为13.9%.其中血尿140例(占6.9%);B超下单侧或双侧肾脏有结晶的60例(占2.9%);肾盂积水或输尿管扩张的35例(占1.7%);血尿伴单侧或双侧肾脏结晶的23例(占1.1%);血尿伴肾盂积水或输尿管扩张的14例(占0.7%);单侧或双侧肾脏结晶伴积水的10例(占0.5%).结论:长时间服用含三聚氰胺的奶粉可导致镜下血尿、肾盂积水或输尿管扩张,甚至引起肾功能异常.     

针灸治疗老年性失眠临床取穴特点

目的:探讨针灸治疗老年性失眠取穴特点;方法:通过成都中医药大学图书馆对中国知网(CNKI)中文数据库中近15年针灸治疗老年性失眠的临床文献进行收集整理,具有治疗效果的针灸处方,利用Excele表通过频率、频次对其进行用取穴特点、证型取穴及手法补泻分析。结果:1本研究统计34篇针灸治疗老年性失眠的临床文献,共62个处方、67个穴位、465频次,其中神门、三阴交、内关、安眠、百会、四神聪使用频率较高;2对13篇文献中常见不同证型腧穴统计,其中背腧穴、原穴等特定穴位使用频率较高;3对17篇常见临床证型的补泻手法的文献统计,52个处方中20个处方未见明确补泻手法,同时36个处方为心脾两虚证、心肾不交证、肝火旺盛证处方。结论:1针刺治疗老年性失眠多采用安神的穴位;2临床中老年人多脏腑功能减退,但老年性失眠虚实均有,以虚证为多;结合老年体质特点,辩证取穴中对背俞穴、原穴的应用较多。     

大学公共选修课课堂教学和管理方法探讨

大学公共选修课（公选课）是高等教育课程体系的重要组成部分,是推动素质教育的重要途径…。高校开设公选课的目的是拓宽学生的知识面,完善学生知识结构,加强学生综合素质的培养。关于公选课的教学改革国内文献报道较多,但大多是从宏观的角度阐述大学公选课的现状和改革对策,方法较为笼统,具体实施起来有一定的难度,可借鉴的地方不是太多。笔者将从多年开设公选课的教学经验出发,分析大学公选课目前存在的问题,探讨高校公选课的课堂教学和管理方法,提出切实可行的改革措施。     

中西医结合治疗小儿口腔疱疹42例报告

自1996年11月至1997年10月我们运用中西医结合方法治疗小儿口腔疱疹42例,取得较好疗效,兹报道如下。 临床资料 一、一般资料 42例中男性24例、女性18例;年龄2～7岁,平均4.5岁。病程1～7天,平均4天。均为本科门诊患儿,对口腔内疱疹合并化脓性感染者、不能配合治疗及中途改用他药者不列为入选观察对象。     

临床实习医学生吸烟行为的调查及干预

控制吸烟以消除其对人体健康的危害 ,已成为人们的共识。医务人员者是禁烟的主力军。作为即将成为医生的医学实习生更应远离烟草 ,但进入实习后 ,由于种种原因导致吸烟率和吸烟量显著增高[1]。有鉴于此 ,笔者于2000年6月～2001年6月对某医学院部分男生的吸烟状况作了系统调查 ,在此基础上进行了干预研究。1对象与方法1 1对象 :某医学院2000年6月即将进入临床实习的医学、检验、口腔三个专业的190名男生。1 2方法 :自行设计“学生吸烟行为调查表” ,吸烟行为确定为每周吸烟1支及1支以上。分别在2000年6月实习前和2001年6月实习后进行2次不记…     

开封地区儿童性早熟危险因素的调查

目的：调查开封地区性早熟儿童危险因素，为高危人群提出预防措施提供依据。方法：对2000年4月～2002年6月期间被诊断为性早熟的患儿96例进行1：1配对病例对照研究。结果：在单因素分析中，达到显著性水准的危险因素有：常服用营养保健品、常食用动物性食品、母亲的初潮年龄、常使用护肤品及长时间看电视。条件logistic多元回归分析显示，有统计学意义的性早熟的危险因素是：常服用营养保健品，常食用动物性食品，常使用护肤品。结论：开封地区性早熟儿童危险因素是常服用营养保健品，常食用动物性食品，常使用护肤品。     

原发性胆汁性肝硬化和自身免疫性肝炎重叠综合征患者的临床特征分析

目的 分析原发性胆汁性肝硬化（PBC）和自身免疫性肝炎（AIH）重叠综合征（PBC／AIH重叠综合征）患者的临床表现和肝组织病理学的特点。方法 对124例自身免疫性肝病患者的临床资料进行分析，根据国际自身免疫性肝炎小组修订的诊断标准，筛选出19例PBC／AIH重叠综合征患者，分析比较PBC／AIH重叠综合征和单纯PBC、AIH患者的临床表现、肝组织病理学变化。结果 124例自身免疫性肝病患者中19例PBC／AIH重叠综合征，单纯PBC55例、AIH49例，原发性硬化性胆管炎（PSC）1例，分别占15．32％、44．35％、39．52％和0．81％。PBC／AIH重叠综合征实验室检查具有AIH的特点，如血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、免疫球蛋白G的明显升高，同时具有PBC的特点，如转肽酶、碱性磷酸酶、免疫球蛋白M的显著增高；自身抗体检测可见抗核抗体、抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体、M2抗体阳性；肝组织病理结果显示，兼有PBC和AIH的特点，如界面炎和碎屑样坏死，汇管区浆细胞浸润，胆管不同程度病变。结论 PBC／AIH重叠综合征并非罕见，它的临床表现、肝组织病理学具有PBC和AIH的双重特征，应对此病充分认识，探索有效的治疗方案。     

SOE法构建甲状腺自身免疫ScFv基因

目的甲状腺自身免疫疾病(AITD)的患者血中有多种抗甲状腺自身抗体.为了构建单链抗体(ScFv)库以获得抗甲状腺ScFv,首先需要构建ScFv基因,我们利用重叠延伸拚接(SOE)法,制备了人源ScFv基因,为建立ScFv库和进一步研究AITD的发病机制及分析甲状腺自身抗体的作用打下基础.方法分离Graves病人血中的单个核细胞.提取总RNA,逆转录合成cDNA.参照文献报道设计引物,重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的引物均采用兼并序列引物,VH5′引物和VL3′引物带有27个互补碱基的接头(linker)编码序列.VL3′引物插入Spel内切酶位点,VH5′引物插入Sacl内切酶位点.先分别通过PCR扩增VH和VL,将纯化的VH和VL扩增产物按照一定比例混合,利用VH和VL互补序列,做15次PCR循环,合成出完整的ScFv基因,再以VH3′和VL5′引物进行PCR获得更多的ScFv基因产物,将ScFv基因重组到p3SCMH噬菌粒中,并做酶切鉴定.结果用PCR扩增VH和VL基因,PCR产物做电泳鉴定,经1.5%琼脂糖凝胶电泳,在380bp和420 bp左右有特异扩增带.将VH和VL的PCR产物用低溶点胶电泳纯化,并分别做DNA定量,将VH和VL的量调整为不同的比例做SOE,制备ScFv基因.PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳显示在800 bp左右有特异扩增带.纯化后的PCR产物,用Sacl+Spel双酶消化后,重组到噬菌粒中,转入XL1-blue大肠杆菌中扩增,再以提纯的重组噬菌粒做模板以VH3′引物和VL5′引物做PCR扩增,同时对重组噬菌粒做双酶切鉴定.琼脂糖凝胶电泳显示,两种鉴定方法均在800bp处有特异条带,证明ScFv连接成功.结论构建未知亲本抗体的ScFv常采用两种方法,一种是将Linker设计在表达载体上,两端各有限制性内切酶位点供VH和VL插入;另一种方法即本文使用的SOE法.前者操作繁杂,而SOE法虽然操作相对简单但不容易成功,它要求VH和VL的量要有严格的比例.由于纯化的VH和VL做准确定量有困难,我们的体会是做SOE时将VH和VL的量以不同的比例混合,以增加成功率.一般认为Linker长度以14～25个氨基酸残基为宜.本文采用的15肽序列(Gly4Ser)3是目前使用最广泛的Linker.本实验制备的ScFv基因已经成功的构建了噬菌体抗体库,并筛选出TRAb噬菌体抗体.     

药物性急性肝衰竭动物模型的建立

目的建立用于人工肝实验研究的急性肝衰竭大动物模型。方法应用中国实验小型猪13头随机分为3组,低剂量组(n=3)给予1.0g/kg的D-氨基半乳糖;中剂量组(n=6)给予1.2g/kg的药物;大剂量组(n=4)给药剂量为1.5g/kg。观察比较每组动物的一般状况、生存时间、生理生化指标、颅内压、组织病理等方面的变化,从中得出建立急性肝衰竭动物模型的较稳定方法。结果低剂量组动物在给药后均出现一过性的肝功能损害,未出现肝昏迷表现,在给药后3～4d肝功能开始恢复,约1周后指标基本恢复正常,所有动物均存活;高剂量组的动物肝损害出现时间早,损伤剧烈,存活时间短(24.8±5.3h),均死于严重的肝衰竭。中等剂量组的动物在给药后12h各项指标开始变化明显,在给药48h时损伤达高峰,存活时间为67.9±9.4h,最终死于严重的肝衰竭。结论应用药物方法能建立急性肝衰竭动物模型,其中D-氨基半乳糖1.2g/kg的给药剂量建立的模型稳定性好,且能较好模拟临床急性肝衰竭发生、发展的病理、生理过程,可作为人工肝治疗的实验平台。