复方地黄对帕金森病大鼠多巴胺能神经元及GDNF表达的影响

目的:研究复方地黄对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法:40只SD雄性大鼠,分为正常组、假手术组、模型组、模型组+复方地黄组(即干预组)。观察PD大鼠药物诱发的旋转行为;免疫组化法观察黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元数目及胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derivedneurotrophic factor,GDNF)表达水平的变化。结果:干预组与模型组间的旋转圈数有明显差异(P0.05);模型组黑质TH阳性神经元数目(52.9±2.2)明显少于正常组(160.3±2.4)、假手术组(161.6±3.4)及干预组(61.5±2.6)(P0.05);在大鼠黑质和纹状体部位,干预组GDNF阳性细胞数量比正常组、假手术组、模型组均明显增加(P0.05)。结论:复方地黄方能明显改善PD大鼠的旋转行为,拮抗6-羟基多巴胺诱导的PD大鼠黑质多巴胺能神经元的丢失,其保护作用可能与促进内源性GDNF分泌增加有关。     

二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响

目的 观察古代经典名方二妙散（EMS）对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎（CIA）中辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）分化的影响。方法 按体质量将20只DBA/1小鼠随机分为正常组、CIA组,EMS（5.4 g·kg^-1）组及甲氨蝶呤（MTX,0.5 mg·kg^-1）组。CIA组、EMS组及MTX组在第1天以等体积牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂免疫DBA/1小鼠,于第21天以等体积牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂于尾根部有别于第1次免疫部位免疫DBA/1小鼠建立CIA模型（此为第2次免疫）,并于第2次免疫当天开始灌胃给药,除MTX为每周3次外,其余每天1次,共给药28 d。第22天开始观察CIA小鼠的关节红肿等症状并进行关节炎评分,第49天取材后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察CIA小鼠关节滑膜炎症的情况;免疫荧光（IF）双标法检测CIA小鼠关节中CD4⁺T细胞中Th17细胞标志物白细胞介素-17（IL-17）和Treg细胞标志物叉头框转录因子P3（FoxP3）在关节滑膜中的表达情况;流式细胞术检测小鼠脾脏及淋巴结中Th17和Treg的细胞比例情况。结果 与正常组比较,CIA组小鼠关节滑膜炎症情况明显,小鼠关节结构严重紊乱,关节软骨及骨破坏明显,骨侵蚀严重（P<0.01）;小鼠关节组织中Th17/Treg值显著升高（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结中Th17的细胞表达比例显著增高（P<0.01）,Treg细胞表达比例显著减少（P<0.01）;与CIA组比较,EMS组和MTX组两组小鼠关节结构均相对正常,骨侵蚀、骨破坏较轻,关节面相对完整光滑;EMS组和MTX组两组中Th17/Treg值显著降低（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结组织中,EMS组、MTX组Th17细胞表达比例显著降低（P<0.01）,Treg细胞的表达比例显著增加（P<0.01）。结论 EMS通过调节Th17/Treg平衡,抑制CIA小鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA。     

扶正消癌Ⅰ号方对GP方案治疗老年非小细胞肺癌减毒增效的临床研究

目的:研究扶正消癌Ⅰ号方对GP方案治疗老年非小细胞肺癌(NSCLC)的减毒增效作用。方法:选择2006年1月—2006年12月住院的老年NSCLC患者35例,按随机设计分为研究组和对照组,分别为20例和15例,研究组给予扶正消癌Ⅰ号方,药用:茯苓10g,白术10g,山药10g,黄芪15g,太子参15g,白花蛇舌草30g,山慈菇15g,蜈蚣2条,每日1剂,连服14天,同时给予GP方案:吉西他滨(GEM)1000mg/m2,第1,8天,卡铂(CBP)AUC 5,第1天,3周为1个周期,至少完成2个周期治疗的病例进入统计学处理,对照组给予GP方案,方法同研究组,观察近期疗效,毒副反应,生存质量(QOL)和总生存时间(OS)。结果:进入统计学处理的病例数研究组与对照组分别为18例和13例,研究组与对照组在近期疗效方面无显著差异(44.44%vs 38.46%,χ2=0.111,P=0.739),研究组毒副反应发生率显著低于对照组(P0.05)、QOL优于对照组(P0.05),在中位生存时间(MST)和OS方面无显著性差异(P0.05)。结论:扶正消癌Ⅰ号方对GP方案治疗老年NSCLC患者能够显著降低毒副反应发生率,提高QOL,具有肯定的减毒增效作用,有一定的临床应用价值。     

鸦胆子乳剂、5-Fu局部注射联合开道散对人胃癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤机制研究

目的研究鸦胆子乳剂、5-Fu局部瘤体注射联合灌服开道散对人胃癌SGC-7901移植瘤的抑制作用及可能机制。方法建立人胃癌SGC-7901裸鼠移植瘤模型后传3代,接种于裸小鼠右前肢腋窝皮下,待肿瘤生长至50-250mm3后随机分6组：对照组A组（0.9%NaCl溶液）,治疗组B（5-FU）组、C组（5-FU及鸦胆子乳）、D组（开道散联合5-FU）、E组（开道散联合5-FU、鸦胆子乳）、F组（开道散）。实验期间,每周测量两次瘤体体积,给药结束,将动物脱颈处死,剥离出肿块称重,比较各组肿瘤重量,计算肿瘤抑制百分率;用免疫组化方法检测荷瘤组织中p53、Ki67表达情况。结果除F组瘤重与对照组比较无统计学意义（P〉0.05）,余各治疗组瘤重均显著低于对照组,但治疗组间C组、D组与B组比较无统计学意义（P〉0.05）,而E组与B组相比有统计学意义（P〈0.05）;除F组外,其余各治疗组均有不同程度下调p53、Ki67表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,但C组、D组与B组比较各免疫组化指标表达无明显差异（P〉0.05）,而E组较B组各免疫组化指标下调明显,有统计学意义（P〈0.05）。结论瘤体内注射鸦胆子乳剂、5-Fu联合灌服开道散有一定的协同增效作用,其机制可能与抑制p53、Ki67表达,抑制肿瘤细胞的生长与增殖有关。     

养阴润目丸对干眼症大鼠结膜上皮细胞IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK的影响

目的:探讨养阴润目丸对干眼症大鼠结膜上皮细胞白介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p-p38MAPK)的影响。方法:将健康雄性SD大鼠60只随机分成正常组、假手术组、养阴润目丸组、新泪然组、模型组,分别用A、B、C、D、E组表示,每组12只。A组不作处理;B组只切开阴囊,不切除睾丸;C、D、E 3组切除睾丸及附睾制备干眼症大鼠模型。造模成功7d后,各组分别给药治疗。采用Western blot方法观察给药3个月后干眼症大鼠结膜上皮细胞IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK的表达。结果:A、B组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、pp38MAPK蛋白含量低,即无阳性表达,而C、D、E组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量较多,呈阳性表达;C、D组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量明显低于E组(P0.01);C、D组两组间差异不显著(P0.05)。结论:养阴润目丸能够下调干眼症大鼠结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量;干眼症的发病机制与炎症及p38MAPK信号通路相关。     

铁皮石斛F-box蛋白基因DoSKP2A的克隆与表达分析

目的克隆珍稀濒危兰科药用铁皮石斛F-box蛋白基因即S期激酶相关蛋白(S phase kinase-associated protein)基因DoSKP2A,并进行生物信息学和表达特征分析。方法采用RACE技术获基因全长;利用生物信息软件预测基因编码蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0和MEGA 7.0分别进行氨基酸多序列比对和进化树构建;借助定量PCR检测基因表达模式。结果克隆到DoSKP2A(GenBank注册号KU160472),c DNA全长1 507 bp,开放阅读框(ORF)长1 101 bp,编码蛋白含366个氨基酸,相对分子质量39 590,等电点7.9。DoSKP2A蛋白不含跨膜域和信号肽,包含F-box核心结构域(26～88)、亮氨酸重复序列LRR(202～226)和多个保守基序;Do SKP2A与植物SKP2As蛋白一致性为64.6%～72.4%,所在分支隶属于SKP2As分子进化的单子叶植物分支,与小兰屿蝴蝶兰SKP2A亲缘关系近;DoSKP2A基因转录本在石斛3种器官中为组成型表达,根中相对表达量较高,为叶中的6.16倍,茎中次之,叶中表达量很低。结论获得一个全新的铁皮石斛F-box蛋白基因DoSKP2A全长、生物信息及其表达特征,为研究其在铁皮石斛生长发育、信号传导和抗逆境胁迫的分子机制提供基础。     

通塞脉片对动脉粥样硬化大鼠CD40及CD40L表达的影响

目的:观察通塞脉片(TSM)对大鼠动脉粥样硬化(AS)的治疗作用并探讨其作用机制。方法:通过饲喂高脂饲料加维生素D3建立大鼠AS模型,给予TSM治疗后,观察血管形态学、白细胞表面分化抗原40(CD40)、白细胞表面分化抗原40配体(CD40 Ligand,CD40L)在血管中表达以及血清中炎症因子C反应蛋白(CRP)变化。结果:TSM可以显著改善AS大鼠动脉形态学的改变,降低其血清中炎性因子CRP的含量:模型组(8.19±2.82)mg/L,辛伐他汀组(5.19±1.89)mg/L,TSM组高剂量(5.17±2.60)mg/L,低剂量(5.24±2.52)mg/L(P<0.05),同时抑制血管中CD40、CD40L的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:TSM通过降低体内的炎症水平而达到治疗AS作用。     

金丹活性部位对MIRI大鼠血清SOD活力、MDA含量的影响

目的：探讨金丹活性部位对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清SOD活力、MDA含量的影响.方法：将金丹活性部位对心肌缺血再灌注损伤大鼠进行干预,通过检测大鼠血清SOD活力、MDA含量的变化,从而探讨金丹活性部位抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制.结果：金丹60％乙醇洗脱组分与水洗脱组分均能明显降低模型大鼠血清MDA的含量,增强SOD的活力（P＜0.05或P＜0.01）.结论：金丹60％乙醇洗脱组分与水洗脱组分均能明显降低模型大鼠血清MDA的含量,增强SOD的活力,说明其作用机制可能与抑制脂质过氧化反应、提高抗氧化能力有关.     

四物汤对血虚证患者血清蛋白质的影响

目的:用蛋白质组学技术考察四物汤对血虚证患者血清蛋白的影响,在分子水平上探讨四物汤治疗血虚证的作用机制。方法:收集正常、血虚证患者和四物汤用药患者的血清,用二向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证患者血清中有影响的蛋白质。结果:蛋白质组学研究发现,血虚证患者血清与正常相比有15个蛋白质的水平发生改变,其中有11个上调和4个下调,四物汤可使这些改变的蛋白质水平有所恢复。胶内酶切提取蛋白进行质谱鉴定,其中血虚证患者血清与正常相比升高的蛋白质有结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,与正常相比降低的蛋白质有转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。血虚证患者服用四物汤后可降低结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,升高转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。结论:四物汤可以通过增强免疫,减轻基因损伤,增加血红蛋白等途径治疗血虚证。     

重组人生长激素联合早期胃肠内营养在有创-无创序贯通气治疗的慢性阻塞性肺疾病并呼吸衰竭病人中的应用

目的：观察重组人生长激素联合早期胃肠内营养支持在有创-无创序贯通气治疗的慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并呼吸衰竭患者中的作用。方法：①慢性阻塞性肺疾病急性发作合并II型呼吸衰竭患者68例入选。患者均知情同意。将患者随机分为2组：重组人生长激素联用全胃肠内营养（EEN＋rhGH）组35例,全胃肠内营养（EEN）组33例。②所有患者入ICU后均经口或经鼻气管插管和放置鼻胃管。均接受有创-无创序贯通气、抗感染、祛痰、平喘、强化血糖控制等治疗,入ICU当日开始鼻饲能全力。治疗组在一般治疗的同时给予重组人生长激素8u/天。③治疗1周时,分别测体重、上臂肌围、血清白蛋白、外周血淋巴细胞计数,总结一周内每日平均血糖水平与胰岛素用量;出ICU时总结住ICU天数、有创机械通气时间。④组内及组间计量资料差异比较分别采用配对t检验和独立样本t检验,计数资料比较进行卡方检验。结果：68例患者均进入结果分析。①营养指标：EEN组治疗后体重、上臂肌围、血清白蛋白、外周血淋巴细胞计数差别无显著性（P〉0.05）。EEN＋rhGH组治疗后体重、上臂肌围、血清白蛋白、外周血淋巴细胞计数均明显高于治疗前（P〈0.05）。治疗后两组间外周血淋巴细胞计数有显著差异。②住ICU天数和有创呼吸机带机时间：EEN＋rhGH组明显短于EEN组（P〈0.05）。③两组胰岛素使用量差异具有显著性,血糖水平组间差异无显著性。结论：短期使用重组人生长激素配合早期胃肠内营养对于接受有创-无创序贯通气的慢性阻塞性肺疾病并II型呼吸衰竭患者,可望提高其体重、营养水平和细胞免疫功能,缩短有创机械通气时间和住ICU时间;短期生长激素的使用在强化血糖控制基础上对血糖影响不大,但会增加胰岛素用量。