热毒宁注射液化学成分研究(Ⅲ)

目的研究热毒宁注射液抗病毒活性部位的化学成分。方法采用流感病毒致应激负荷小鼠模型进行抗病毒活性部位的筛选,综合应用硅胶、ODS、Sephadex LH-20和Toyopearl HW-40柱色谱以及反相MPLC、HPLC等现代色谱技术对抗病毒活性部位进行分离和纯化,根据化合物的光谱数据和理化性质鉴定化合物结构。通过采用检测海肾荧光素酶(Rluc)报告基因的表达水平来反映病毒感染水平的方法,对分离得到的化合物进行了体外抗登革热病毒的活性测试。结果热毒宁注射液经HP-20大孔吸附树脂,95%乙醇洗脱部位为抗病毒活性部位,从中分离得到14个化合物,分别鉴定为(2E,6S)-8-[α-Larabinopyranosyl-(1″-6′)-β-D-glucopyranosyloxy]-2,6-dimethylct-2-eno-1,2″-lactone(1)、落叶脂素(2)、5′-甲氧基异落叶松树脂醇(3)、异落叶松脂素(4)、(7R,8R)-4,7,9,9′-tetrahydroxy-3,3′-dimethoxy-8-O-4′-neolignan(5)、(7S,8R)-4,7,9,9′-tetrahydroxy-3,3′-dimethoxy-8-O-4′-neolignan(6)、肥牛木素(7)、5′-甲氧基肥牛木素(8)、(-)-二氢脱氢二松柏醇(9)、(7S,8R)-3,3′,5-trimethoxy-4′,7-epoxy-8,5′-neolignan-4,9,9′-triol(10)、2-顺式-4-反式-脱落酸(11)、2-反式-4-反式-脱落酸(12)、(1S,3R,4R,5S,7R,9R)-decane-6-carboxylic acid(13)、(1S,3R,4S,5S,7R,9R)-decane-6-carboxylic acid(14);其中化合物1对登革热病毒的EC50值为74.76μmol/L,选择指数(SI)值大于1.07,具有体外抗登革热病毒的活性。结论化合物8为新化合物,其他化合物均为首次从中药复方热毒宁注射液中分离得到,化合物1具有体外抗登革热病毒的活性。     

基于制剂原料物理特性的哮喘颗粒干法制粒工艺优选

目的利用粉体的物理性质,优选哮喘颗粒干法制粒工艺。方法通过考察哮喘颗粒制剂原料的休止角、压缩度、水分等物理特性,指导干法制粒处方筛选,以颗粒一次成型率、脆碎度和制粒过程质量评分为指标,采用L9(34)正交试验方法,同时采用基于信息熵的评价方法优选哮喘颗粒干法制粒工艺参数。结果确定最佳辅料为糊精,最佳干法制粒工艺参数:轧轮压力为7 MPa,轧轮转速为10 r/min,送料速度为18 r/min。结论制剂原料的物理特性研究可指导制剂处方的筛选,制得颗粒成型性好,硬度适中,流动性好,优选的干法制粒工艺稳定合理。     

淫羊藿中不同部位及单体化合物对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的通过比较淫羊藿Epimedium brevicormon不同洗脱部位及其单体化合物对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用,筛选淫羊藿活性部位和活性成分。方法淫羊藿提取物经大孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20及制备液相的分离纯化,得到不同洗脱部位和单体化合物。运用Aβ_(25-35)体外诱导的神经细胞损伤模型,采用Hoechst33342和PI双染法,对淫羊藿的不同洗脱部位和成分进行活性筛选。结果与模型组比较,除淫羊藿95%乙醇部位外,所有洗脱部位及其中的单体化合物山柰酚-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-β-D-半乳糖苷]-7-O-α-L-鼠李糖苷、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B均对Aβ_(25-35)所致SH-SY5Y细胞损伤有显著保护作用。结论淫羊藿对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其二氯甲烷-甲醇(5∶1)部位作用最强,其次是30%乙醇部位、50%乙醇部位。     

胆木叶和胆木的相似性研究

建立HPLC定量指纹图谱检测方法,对3批胆木叶和胆木进行测定,比较其异长春花苷内酰胺的含量和指纹图谱的差异,并采用LC-MS对指纹图谱色谱峰进行指认,获得胆木叶和胆木化学成分差异信息。胆木中的异长春花苷内酰胺的含量高于胆木叶;胆木叶和胆木指纹图谱色谱峰有差别,胆木叶的化学成分较胆木丰富;LC-MS检测结果表明胆木叶和胆木中主要化学成分为生物碱,胆木叶和胆木有7种相同的化学成分。胆木叶和胆木的相似性研究为开发胆木叶潜在药用价值和胆木资源的可持续利用提供一定的科学依据。     

不同来源诃子中3种可水解丹宁的定量分析

用ＲＰ－ＨＰＬＣ法对不同来源的１５种诃子样品中３种不可水解丹宁诃子酸（ｃｈｅｂｕｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ,Ｉ）、诃黎勒酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ ａｃｉｄ,Ⅱ）和１,３,６－３－Ｏ－没食子酰基葡萄糖（１,３,６－ｔｒｉ－Ｏ－ｇａｌｌｏｙ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｅ,Ⅲ）进行定量分析。结果表明Ｉ和Ⅱ的含量与诃子的品种、性状有明显的相关性,可作为评价诃子药材质量的指标性成分。     

异长春花苷内酰胺注射给药对心血管系统影响的实验研究

目的：观察异长春花苷内酰胺大剂量注射给药对麻醉Beagle犬心血管系统的影响,并考察其体外对离子通道的抑制作用。方法：采用生理记录仪观察异长春花苷内酰胺静脉注射前后不同时间点Beagle 犬收缩压（Sys）,舒张压（Dia）,平均动脉压（MBP）,心率（HR）,心电图PR 间期、QRS 间期、QT 间期、QTcb 间期、QTcv 间期等指标的变化;应用全细胞膜片钳技术考察不同浓度异长春花苷内酰胺对CHOhERG细胞上hERG 钾离子通道和HEK-293-Nav1.5 细胞上Nav1.5 钠离子通道的抑制作用。结果：与空白对照组相比,异长春花苷内酰胺60、18 mg?kg-1 剂量组、溶媒对照组（含吐温-80）于给药后15 min Sys、Dia、MBP、HR 明显降低（P＜0.05）,给药结束后各项指标可见恢复。与溶媒对照组相比,各给药剂量组在各 观测时间点无显著性差异。与空白对照组及自身给药前相比,60、18、6 mg?kg-1 剂量组、溶媒对照组于给药后15 min QT、QTcb、QTcv 间期明显延长（P＜0.05）,给药结束后可见一定程度的恢复。与溶媒对照组相比,各给药剂量组QT、QTcb 和QTcv 间期在各观测时间点无显著性差异。异长春花苷内酰胺对hERG 钾离子通道和Nav1.5 离子通道抑制作用较弱,IC50 为560.8μmol?L-1 及>900μ mol?L-1,远远大于阳性对照药。结论：异长春花苷内酰胺大剂量单次静脉注射对Beagle 犬可能有一定的降低血压、减慢心率及延长QT 间期的作用,停药后可恢复。其中血压降低、心率减慢与溶媒中所含吐温-80 有关。体外对hERG 钾离子通道和Nav1.5 离子通道无明显影响,提示异长春花苷内酰胺对动物QT 间期的影响可能为其它作用机制所致。     

芪桂痛风片对痛风性关节炎动物模型的镇痛研究

目的 观察芪桂痛风片对大鼠关节炎模型、小鼠热板和醋酸致小鼠扭体模型的影响。方法 给予芪桂痛风片5 d后,观察芪桂痛风片对尿酸钠致大鼠关节炎模型痛阈改变的影响;采用小鼠热板模型,观察小鼠给予芪桂痛风片后舔足潜伏期的变化;小鼠ip 0.7%醋酸,观察给予芪桂痛风片后对小鼠扭体反应次数和扭体潜伏期的影响。结果 大鼠关节炎模型造模1 h后,芪桂痛风片8.10 g/kg剂量组大鼠痛阈降低值和降低率与模型组比较差异具有显著性（P〈0.01）;造模3、5 h后,芪桂痛风片4.05、8.10 g/kg剂量组大鼠痛阈降低值和降低率较模型组低,且差异均具有显著性（P〈0.05、0.01）。末次给药60、90、120 min后,芪桂痛风片各剂量（11.70、5.85、2.93 g/kg）组小鼠舔足潜伏期均比模型组延长。芪桂痛风片各剂量（11.70、5.85、2.93 g/kg）组小鼠扭体次数和扭体率均低于模型组,小鼠扭体潜伏期高于模型组。结论 芪桂痛风片能够减轻尿酸钠注射引起的大鼠关节痛阈降低,并减轻小鼠热板和醋酸引起的疼痛,提示芪桂痛风片具有抗实验性痛风性关节炎作用。     

胆木及其制剂中异长春花苷内酰胺的分离鉴定和含量测定

目的：寻找可以作为评价胆木药材及其制剂质量的指标成分，提高胆木药材及其制剂的质量标准。方法：采用柱层析方法分离化学成分，应用光谱法进行结构鉴定；用高效液相色谱法测定其在胆木药材和制剂中的含量。结果：从胆木药材及其注射液中分离、鉴定出1个含量较高的吲哚类生物碱苷异长春花苷内酰胺（isovincoside lactone）；建立了胆木药材和注射液中异长春花苷内酰胺的HPLC含量测定方法。结论：该成分在胆木药材和注射液中含量较高，可用于胆木药材及其制剂的质量控制。     

异长春花苷内酰胺经酸催化形成喜果苷的研究(英文)

目的:鉴定异长春花苷内酰胺酸催化产物的结构,并探讨其反应机理。方法:用HPLC监控异长春花苷内酰胺酸催化反应过程,采用大孔吸附树脂纯化反应产物,以MS、NMR和ROESY分析确定产物结构。结果:异长春花苷内酰胺在酸催化条件下转化生成喜果苷,其转化率为52%。结论:异长春花苷内酰胺经酸催化可转化为喜果苷,其反应机理可能与化合物立体构型的稳定性有关,该发现提供了制备喜果苷的新方法。     

热毒宁注射液对大鼠肝微粒体CYP450酶的诱导作用研究

目的：研究热毒宁注射液（RDN）对大鼠肝微粒体CYP450酶的诱导作用。方法：将SD大鼠随机分为空白溶剂组、阳性对照组和热毒宁注射液低、中、高剂量组（1、2、4 mL·kg^-1·d^-1）,分别于连续给药7天后处死,取肝组织称重并制备肝微粒体。计算大鼠肝脏的脏器系数,以BCA法测定微粒体的蛋白含量,以“cocktail”法测定大鼠肝微粒体中5种重要的CYP450酶亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A1/2的活性。结果：与空白溶剂组比较,阳性对照组大鼠的肝脏脏器系数、微粒体得率及各CYP450酶亚型的活性均明显增加（P<0.01）。热毒宁注射液低、中剂量组的脏器系数、微粒体得率和蛋白含量无显著性差异,但高剂量组的脏器系数和微粒体得率有显著性差异（P<0.05）。对酶活性的影响方面,热毒宁注射液能显著诱导大鼠CYP1A2的活性,且呈剂量依赖性;中、高剂量组对CYP2C9和CYP2C19均有一定的诱导作用;对CYP3A1/2和CYP2D6的作用不明显。结论：阳性对照组对大鼠肝微粒体CYP450酶有明显的诱导作用,所建立的实验体系可用于诱导作用的评价;热毒宁注射液对大鼠CYP1A2、CYP2C9和CYP2C19亚型有一定的诱导作用,对CYP3A1/2和CYP2D6无明显作用。