脂质体法转染人肿瘤坏死因子-α基因对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制效应及其机制

背景：外源性肿瘤坏死因子（TNF）-α联合化疗药物对肿瘤的疗效较单独应用更佳,为肿瘤治疗提供了新的方向。目的：对裸鼠人肝癌移植瘤模型行脂质体介导的TNF-α基因瘤内转染,研究肝癌移植瘤的生长抑制情况及其机制。方法：经脂质体介导,以真核表达质粒pSVK3-TNF-α分别转染人肝癌细胞株SMMC-7721和裸鼠皮下SMMC-7721细胞移植瘤。测定SMMC-7721细胞的TNF-α浓度,甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞杀伤率,流式细胞仪和原位末端标记（TUNEL）法检测细胞周期和凋亡情况。结果：TNF-α转基因治疗裸鼠人肝癌移植瘤结束第5d,移植瘤体积为（75.28±35.35）mm^3,显著低于对照组的（326.45±103.64）mm^3（P〈0.05）。TNF-α基因体外转染SMMC-7721细胞24、48、72h后,基因转染组每106个细胞的TNF-α表达量分别为（1680±187）pg、（1702±205）pg和（1650±164）pg,细胞杀伤率分别为（37.1±2.4）%、（79.4±4.3）%和（84.2±4.6）%。基因转染72h后,SMMC-7721细胞增殖指数为（30.5±3.2）%,显著低于对照组的（46.1±3.9）%（P〈0.05）;凋亡指数为（10.0±2.1）%,显著高于对照组的（2.7±0.4）%（P〈0.01）。结论：脂质体介导的TNF-α基因转染裸鼠人肝癌移植瘤可明显抑制肿瘤生长,其机制可能为影响肿瘤细胞生长周期以及诱导肿瘤细胞凋亡。     

离心淘洗技术在分离大鼠肝非实质细胞亚群中的应用

目的采用离心淘洗技术分离纯化大鼠肝非实质细胞亚群.方法通过原粒肝脏酶灌注,准备肝非实质细胞悬液,离心淘洗,收集不同流速(20和40ml/min)的细胞群.结果经培养鉴定,流速21ml/min获得的为肝窦内皮细胞,40ml/min的为库普弗细胞,细胞纯度均大于95%.结论在本实验室,离心淘洗技术已能成功应用于肝脏细胞分离过程.     

重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞HGC27生长抑制作用的研究

目的:了解重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞株HGC27的作用,为进一步研究p21wif1的生物学作用以及肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:采用RT-PCR技术,构建表达p21蛋白的重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),并将其转染胃癌细胞HGC27,观察细胞形态学改变,用Western blot检测转移基因蛋白在胃癌细胞中的表达,用MTT法检测其对HGC27细胞生长的抑制作用,用流式细胞仪分析其对细胞周期的影响。结果:成功构建重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),所得病毒滴度达到3.5×107PFU/mL,在胃癌HGC27细胞中成功过表达转移基因蛋白p21,使胃癌细胞株细胞周期比例改变,G1期含量明显增加,并抑制其增殖。结论:重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)可诱导胃癌细胞株HGC27细胞G1期阻滞,抑制细胞增殖,该基因疗法可有效抑制体外胃癌细胞的生长。。     

IL-2基因转导小鼠肝癌细胞的实验研究

将细胞因子基因导入肿瘤以制备能用于肿瘤治疗的新型瘤苗．是近几年来肿瘤免疫治疗和基因治疗研究的热门课题。该方法通过基因修饰以提高肿瘤细胞的免疫原性，可被机体免疫系统识别，同时由死亡肿瘤细胞产生的细胞因子，激活免疫效应细胞，以改变肿瘤局部的微环境，提高机体的抗肿瘤免疫功能，     

慢性丙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚型和NK活性的研究

本研究为上海市科委发展基金资助项目（ＮＯ．９６Ｂ２２）ＨＣＶ感染引起的肝细胞损害多被认为与ＨＣＶ直接损害和人体免疫应答及免疫调节功能紊乱有关、本研究主要观察慢性丙型肝炎患者外周Ｔ淋巴细胞亚型及ＮＫ活性的改变，探讨患者细胞免疫功能在其发病机制中的作用。我院门诊慢性丙型肝炎患者共３２例，其中男性１８例，女性１４例，年龄２２～６７岁，平均年龄３９．４岁。选择标准：①血清ＨＣＶＲＮＡ（ＲＴ－ＰＣＲ法）和（或）抗－ＨＣＶ阳性；②伴有肝功能异常：血清胆红素、ＡＬＴ、γ－ＧＴ、白蛋白、透明质酸及血浆凝血酶原时…     

自身免疫性肝炎的诊断、分型和治疗

自Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ和Ｋｕｎｋｅｌ于５０年前首先描述其临床特点以来，自身免疫性肝炎（ＡＩＨ）一直是一个具有挑战性的概念。近１０年来由于分子生物学和免疫学的飞速发展，我们对于ＡＩＨ的认识才得以进一步加深。自身免疫性肝炎是一种长期存在的肝细胞炎症，其...     

IL-2基因转导小鼠肝癌细胞的实验研究

用重组人白细胞介素-2(IL-2)含信号肽cDNA的缺陷型逆转录病毒,将IL-2基因转导入小鼠H_(22)肝癌细胞株,经PCR和RT-PCR检测证实了转导后的细胞DNA内确有NeoR和IL-2基因的存在的表达。分别用光镜和电镜观察了经IL-2基因转录的H_(22)细胞体外形态,MTT法检测细胞体外增殖能力以及皮下接种H_(22)-IL-2细胞后观察肿瘤生长能力。结果表明经IL-2基因转导的鼠肝癌细胞体外增殖能力没有明显变化,但体内致瘤性却显著下降,丝裂霉素处理后作为瘤苗接种能抑制其后野生型H_(22)细胞的再次攻击。本研究为制备新型瘤苗打下了基础。     

上海地区I型自身免疫性肝炎与HLA-DRB1等位基因的相关性研究

目的 分析 HLA—DRB1等位基因与上海地区I型自身免疫性肝炎（AIH）的相关性,探讨 AIH的遗传易感背景。方法 采用序列特异性多聚酶链反应（PCR—SSP）,对32例I型AIH患者和48例健康对照者进行HLA—DRB1等位基因及有关基因亚型的分析。结果HLA—DR4基因频率在I型AIH患者中较健康对照组显著增高[46.9％与20.8％;相对危险度（RR）=3.35,x2=5.99,P=0.014]。其他等位基因在两组间差异无显著性。进一步对HLA-DR4等位基因亚型的分析表明,I型AIH患者组DRB1＊0405的基因频率较健康对照组有增加趋势（21.9％与6.3％,x2=4.23,P=0.04,但 Pc=0.08）。HLA—DRβ分子的第3等位基因高变区第71位精氨酸残基的频率在I型AIH患者中显著增高（46.9％与 18.8％,x2=7.14,P=0.008）。结论 上海地区I型 AIH的发病与HLA—DR4以及HLA—DRB1第3高变区DR71位精氨酸残基相关。     

虫草多糖脂质体对大鼠肝纤维化胶原酶mRNA变化的影响

目的评价虫草多糖脂质体的抗肝纤维化作用．方法采用小剂量虫草多糖脂质体（虫草多糖量为１５ｍｇ／１００ｇ，隔日１次）治疗ＣＣｌ４所致雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝纤维化（ｎ＝１２）１０周．运用地高辛自由引物法标记的１７ｋｂ胶原酶探针行点渍印迹杂交检测大鼠肝组织中的胶原酶ｍＲＮＡ含量．结果小剂量虫草多糖脂质体使大鼠肝组织中胶原酶ｍＲＮＡ含量增高非常显著（灰度数字转换值，７９１５±２０２３ｖｓ３１３０±６９２，Ｐ＜００１）．结论虫草多糖脂质体通过增加肝组织胶原酶ｍＲＮＡ的表达，促使Ⅰ，Ⅲ型胶原降解，可能是其抗纤维化的主要机制之一．     

丙型肝炎病毒NS_5B在Hub-7细胞中的转染与表达

目的建立丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂ表达的人肝细胞系。方法以脂质体共转染ＮＳ５ＳＢ基因人Ｈｕｂ－７细胞,以ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ在ＤＮＡ水平检测转染的结果,以ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实了Ｈｕｂ－７细胞中有ＮＳｕＢ的蛋白表达。结累在转染过ＮＳＳＢ质粒的细胞系中有ＮＳＳＢ基因的存在和ＨＣＶ－ＲＮＡ多聚酶的表达。结论我们在Ｈｕｂ－７细胞中建立了ＨＣＶ－ＲＮＡ多聚酶表达系统,它有助于研究ＨＣＶ复制机制和为基因治疗丙型肝炎打下基础。