氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的安全性评价

目的评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的安全性。方法分别用3批CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)致敏豚鼠,4w后用相同疫苗对致敏豚鼠作皮肤试验。结果CMRV致敏豚鼠与WCV致敏豚鼠的皮试点红肿大小在皮试后1～6d无显著差异,但是从第7d开始,差异显著。皮试后第14d采集接种部位组织做病理切片,WCV致敏豚鼠皮试点的表皮组织有局灶性变性、坏死,并见大量炎性细胞浸润。CMRV致敏豚鼠的皮试点组织基本正常,少数豚鼠偶见局灶性变性,但无坏死现象。3批CMRV致敏豚鼠皮试点组织病变程度相似,均显著轻于WCV致敏豚鼠。结论采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的免疫副作用显著轻于灭活Q热疫苗,具有更好的安全性。     

舒肝解郁胶囊与黛力新治疗脑卒中后抑郁的对照研究

目的:评价舒肝解郁胶囊治疗脑卒中后抑郁(PSD)的疗效和安全性。方法:将60例PSD患者随机分为舒肝解郁组和黛力新组,在治疗前和治疗后2、4、6周分别用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、神经功能缺损评分表(NIHSS)评定其疗效,并观察两者的副作用。以症状量表(TESS)评定其不良反应。结果:与黛力新组相比,舒肝解郁组HAMD评分和NIHSS评分的减分率均较高(P<0.01),且不良反应明显减少(P<0.01)。结论:舒肝解郁胶囊可明显改善PSD的症状和神经功能缺损,临床副作用少,适合PSD的急性期和长期维持治疗。     

检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR)方法。方法根据贝氏柯克斯体特异的23SrRNA插入基因序列设计引物和探针,以克隆的23SrRNA插入基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI7900型)上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.997);与套式PCR相比较,荧光定量PCR检测敏感性是其100倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体,检出结果均为0。用荧光定量PCR检测贝氏柯克斯体感染的小鼠脾脏标本,脾脏中贝氏柯克斯体的感染量与感染过程具有相关性。结论本研究建立的检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,特别适合样本中微量贝氏柯克斯体DNA的检测,其定量检测可用于动物实验中的贝氏柯克斯体感染程度的分析。     

贝氏柯克斯体30kD外膜蛋白基因表达及免疫保护性的研究

贝氏柯克斯体可引起人类急、慢性Q热。急性Q热临床表现多种多样,主要症状为发热、头痛和肌肉酸痛,并常伴有肺炎、肝炎等。慢性Q热常发展为Q热性心内膜炎、骨髓炎。Q热疫苗是预防Q热流行的最有效手段,目前人用Q热疫苗是灭活的柯克斯体。虽然灭活疫苗的免疫保护效果很好,但注射该疫苗接种部位常出现不良反应。研究发现,在贝氏柯克斯体的Ⅰ相和Ⅱ相中含有相对分子质量(Mr)为30×10 3 的外膜蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性〔1〕。我们采用分子生物学技术,研制出贝氏柯克斯体Mr30×10 3 重组外膜蛋白,用重组蛋白免疫小鼠,对其免…     

表达胞壁结合型贝氏柯克斯体27 000外膜蛋白的重组卡介苗构建

目的：构建能够表达胞壁结合型贝氏柯克斯体27000外膜蛋白的重组卡介苗。方法：用PCR技术从卡介苗基因组扩增分枝杆菌19000抗原的细胞壁结合区基因和从贝氏柯克斯体基因组扩增27000外膜蛋白基因，将它们分别插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒(pSMT3)的XbαⅠ／BamHⅠ和BarnHⅠ／HindⅢ位点。将重组的穿梭质粒转化大肠杆菌并从大肠杆菌提取重组穿梭质粒转化卡介苗。结果：从含潮霉素的培养基筛选到具有该抗生素抗性的重组卡介苗菌落，用免疫印迹分析重组质粒转化的卡介苗，发现一约27000的蛋白带与贝氏柯克斯体27000重组蛋白免疫兔血清发生特异性反应；27000重组蛋白免疫兔血清做间接免疫荧光检测重组卡介苗，结果为阳性。结论：重组卡介苗能表达贝氏柯克斯体27000外膜蛋白，表达的27000外膜蛋白存在于卡介苗菌体表面，卡介苗菌体表面的27000抗原可能诱导抗Q热免疫应答。     

实时荧光定量PCR检测莫氏立克次体

目的 采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR.方法 依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法.结果 建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.995);该方法能检出＜10拷贝的莫氏立克次体DNA,敏感性为普通PCR的1 000倍.用该方法检测莫氏立克次体DNA,结果为阳性,但是检测其他相关细菌DNA的结果均为阴性.用该方法检测莫氏立克次体感染豚鼠血标本,50%样本检测为阳性,而普通PCR检测结果均为阴性.结论 该实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量莫氏立克次体DNA,可用于临床实验室快速确诊地方性斑疹伤寒.     

贝氏柯克斯体感染小鼠的病理学观察及其病原学检测

目的：用贝氏柯克斯体感染小鼠，观察引起的病理学变化并检测贝氏柯克斯体的抗原分布和DNA在靶细胞中的表达，探讨Q热病变规律并建立特异性诊断方法。方法：腹腔注射贝氏柯克斯体悬液感染BAIB／c小鼠，发病后解剖，观察各脏器的主要病变；做脾触片染色后检查；取各脏器制作石蜡切片，于光镜下观察；应用免疫组化染色显示贝氏柯克斯体的抗原分布；利用原位杂交从分子水平检测贝氏柯克斯体。结果：剖检可见肝脏、脾脏有明显病变；脾触片染色后在油镜下可查见红色短杆状物质；光镜下肝脏、脾脏有非典型肉芽肿形成，肺多呈间质性肺炎。脑神经胶质细胞增生；免疫组化和原位杂交阳性信号多位于单核-巨噬细胞系统胞浆内。结论：通过光镜观察感染贝氏柯克斯体小鼠发生的病理学变化，主要可见肝脏、脾脏有非典型肉芽肿，肺呈间质性肺炎，脑神经胶质细胞增生，其他脏器无明显变化；采用免疫组化染色和原位杂交，分别从抗原、基因水平原位检测贝氏柯克斯体。显示阳性信号多位于单核-巨噬细胞系统胞浆内，建立了特异性的Q热诊断方法。     

实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立

目的 建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法.方法 根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法.结果 该方法定量检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系,最小检出量小于10个拷贝.用该方法检测斑点热立克次体(立氏立克次体、西伯利亚立克次体、西伯利亚立克次体精河株、康氏立克次体、小蛛立克次体、澳大利亚立克次体、派氏立克次体、扇头蜱立克次体、非洲立克次体、阿斯特罕立克次体、斯洛伐克立克次体、日本立克次体、马赛立克次体、猫立克次体和黑龙江立克次体)DNA样本的结果均为阳性,但检测普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、查菲埃立克体、汉赛巴通体以及其他9种病原菌DNA样本的结果均为阴性.用荧光定量FCR检测立氏立克次体、黑龙江立克次体、西伯利亚立克次体精河株感染BALB/C小鼠脾脏组织DNA,均检出不同水平的阳性结果,结果与感染进程相关.结论 本研究建立的检测斑点热立克次体的实时荧光定量PCR具有较高的敏感性和群特异性,适合样本中各种斑点热立克次体的快速检测,可用于斑点热的实验室快速诊断和自然疫源地的流行病学研究.     

神经病学教与学网络互动平台模式的探索

神经病学是一门综合性比较强的学科,与内科、外科、解剖学、病理生理等学科密切相关,因为神经解剖结构的复杂性,以及神经内科的实践性和专业性较强而课时相对较少,成为临床教与学的难点之一,通过建立神经内科网络互动平台,促进神经内科教学水平的提高,或许是一种有益的教改探索.     

新形势下地方性医学院校研究生培养模式的思考

我国医学研究生教育是国家培养高层次卫生人才的重要途径,然而随着研究生的扩招,很多地方专科医学学校一夜之间提升为具有硕士学位授予权的本科医学院校,其研究生的培养的能力令人怀疑,本文将就这种地方性医学院校研究生培养模式的进行探讨。