转基因作物标记蛋白潮霉素磷酸转移酶活性的测定方法

潮霉素磷酸转移酶 (HPT)是转基因作物中重要的标记蛋白 ,其活性的测定对含有该标记基因的转基因作物的植株构建、基因沉默、标记基因去除及安全性分析等具有重要的作用。本文综述了潮霉素磷酸转移酶活性测定的几种方法 ,包括放射化学法、抑菌生长法及酶耦联法 ,其中放射化学法用于检测组织粗提蛋白中的HPT活性 ,而其他两种方法适用于纯化过的HPT蛋白活性的检测     

Xa21转基因大米对大鼠致畸作用的实验研究

目的　观察Xa2 1转基因大米对大鼠胚胎生长、发育的影响。方法　将初断乳Wistar大鼠按雌雄分别随机分为 4组 :转基因大米组、非转基因大米组、AIN93G对照组和敌枯双阳性对照组。单笼喂养 ,饲相应鼠料 ,喂满 90天 ,雌雄合笼。观察母鼠和胎鼠的生长发育情况。结果　转基因大米组孕鼠增重、活胎体重、身长、尾长均显著高于阳性对照组 ,而死胎数、吸收胎数、畸形率 (外观、内脏、骨骼 )均显著低于阳性对照组。转基因大米组与非转基因大米组、AIN93G对照组相比 ,所有观察指标均无统计学差异。结论　转Xa2 1基因大米与非转基因大米相比 ,对大鼠受孕率、胚胎生长发育无显著性差异。     

转基因大米的免疫毒理学评价

目的　评价转基因大米和非转基因大米对小鼠免疫功能的异同。方法　以转豇豆胰蛋白酶抑制剂 (cowpeatrypsininhibitor ,CpTI)基因大米和母系非转基因大米喂养BALB C小鼠 30天 (均配成AIN 93G的全价营养饲料 ,并且含有最大量的转基因大米或非转基因大米 ) ,比较各组小鼠的各项免疫毒理指标 :体重、脏器指数、血常规、淋巴细胞分类、血清抗体滴度、空斑试验 (PFC)、迟发型皮肤过敏反应 (DTH)、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。结果　发现转基因大米和非转基因大米喂养的小鼠各项免疫毒理指标无差异。结论　转基因大米对小鼠的免疫功能的影响与非转基因大米基本相同 ,转基因大米与非转基因大米在免疫毒理学方面的评价具有“实质等同性”。     

转豇豆胰蛋白酶抑制剂大米的致畸作用研究

目的　用表达杀虫蛋白CpTI(豇豆胰蛋白酶抑制剂 )的大米喂养Wistar大鼠 ,研究其是否具有致畸作用。方法　将断乳的Wistar大鼠随机分为 4组 ,转基因大米组、非转基因大米组、阴性对照组和阳性对照组 ,敌枯双为阳性对照物。转基因大米组含 78 3%转基因大米 ,非转基因大米组含 74 7%与转基因大米同品系的非转基因大米 ,两个对照组的饲料为AIN93G ,三种饲料的宏量及微量营养素的含量相同。大鼠性成熟后 ,进行传统的致畸实验 ,观察母鼠及胎鼠的情况。结果　转基因大米组的孕鼠增重、胎鼠体重、身长和尾长显著高阳性对照组 ,畸形率 (包括外观畸形、骨骼畸形和内脏畸形 )显著低于阳性对照组 (P <0 0 1) ,转基因大米组、非转基因大米组及阴性对照组间的所有指标均无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　此种转CpTI基因的大米对大鼠无母体毒性、胚胎毒性和致畸作用。     

北京等15个城市脑卒中患者院前时间及影响因素研究

目的 研究北京等15个城市35家医院脑卒中患者到达医院前时间（院前时间）及其影响因素。方法 通过统一的问卷，对2002年6月30日至2003年4月30日发病一周内的2270例脑卒中患者进行调查。除一般资料外，按是否在脑卒中症状发生后6h内到达医院将患者分为两组，对影响脑卒中院前时间的因素进行单因素和多因素logistic回归分析。结果 （1）患者的平均年龄为64．8岁，男性占60．2％。缺血性脑卒中为78．8％，出血性脑卒中为21．2％。（2）发病后决定马上去医院的占27，8％。使用急救电话和急救车的比例为27．2％；约1／4患者知道脑卒中后需要马上去医院诊治和溶栓治疗；1／4的患者对脑卒中基本无认识，发病后不知道求救而盲目等待。（3）发病后≤6h到达医院的患者占57．5％；首次就诊地点是急诊室的为58．6％；发病后≤6h到达医院的缺血性脑卒中溶栓率为6．7％。（4）影响脑卒中患者院前时间的多因素分析显示：到达医院的方式、首次就诊的地点、发病地点到医院的距离、是否了解疾病的相关知识是影响患者≤6h到达医院的独立因素。结论 42．5％脑卒中患者不能在发病后6h内到达医院，其院前时间延误的主要原因是对脑卒中知识了解不够、使用急救电话／急救车少、患者转运距离超过20km等。加强公众对脑卒中知识的了解是提高患者6h内到达医院的重要因素。     

β-防御素2基因腺病毒表达载体的构建与真核表达

目的：探讨重组腺病毒载体在真核细胞中稳定表达阳离子抗菌肽——β-防御素2的可行性。方法：采用RT-PCR方法扩增得到大鼠β-防御素2（rBD2）基因片段，定向插入到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中，重组质粒pShuttle-CMV-rBD2转化E．coli BJ5183-AD-1后，与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1发生同源重组，重组质粒pAdEasy-rBD2转染293细胞进行腺病毒表达载体的包装。将包装成功的腺病毒感染cos-7细胞，并建立SD大鼠腺病毒感染模型，进行β-防御素2多肽的体外和体内表达，采用Western blot与免疫组化方法检测其表达。结果：重组腺病毒表达载体构建成功，包含大鼠β-防御素2基因，滴度达到10^9PFU／ml，Western blot与免疫组化方法分别检测到β-防御素2在SD大鼠体外、体内的表达。结论：重组腺病毒载体能在真核细胞中稳定表达阳离子抗菌肽——β-防御素2。     

大剂量糖皮质激素联合抗蛇毒血清治疗竹叶青蛇伤致DIC的疗效

目的观察大剂量糖皮质激素联合抗蛇毒血清在治疗竹叶青蛇伤致DIC中的疗效。方法57例竹叶青蛇伤致DIC患者按单盲随机法分为两组,对照组28例,治疗组29例。对照组予常规综合治疗+抗蝮蛇血清;治疗组在对照组基础上加用甲基强的松龙1000m g/d,观察两组疗效及凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)和血小板(PLT)的恢复时间。结果治疗组总有效率96.6%,对照组总有效率75.0%,两者差异有显著性(P<0.05);治疗组PT、Fg、PLT与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论大剂量糖皮质激素联合抗蛇毒血清治疗竹叶青蛇伤致DIC可明显缩短凝血指标恢复时间及提高疗效。可以对竹叶青蛇毒起较好的中和作用,取得满意的临床治疗效果。     

高速逆流色谱法分离纯化浙贝母中贝母素甲, 贝母素乙

目的:采用高速逆流色谱技术分离提纯浙贝母中的活性成分贝母素甲,贝母素乙.方法:采用氯仿-无水乙醇-0.2mo1.L-1盐酸(4:3:2)系统,上相为固定相,下相为流动相.主机转速为800r.min-1,流动相流速为1.2mL·min-1.结果:一次进样分离得到贝母素甲、贝母素乙,经高效液相(HPLC)分析纯度,经MS,1HNMR鉴定结构.结论:利用本实验条件可从浙贝母中分离制备贝母素甲,贝母素乙,两者纯度分别达到:97.5%,94.5%.     

B7-h4 is highly expressed in ductal and lobular breast cancer.

PURPOSE: This study was designed to investigate the expression of B7-H4 protein, a member of the B7 family that is involved in the regulation of antigen-specific immune responses, in normal breast and in primary and metastatic breast carcinomas. EXPERIMENTAL DESIGN: Archival formalin-fixed tissue blocks from breast cancers and normal somatic tissues were evaluated for B7-H4 expression by immunohistochemistry with manual and automated image analysis. The proportion of B7-H4-positive cells and the intensity of B7-H4 staining were compared with histologic type, grade, stage, hormone receptor status, and HER-2/neu status. RESULTS: B7-H4 was detected in 165 of 173 (95.4%) primary breast cancers and in 240 of 246 (97.6%) metastatic breast cancers. B7-H4 staining intensity was greater in invasive ductal carcinomas [24.61 relative units (RU)] and in invasive lobular carcinomas (15.23 RU) than in normal breast epithelium (4.30 RU, P = 0.0003). Increased staining intensity was associated with negative progesterone receptor status (P = 0.014) and history of neoadjuvant chemotherapy (P = 0.004), and the proportion of B7-H4-positive cells was associated with negative progesterone receptor (P = 0.001) and negative HER-2/neu (P = 0.024) status. However, there was no statistically significant relationship between the proportion of B7-H4-positive cells or staining intensity and grade, stage, or other clinicopathologic variables. Low levels of B7-H4 expression were also detected in epithelial cells of the female genital tract, lung, pancreas, and kidney, but B7-H4 was generally absent in most other normal somatic tissues. CONCLUSIONS: The nearly ubiquitous expression of B7-H4 in breast cancer, independent of tumor grade or stage, suggests a critical role for this protein in breast cancer biology.     

金瓷修复体制作中的问题分析

目的 研究金属烤瓷修复体制作过程中经常出现的问题及如何补救，探讨提高金瓷修复体修复工艺方面的问题。方法 收集并分析临床近5年制作的580例、共650件金属烤瓷修复体，归纳其在制作中出现的问题。结果 瓷裂及崩瓷18件，占2．76％：气泡15件，占2．31％；铸造缺陷11件，占1．69％；色泽不协调12件，占1．85％。结论 金瓷修复体的加工制作是一个复杂而细致的过程，与技工室制作、临床设计及牙体制备都有密切关系，其中任何一个环节的操作不当都可能导致修复体的失败。