前列腺素E2调控骨髓间充质干细胞成骨分化最佳浓度及其效应基因

背景：前列腺素E2不仅是参与机体炎症反应的炎性递质,而且在骨组织形成与改建过程中起着非常重要的调节作用,且前列腺素E2在其他干细胞如神经干细胞、胚胎干细胞的增殖分化中,也表现出类似的调节作用。 目的：研究前列腺素E2对骨髓间充质干细胞增殖与骨向分化的影响,检测其促增殖和成骨分化的最佳剂量,筛选出前列腺素E2的效应基因,评价前列腺素E2诱导成骨的作用机制。 方法：提取SD大鼠骨髓间充质干细胞并鉴定,配制10-2,10-3,10-4 ,10-5,10-6 g/L不同质量浓度的前列腺素E2溶液,分别与第3代骨髓间充质干细胞共培养,空白组为含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM。MTT比色法及碱性磷酸酶定量检测,筛选出前列腺素E2促骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的最佳剂量。利用基因芯片筛选出最佳成骨诱导浓度前列腺素E2诱导后14 d的骨髓间充质干细胞与未诱导组的差异表达基因。 结果与结论：不同质量浓度前列腺素E2诱导实验数据进行统计学分析后发现前列腺素E2最佳促骨髓间充质干细胞增殖浓度为1×10-4 g/L,前列腺素E2最佳促骨髓间充质干细胞成骨分化浓度为1×10-5 g/L。基因芯片筛选发现Cxcl13、Cd55基因及 PPAR、MAPK信号通路可能与前列腺素E2促骨髓间充质干细胞向成骨分化关系密切。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Hypoxia-induced factor-1 alpha upregulates vascular endothelial growth factor C to promote lymphangiogenesis and angiogenesis in breast cancer patients

Hypoxia-induced factor-1 alpha （HIF-1α） affects many effector molecules and regulates tumor lymphangio- genesis and angiogenesis during hypoxia. The aim of this study was to investigate the role of HIF-1α in the regu- lation of vascular endothelial growth factor C （VEGF-C） expression and its effect on lymphangiogenesis and an- giogenesis in breast cancer. Lymphatic vessel density （LVD）, microvessel density （MVD） and the expressions of HIF-1α and VEGF-C proteins were evaluated by immunohistochemistry in 75 breast cancer samples. There was a significant correlation between HIF-1α and VEGF-C （P = 0.014, r = 0.273, Spearman＇s coefficient of correlation）. HIF-1α and VEGF-C overexpression was significantly correlated with higher LVD （P = 0.003 and P = 0.017, re- spectively）, regional lymph nodal involvement （P = 0.002 and P = 0.004, respectively） and advanced tumor, node, metastasis （TNM） classification （P = 0.001 and P = 0.01, respectively）. Higher MVD was observed in the group expressing higher levels of HIF-1α and VEGF-C （P = 0.033 and P = 0.037, respectively）. Univariate analysis showed shorter survival time in patients expressing higher levels of HIF-1α and VEGF-C. HIF-1α was also found to be an independent prognostic factor of overall survival in multivariate analysis. The results suggest that HIF-1α may affect VEGF-C expression, thus acting as a crucial regulator of lymphangiogenesis and angiogenesis in breast cancer. This study highlights promising potential of HIF- 1α as a therapeutic target against tumor lymph node me- tastasis.     

转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球对干细胞的调控

文题释义：转化生长因子β3：是转化生长因子β超家族成员,在胚胎软骨形成的多个时期都是必不可少的软骨组织形成的关键调节因子,可以促进间充质干细胞迁移并诱导其向软骨组织分化与成熟,促进软骨缺损的愈合。 聚乳酸-羟基乙酸微球：属于食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的可生物降解聚合物,具有可控的降解性和良好的生物相容性,被广泛应用于医药领域。由于其生物可降解性,聚乳酸-羟基乙酸微球微球被广泛应用于小分子药物、蛋白质和其他大分子药物的可控持续释放。 背景：转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球系统可使药物在作用部位维持有效药物浓度,提高生长因子的利用率。 目的：优化转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球制备工艺,探究其对脂肪间充质干细胞增殖和迁移的影响。 方法：采用乳化-溶剂挥发法制备转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球,并对微球的形态、粒径大小、药物空间分布、包封率、载药量和缓释性能进行表征。将转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球溶解于PBS中,于相应的时间点检测上清液中转化生长因子β3浓度,对应时间点扫描电镜观察微球形态。将脂肪间充质干细胞分6组培养,分别加入培养基(阴性对照)、含转化生长因子β3的培养基、含空白聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基、含10,100,1 000 g/L转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基,于对应的时间点CCK-8法检测增殖。将脂肪间充质干细胞分别与培养基(阴性对照)、含转化生长因子β3的培养基、含聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基、含10,100,1 000 g/L转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基以非接触方式共培养24 h,检测细胞迁移数量。结果与结论：①转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球呈球形,表面光滑,无粘连,粒径均匀分布,微球直径2-50 μm,微球内的蛋白药物分布均匀,具有较高的包封率与载药量;②缓释微球具有良好的降解性能,体外可于6个月后完全降解;同时具有良好的缓释性能,体外可缓慢释放转化生长因子β3长达45 d;③空白微球及含转化生长因子β3的缓释微球对脂肪间充质干细胞增殖无影响;④空白微球对脂肪间充质干细胞的迁移无影响,转化生长因子β3及含转化生长因子β3的缓释微球可促进脂肪间充质干细胞的迁移,不同质量浓度缓释微球间的促进效果无差异;⑤结果表明,转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球可在不影响脂肪间充质干细胞增殖的情况下促进其迁移。 ORCID: 0000-0002-2267-4589(杨振) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

miR-145对血管平滑肌细胞生物活性及SM22α mRNA表达的作用*

目的：探究miR-145 对血管平滑肌细胞（VSMC）的生物活性及对SM22α mRNA 表达的作用。方法： VSMC分为3 组,增殖VSMC组（ 增殖组）、增殖VSMC + 转染miR-145-NC 组（ 空载体组）、增殖VSMC+转染 miR-145 组（ 增殖转染组）。采用RT-PCR 检测VSMC中SM22α mRNA、miR-145 的表达;免疫印迹检测cyclin E、p27 蛋白水平;Transwell 小室检测VSMC侵袭能力;MTT检测VSMC活力;流式细胞术检测VSMC凋亡率。 结果：增殖组VSMC中SM22α mRNA、miR-145 水平与空载体组相比数值较为接近;与增殖组及空载体组相比, 增殖转染组VSMC中miR-145、SM22α mRNA 表达升高。增殖组VSMC中cyclin E、p27 蛋白水平与空载体组相 比无差异;增殖转染组cyclin E 蛋白水平低于空载体组、增殖组,p27 蛋白水平高于空载体组、增殖组。增殖组 VSMC迁移数量与空载体组相比无差异;增殖转染组VSMC迁移数量明显低于空载体组、增殖组。增殖组与空载 体组VSMC在不同时间点的OD 值均较为接近;增殖转染组OD 值在不同时间点均低于空载体组、增殖组。增殖 组VSMC凋亡率与空载体组数值接近,组间比较差距较小;增殖转染组VSMC凋亡率较空载体组和增殖组升高。 结论：过表达miR-145 通过促进SM22α 水平增加,抑制血管平滑肌细胞的增殖,并促进其凋亡。     

Novel bi-allelic variants in DNAH2 cause severe asthenoteratozoospermia with multiple morphological abnormalities of the flagella

Research questionMultiple morphological abnormalities of the flagella (MMAF) is characterized by excessive immotile spermatozoa with severe flagellar abnormalities in the ejaculate. Previous studies have reported a heterogeneous genetic profile associated with MMAF. What other genetic variants might explain the cause of MMAF?DesignWhole-exome sequencing was conducted in a cohort of 90 Chinese patients with MMAF. The pathogenicity of identified mutations was assessed through electron microscopy and immunofluorescent examinations.ResultsThree unrelated men with bi-allelic DNAH2 variants were identified. Sanger sequencing verified that the six novel variants originated from every parent. All these variants were located at the conserved domains of DNAH2 and predicted to be deleterious by bioinformatic tools. Haematoxylin and eosin staining and scanning electron microscopy revealed that spermatozoa harbouring DNAH2 variants displayed severely aberrant morphology mainly with absent and short flagella (≥78%). Moreover, transmission electron microscopy revealed the obvious absence of a central pair of microtubules and inner dynein arms in the spermatozoa with mutated DNAH2. Immunofluorescence data further validated these findings, showing reduced DNAH2 protein expression in the spermatozoa with DNAH2 variants, compared with normal spermatozoa. Intracytoplasmic sperm injection using spermatozoa from the three men with mutated DNAH2 resulted in blastocyst formation in all cases. Embryo transfer was carried out in two couples, both resulting in clinical pregnancy.ConclusionsThese experimental and clinical data suggest that bi-allelic DNAH2 variants might induce MMAF-associated asthenoteratozoospermia, which can be overcome through intracytoplasmic sperm injection. These findings contribute to the knowledge of the genetic landscape of asthenoteratozoospermia and clinical counselling of male infertility.     

应对氨基糖苷类抗生素耐药的策略

氨基糖苷类抗生素在治疗感染性疾病中起着重要作用,尤其是革兰阴性菌引起的严重感染,但是随着临床上耐药菌株的出现较大地限制了此类抗生素的应用,因此,在对细菌耐药机制研究的基础上如何控制细菌的耐药性成为一项迫切需要解决的任务。针对细菌对氨基糖苷类抗生素产生抗性的机制不同,目前采用的措施主要有3种：1）对原有氨基糖苷类抗生素进行改造;2）开发氨基糖苷类抗生素修饰酶抑制剂;3）设计双功能氨基糖苷类抗生素。     

肾功能不全患者细胞色素P4502D6酶的基因多态性分析

目的研究肾功能不全患者细胞色素P4502D6酶的CYP2D6＊10等位基因的基因多态性。方法采用5引物单管聚合酶链反应扩增CYP2D6＊10等位基因,对103例肾功能不全患者的细胞色素P4502D6酶基因型进行分析。结果 103例肾功能不全患者的CYP2D6＊10等位基因频率为49.51%,其中33例（32.04%）为野生型（C/C）,32例（31.07%）为突变型（T/T）,其余38例（36.89%）为杂合子型（C/T）,与健康汉族人群比较差异有显著意义（P〈0.05）。C等位基因频率为50.5%,T等位基因频率为49.5%。结论 CYP2D6＊10等位基因是影响肾功能不全的一个因素。     

一种新的链霉菌表达载体启动子

eryA基因直接控制着红霉素母环6-脱氧-红霉内酯B的合成,在红霉素生物合成过程中具有重要作用。本文克隆了eryA基因的启动子PeryA,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,构建了大肠埃希菌-糖多孢红霉菌穿梭型质粒。PEG介导原生质体转化法将穿梭型质粒分别转入糖多孢红霉菌A226与变铅青链霉菌JT46,荧光显微镜检测发现,此启动子在两菌株中都具有功能。随后,以变铅青链霉菌JT46为宿主,对PeryA启动子区域进行了深入研究,结果发现该启动子的-35区并不是必需的,仅有-10区、长度为41bp的该启动子在链霉菌中仍具有功能。定点突变证明-10区对于该启动子是必不可少的。因此,41bp的该启动子片段可作为链霉菌的有效启动子,这是迄今为止所发现的最短的启动子之一,可用于构建新的链霉菌表达载体。     

Evaluation of high-risk Human papillomaviruses type distribution in cervical cancer in Sichuan province of China

Background  

Infection with high-risk human papillomavirus is an important factor associated with cervical cancer, and the distribution of HPV types varies greatly worldwide. Determination of type-specific HPV prevalence constitutes an important step towards the development of vaccines for the prevention of cervical cancer.     

臂丛神经自控镇痛对断肢(指)再植患者免疫功能的影响

目的:探讨臂丛神经自控镇痛对断肢(指)再植患者免疫功能的影响。方法:断肢(指)再植30例术后随机分为患者臂丛神经自控镇痛(PCRA)和患者静脉自控镇痛(PCIA)组,分别于术前(T0)、术后即刻(T1)、术后第1天(T2)、术后第3天(T3)、术后第5天(T4)测定血液中细胞因子、C-反应蛋白(CRP)、皮质醇以及免疫细胞(中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞)以了解免疫功能状况。结果:与PCIA组比较,PCRA组循环细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和应激反应指标CRP和皮质醇等的浓度均无明显变化。此外单核细胞数差异也无统计学意义,但PCRA组术后B淋巴细胞和T-辅助细胞明显减少,自然杀伤(NK)细胞也明显减少。结论:术后臂丛神经自控镇痛对单核细胞功能没有影响,但可使自然杀伤细胞数减少。因此臂丛神经自控镇痛可影响特异性免疫系统,而对先天性免疫系统无影响,并可能减轻与抗感染能力有关的术后淋巴细胞抑制。