从基因敲除小鼠心肌组织中筛选热休克反应中受HSF1调控的靶基因

目的：用cDNA芯片从热休克转录因子1（HSF1）基因敲除小鼠心肌组织中筛选热休克反应受HSF1调控的靶基因。方法：用cDNA芯片检测热休克反应（42℃ 15 min,恢复3 h）中HSF1 / 小鼠心肌组织基因表达谱的改变(以HSF1+/+小鼠为对照);用RT PCR对cDNA芯片筛选结果进行验证;对差异表达的已命名基因进行启动子区转录因子结合位点的分析。结果：共筛选到差异表达基因1 142个;其中在HSF1 / 小鼠心肌中表达下调的基因为398个,已命名基因为173个;在HSF1 / 小鼠心肌中表达上调的基因为641个,已命名基因为235个。在HSF1 / 小鼠心肌中表达下调2.5倍的已命名基因中,有5个基因启动子区含有热休克元件（HSE）;在HSF1 / 小鼠心肌中表达上调2.5倍的已命名基因中,有6个基因启动子区含有HSE。结论：在热休克反应中,HSF1可对多个基因的表达进行直接或间接的调控。     

二维及彩色血流显像对大隐静脉射频闭合术后的随访价值

目的 探讨大隐静脉曲张射频闭合术后随访过程中二维及彩色血流显像的声像图特点及其价值.方法 38例(共45条患肢)大隐静脉曲张行射频闭合术的患者,于术前1周内,术后1周、1、3、6、12个月行彩色超声检查.观察其二维图像及血流信号的随时间的演变规律.结果 术后3个月96%～98%的患者大隐静脉可基本闭合,无血流显示,6个月后有7%的再通.结论 彩色多普勒超声在大隐静脉曲张射频闭合术后的随访中有重要的价值.     

过氧化氢通过线粒体通路和死亡受体通路诱导心肌细胞凋亡

为探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡的分子机制，采用0．5mmol／L过氧化氢作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞。末端标记发现过氧化氢明显诱导心肌细胞凋亡；Caspase活性定量检测及Western-blot发现Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9同时被激活；而Western-blot及间接免疫荧光发现细胞色素C从线粒体释放入胞浆。以上结果提示，氧化应激通过同时激活线粒体通路与死亡受体通路导致心肌细胞凋亡，从而为临床防治与细胞凋亡相关的心血管疾病提供了新的信息。     

从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制

为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制，采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理，以诱导热休克蛋白的表达，观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现，热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白表达明显增加，同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放，抑制Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示，热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡，为临床防治心血管疾病提供了新的信息。     

HSF1通过抑制中性粒细胞浸润减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤

目的:探讨热休克因子1(HSF1)是否通过抑制中性粒细胞浸润减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)及其分子机制.方法:采用气管滴注脂多糖(LPS)的方法制备小鼠ALI模型,采用流式细胞术检测HSF1野生型(HSF1+/+)小鼠和HSF1敲除(HSF1-/-)小鼠LPS处理后12、24和36 h支气管肺泡灌洗液(BAL...     

KLF4过表达对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响.方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采用热应激(42 ℃)处理稳定表达小鼠KLF4基因的Raw264.7巨噬细胞1 h,37 ℃恢复12 h,采用流式细胞术、Hoechest33258染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.结果:获得了KLF4过表达的Raw264.7细胞株,流式细胞术结果显示,转空载体组和KLF4过表达组细胞凋亡百分率较热应激前均升高,但与转空载体组相比较KLF4过表达组升高更明显;荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变;KLF4过表达细胞琼脂糖凝胶电泳能检测到明显的DNA"梯状条带".结论:KLF4可以促进热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡.     

HSF1在热休克反应中对KLF4基因表达的影响

[目的]观察热休克因子1(HSF1)在热休克反应中对Kruppel 样因子4(KLF4)基因表达的影响;采用生物信息学方法初步探讨KLF4在热休克反应中调控的下游基因.[方法]采用HSF1基因敲除小鼠热休克模型,抽提HSF1基因敲除小鼠(HSF1^-/-)和野生型小鼠(HSF1^ / )心肌及肺组织的总RNA进行RT-PCR和Northern blot实验,观察KLF4mRNA表达的情况.用热休克处理和HSF1过表达的小鼠RAW264.7巨噬细胞,抽提总RNA进行RT-PCR实验,观察KLF4mRNA表达的情况;用TESS分析启动子含有KLF4结合位点的下游基因.[结果]热休克处理后,HSF1^ / 小鼠组织中KLF4mRNA的水平明显增加,HSF1^-/-小鼠组织中KLF4 mRNA水平的增加明显低于HSF1^ / 小鼠.小鼠RAW264.7巨噬细胞受热刺激后,KLF4mRNA的水平明显增加;在HSF1过表达细胞中KLF4的表达也明显增高.经TESS软件分析发现6个启动子区含有KLF4结合位点的下游基因.[结论]HSF1诱导KLF4基因在热休克反应中呈现高表达.     

社区家庭病床护理服务项目的构建

目的 通过明确社区家庭护理服务的内容和范围,构建符合社区家庭病床护理服务项目.方法 2011年6-7月,通过文献检索、现况调查等方法自行设计专家咨询表,使用Delphi法对15名社区医疗、护理及管理专家进行2轮问卷调查,确立家庭病床护理服务项目,对家庭病床患者统一开展相关护理服务.结果 经2轮专家咨询,最终确定的家庭病床护理服务为5个类别共27个项目.结论 在中国现有的社区/家庭护理发展条件下,应重视护理评估的重要性,大力开展心理护理、康复与健康指导类护理项目,慎重执行治疗性护理项目,对居家患者的生活护理给予有力的帮助.     

应用荧光标记基因分型对中国汉族人群进行遗传多态性研究

目的 :为了确定我国汉族人群遗传多态性片段大小范围与法国人群的差异 ,更好的进行基因组扫描和个体识别等方面研究。方法 :4 0 0个微卫星位点分别在 32个反应管中进行扩增。在 5 μl反应体系中加 6～ 17对PCR引物 ,多个微卫星位点同时扩增 ,产物在ABI377XLDNA测序仪上进行电泳。结果 :4 0 0个微卫星位点共有 30 6个有满意的结果 ,其中 12 4个微卫星位点与法国CEPH家系存在片段范围的差异。结论 :遗传多态性片段大小范围在种族间存在较大差异 ;在对中国汉族人群进行基因分型时 ,应在Genethon提供的范围基础上向两侧各扩大 10bp。