鼠巨细胞病毒抑制神经干细胞分化及分化基因表达的体外研究

目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)分化及分化基因表达的影响,探讨CMV先天感染致神经损伤的机制.方法 体外分离培养和鉴定BALB/c胎鼠NSCs并检测其分化潜能,用感染复数(MOI)为5、1和0.1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞术检测分化细胞比率,免疫荧光法观察NSCs及其分化细胞标记物Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的变化,采用MCMV早期抗原(EA)示踪感染过程(MOI=1),real-time RT-PCR检测分化早期NSCs Wnt信号途径关键分化基因Wnt-3和Wnt-Ta mRNA水平的动态变化.结果 体外培养的NSCs呈球样生长,神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性,并可进一步诱导分化为NF-200阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞;分化培养后,感染组NSCs不能贴壁分化生长并逐渐出现肿胀,细胞Nestin表达下调缓慢并显著高于正常对照组,而GFAP和NSE表达显著低于正常对照组(P<0.05),可检测到MCMV EA的阳性表达;分化培养3-9 d,感染组Nestin阳性细胞比率显著高于正常对照组,GFAP和NSE阳性细胞比率显著低于正常对照组(P<0.05);感染组Wnt-3 mRNA水平在分化培养后第1～2天显著低于正常对照组(P<0.05),感染组Wnto-7a mRNA水平在第0.5～2天明显低于正常对照组(P<0.05);感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显.结论 MCMV感染可明显抑制NSCs向神经元和星形胶质细胞方向分化,导致分化细胞比率减少;下调或干扰NSCs wnt信号途径分化基因wnt-3和Wnt-7a的表达;抑制NSCs分化及其分化基因表达的效应与MOI大小存在一定量效依赖关系;MCMV可能通过抑制NSCs分化基因的表达来抑制其分化,这可能是CMV先天感染致脑发育异常的重要机制之一.     

RAAS系统在继发性高血压疾病中的应用进展

在人体体内分布最广泛的内分泌调节系统是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosteron system,RAAS),该系统在内分泌调节环节中发挥着至关重要的作用.在内分泌系统中,可以通过RAAS来实现对人体体内血量流动和外周阻力的控制,并且还可以通过RAAS来进一步调节体内血压、水和电解质的平衡,确保人体环境能够保持在一个稳定的状态.组成RAAS的主要部分有肾素、血管紧张素和醛固酮.针对RAAS各个组成部分进行深入研究之后,发现在RAAS系统中的一些部分与嗜铬细胞瘤、副神经节瘤等继发性高血压疾病密切相关.通过检测RAAS的组分可以辅助诊断因RAAS系统失调所导致的多种疾病.本文将从RAAS组分的检测方法及其在继发性高血压中的临床应用进行综述.     

头颈部肿瘤射野摆位误差的差异性研究

目的：研究采用电子射野系统评价头颈部肿瘤患者摆位误差时的观察者间变异和观察者自身变异。方法：两队研究小组，分别由四名医师和四名技师组成，两组分别对6名头颈部肿瘤的患者，采用电子射野影像仪（electronic portal imaging device，EPID）拍摄验证片（electronic portal images，EPIs），在EPIs上勾画骨性标志，以放疗计划生成的数字重建图像（digitally reconstructed radiographs，DRRs）做为参考图像，定量分析不同观察研究人员之间和研究人员自身采用EPID确定头颈部肿瘤患者的射野摆位误差（field placement errors，FPEs）的差异性。结果：在前／后位射野图像上．不同医师之间、医师自身及技师自身对摆位误差的判断无明显差异，但在技师之间出现了明显的自身差异性．医师组和技师组在前／后射野图像上的均方根（root-mean—square，RMS）分别为2．52±0．46和3．43±0．43，两者具有明显差异；在侧位野图像上，医师自身对摆位误差的判断有较好的稳定性，但部分不同医师之间在腹背、头足方向上部分患者中出现差异，而不同的技师之间存在明显差异性，医师组和技师组在侧位射野图像上的RMS分别为2．72±0．16和2．62±0．22．两者无明显差异。结论：医师和技师组在采用电子射野系统对头颈部摆位误差进行判断时存在人员之间的误差，应对所有人员进行统一训练才能减少射野摆位误差，从而提高IMRT治疗效果。     

HIV-1协同受体CXCR4、CCR5及相关趋化因子SDF-1在胎盘的表达

目的：研究HIV-1协同受体CXCR4、CCR5及CXCR4的特异性配体SDF-1在人胎盘组织的表达，探索HIV-1子宫内垂直传播的分子机制。方法：半定量RT-PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5 mRNA水平；免疫组化和免疫细胞化学检测早孕胎盘及原代培养滋养细胞CXCR4、CCR5蛋白表达；原位杂交及免疫组化分析SDF-1在早孕胎盘的表达；ELISA测定滋养细胞SDF-1的动态分泌水平。结果：各孕期胎盘表达CXCR4及CCR5 mRNA；CXCR4蛋白定位于滋养细胞，而CCR5蛋白定位于绒毛基质中。滋养细胞可转录并翻译SDF-1，且能分泌可溶性SDF-1。结论：滋养细胞同时表达CXCR4及SDF-1，SDF-1可能通过降调CXCR4而拮抗X4-HIV-1感染胎儿细胞；R5-HIV-1或许能通过滋养层裂隙感染CCR5^#基质细胞和/或Hotbauer细胞，从而发生子宫内垂直传播。     

川芎嗪诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的用川芎嗪(ligustrazin hydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，rMSCs)分化为神经元样细胞。方法用低糖DMEM冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞悬液，接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化，选用第5代后的骨髓间质干细胞进行诱导分化。用10μg／LbFcF预诱导24h，更换成含川芎嗪的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组织化学SABC法鉴定神经丝蛋白(NF—M)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果第5代间质干细胞形态达到均一，呈梭形。用川芎嗪诱导15min到3h，间质干细胞胞体逐渐增大，并伸出细长突起形似神经元样细胞。免疫组织化学显示NF-M、NSE、nestin、MAP-2和GAP-43表达阳性，而GFAP阴性。对照组上述染色均为阴性。结论川芎嗪可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

PET/CT在肿瘤疾病中的初步应用

目的回顾性探讨PET／CT对肿瘤的诊断价值。方法肿瘤病人200例，其中未治疗病人71例，已治疗病人129例。经静脉注射^18F-FDG 45min后，进行PET／CT扫描。结果未治疗病人71例中，PET／CT准确诊断有68例（95．7％），阴性3例，发现肿瘤转移54例，其中广泛转移30例。已治疗组129例中，提示肿瘤复发或／伴转移96例，其余33例在手术／放疗／化疗等治疗后未见肿瘤复发。结论PET／CT具有对病变部位进行精确定位和定性的优势，大大提高了诊断的准确率。对于肿瘤的早期诊断和分期、指导制定治疗方案、判断肿瘤有无复发与坏死及预后的估计均有重要的临床意义。     

牛IL-18基因的克隆及遗传进化分析

目的：克隆牛白细胞介素18（IL-18）全基因，并对其进行序列分析。方法：从ConA刺激培养的牛外周血淋巴细胞提取总RNA，利用巢式RT-PCR方法扩增出牛IL-18全长cDNA，将其克隆到pMDl8-T载体上，测序后进行序列分析。结果：成功地克隆到了牛IL-18全基因，序列分析表明，实验中所克隆到的牛IL-18序列与GeneBank所登录的牛IL-18核苷酸序列及其推导氨酸序列同源性分别是99．5％和99％。与人、猕猴、野猪、山羊属、马等核苷酸序列及其推导氨基酸序列同源性分别在84．9％-99．5％和74．9％～99％之间，研究结果在国内还未见报道。结论：成功地从牛外周血中克隆到了牛IL-18的基因，其全长为598bp。     

APA微胶囊免疫隔离生物膜制备中的质量控制

为了优化制备条件, 简化工艺, 控制质量, 本文观测了APA(海藻酸盐-聚赖氨酸-海藻酸盐)微胶囊免疫隔离生物膜制备过程中部分物理因素和化学因素与质量的关系.结果表明: 微囊的粒径与静电微囊发生仪脉冲频率呈负相关; 与推进泵速度呈正相关; 与针头内径呈正相关.随着聚赖氨酸浓度的增加, 膜厚度显著增加.微囊的粒径不随聚赖氨酸成膜反应时间延长而改变, 但影响膜的厚度.柠檬酸钠的液化时间对微囊的粒径与厚度均无明显影响.通过优化制备条件, APA微胶囊免疫隔离生物膜将具有更好的通透性、柔韧性、生物相容性和强度.     

基于模糊连接度的多发性硬化症MR图像自动分割算法

多发性硬化症(MS)是一种严重威胁中枢神经功能的疾病,利用磁共振成像技术能够无损伤地检出其病灶。为了自动地对多发性硬化症病灶进行分割,提出了基于模糊连接度的分割算法,实现了种子点的自动选取。作为多发性硬化症分割的预处理,针对脑部MR FLAIR图像的特征,基于区域增长方法,还提出了脑部组织提取算法。通过对临床患者MR图像的分割实验,表明该分割算法能够比较准确地分割多发性硬化症病灶,其分割效果明显好于模糊C-均值聚类算法和基于马尔可夫场模型的分割算法。该算法还具有无监督、运算速度快、稳健性好等优点,能够应用于多发性硬化症的临床辅助诊断。     

3-7岁麻烦型气质儿童餐桌行为的心理干预

目的：探讨心理干预对3－7岁麻烦型气质儿童的餐桌行为的作用。方法：用CTPS（China Preschool-children Temperament Scale)问卷方式对410名3－7岁儿童的气质类型进行综合评定划分出5个气质类型；对其中50名麻烦型气质儿童的餐桌行为问题进行了3个月的心理干预治疗。并对其餐桌行为做干预前后的偏挑食行为，改善进餐情绪，提高进餐速度有效。结论：心理干预可以纠正儿童的餐桌行为。