人脐静脉内皮细胞清除补体攻膜复合物的机制

目的：探讨内皮细胞清除补体攻膜复合物（MAC）的途径及其清除动力学，方法：原代培养的人脐静脉内皮细胞以RH414荧光标记质膜双层，0℃组装亚溶剂量的MAC，37℃复苏后，LSCM实时监MAC沉积诱导的质膜囊泡化形成和胞吞，胞吐情况,流式细胞仪定量检测内皮细胞表面MAC抗原的清除情况，结果：MAC沉积后，内皮细胞有的质膜囊泡化形成，囊泡以胞吞和胞吐2种方式离开细胞，并以前者占优，37度条件下，内皮细胞清除表面MAC的半衰期约为5min。结论：内皮细胞可通过胞吞和胞吐2种机制清除细胞表面沉积的MAC，并以胞吞方式为主。     

1例永久性三叉动脉显微解剖与文献复习

目的：报道1例偶然发现的右侧永久性三叉动脉形态、特点，并进行文献复习。方法：利用显微解剖对此例永久性三叉动脉的起源、走行、分支、分布、与后循环连接关系、以及相关动脉解剖特点等进行了研究。结果：此例永久性三叉动脉与脑膜垂体干共干起源于颈内动脉海绵窦段，于展神经外侧进入后颅窝，分支与基底动脉和小脑上动脉吻合，其终末支之一延续为同侧的小脑下后动脉，此动脉与三叉神经关系密切，分支分布于脑干和小脑。结论：永久性三叉动脉与后循环关系复杂，广泛参与正常脑组织供血。     

毛细胞PMCA2在小鼠内耳Ca2+调节和听觉平衡中的作用

目的： 研究小鼠内耳毛细胞细胞膜Ca²⁺-ATP酶2型蛋白（PMCA2）在听觉平衡生理中的作用及意义。 方法：利用不同基因型小鼠PMCA2^-/-(突变纯合子)、PMCA2^+/-(杂合子)和PMCA2^+/+(野生型)为实验对象，采用听觉脑干反应(ABR)、畸变产物耳声发射(DPOAE)和耳蜗内电位(EP)检测等方法，分别检测不同基因型小鼠的内耳生理功能。结果：PMCA2^+/+野生型鼠的听力正常，ABR的短声(click)阈值为(13.75±11.08)dB SPL；EP均值为(91.3±11.0)mV。PMCA2^+/-杂合子小鼠听力低于同窝PMCA2^+/+野生型鼠，ABR的短声阈值为(63.89±12.90)dB SPL，与PMCA2^+/+小鼠比较差异显著(P<0.01)；PMCA2^+/-小鼠没有检测出DPOAE的高频区辐值，其EP均值为(80.7±9.0)mV。PMCA2^-/-小鼠的ABR在100 dB SPL无反应，表现出全聋和平衡功能失调，其EP均值为(56.6±13.0)mV；PMCA2^-/-小鼠没有检测出DPOAEs。结论：PMCA2是内耳毛细胞纤毛丛上的重要Ca²⁺转运通道，对维持内耳的Ca²⁺代谢和听觉平衡功能有重要作用。     

EB病毒LMP2A特异性CTL的体外诱导及分析

用EBV LMP2A重组痘苗病毒 (rVV LMP2A )转染人树突状细胞 (DC ) ,转染后的DC分别在第 1、 7、 14天刺激相同MHC背景的T细胞 ,在IL 2作用下诱导LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS )检测CTL诱导分化过程中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 等细胞的分群变化 ;RT PCR检测细胞分化过程中FasLmRNA表达 ;生物活性法检测功能性细胞因子IFN γ的分泌。结果显示本法诱导的CTL对靶细胞有特异性杀伤活性 ,第 2次和第 3次DC刺激后杀伤活性有所上升 ;在CTL诱导分化的第 7、 14、 2 1天细胞分群以CD4 + 、CD8+ 细胞为主 ;RT PCR证实所诱导的细胞内有FasLmRNA的表达 ;随细胞培养天数的增加IFN γ分泌增加 ,在第 14天达到较高水平。研究表明重组痘苗病毒载体rVV LMP2A转染的DC刺激T细胞可诱导出EBV LMP2A特异性CTL。     

杂合型单核苷酸多态性定量焦测序测定法用于唐氏综合征快速诊断的探索

目的 通过筛查人21号染色体上的杂合型单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,初步建立基于定量焦磷酸测序反应的唐氏综合征分子诊断方法.方法 基于改进引物设计的等位基因特异性扩增法,在21号染色体上选取7个SNP位点进行杂合子筛选,通过焦测序法检测SNP中两个等位基因型的比值,并作为诊断唐氏综合征的依据.结果 通过对84名正常中国人基因组样本进行筛查,得到6个杂合率较高的SNP位点.6个SNP位点的杂合子覆盖率为92.9%.应用这6个SNP位点对10例唐氏综合征患者的样本进行了焦测序定量检测,结果表明10例患者样本中有9例样本的两个基因型比值为2:1或1:2,1例未检出杂合子,检出率为90%.结论 初步建立了一种唐氏综合征辅助诊断方法,具有成本低、操作简单、快速和结果明了的优点,可以有效地快速诊断唐氏综合征,为今后进一步完善该方法,并将其用于临床诊断奠定了基础.     

秦巴山区初中学生心理健康状况调查研究

目的　了解秦巴山区初中学生心理健康状况及其影响的主要因素。方法　采用 SCL-90临床症状自评量表随机对陕西省安康地区双溪乡初中学生进行心理健康测查。结果　秦巴山区双溪乡初中学生心理健康状况与全国初中学生心理健康常模比较 ,并未出现显著性差异 ;影响初中男生心理健康因素从大到小的顺序为 :抑郁 >躯体化 >焦虑 >强迫 >精神病性 >恐怖 >人际关系 >偏执 >其它 >敌对 ;影响女生心理健康因素从大到小的顺序为 :抑郁 >躯体化 >焦虑 >人际关系>强迫 >精神病性 >恐怖 >敌对 >其它 >偏执。结论　秦巴山区初中学生心理健康状况良好。影响秦巴山区初中学生心理健康的最主要因素为 :抑郁、躯体化和焦虑。     

胰腺导管腺癌和慢性胰腺炎中18q21杂合性缺失及相关性分析

目的 探讨18q21在人胰腺导管腺癌和慢性胰腺炎中杂合性缺失(LOH)的情况及其相关因素.方法 选择18q21上的位点RP11-729G3和RP11-850A17作为目的 片段,选择接近18号染色体着丝粒的位点RP11-621L6作为参照位点,利用细菌人工染色体(BAC)提取、纯化相应位点的DNA,用切口平移法分别标记生物素和地高辛后制成双色探针,应用荧光原位杂交技术(FISH)检测30例胰腺导管腺癌和10例慢性胰腺炎石蜡包埋组织切片中18q21 LOH情况,并收集、整理相应临床病理资料进行相关性分析.结果 30例胰腺导管腺癌中在RP11-729G3位点有25例(83.3%)有LOH,在RP11-850A17位点26例(86.6%)有LOH,其中25例在RP11-729G3和fuP11-850A17两个位点均有LOH,1例仅在RP11-850A17位点有LOH.10例慢性胰腺炎中均未发现18q21 LOH.经统计学分析发现,18q21 LOH在慢性胰腺炎和胰腺导管腺癌中差异有统计学意义(P<0.01),且RP11-729G3和RP11-850A17两个位点LOH有高度相关性(Phj系数=0.877),但和临床病理各因素间未发现明显相关.结论 18q21 LOH在胰腺导管腺癌中属于高频事件,并且位点RP11-729G3和RP11-850A17的LOH有高度相关性,可能在胰腺导管腺癌发生发展中起重要作用.在临床诊断中18q21LOH也能作为较特异的标记辅助诊断.     

机械通气气管插管吸痰方法探讨

目的探讨不同的吸痰方法,从而有效地清除气管插管患者的呼吸道分泌物。方法对47例气管插管病人均采用常规法和呛咳法两种方法吸痰,呛咳法要求:吸痰管带负压进入气管插管,随吸痰管插入深度调节负压,适时安全吸痰,适度气道湿化。常规法按临床一般方法进行吸痰。将两种方法吸出的痰量,痰液性状及吸痰前后20min血氧饱和度(SpO2)进行比较。结果两种方法在吸出的痰量,痰液性状和SpO2方面存在着显著差异(P<0.05,P<0.01),呛咳法吸出的痰多且粘稠。吸痰后SpO2明显高于吸痰前和常规法。结论呛咳法吸痰能充分吸出气道深部的痰液,可以有效防止气道阻塞,改善通气功能。     

Cx43在造血调控及重建中的作用

目的:采用条件性基因敲除技术构建造血系统间隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除(Cx43~(-/-))小鼠模型,并探讨Cx43在维持造血细胞自我更新及功能稳定中的作用。方法:将引进的2对转基因小鼠Cx43 loxP/loxP和Lyz-Cre/+杂交,选取F1雌性子代Cx43 loxP/-_Lyz-Cre/+与雄性Cx43 loxP/loxP合笼回配,提取所获得子代小鼠鼠尾组织基因组DNA,采用PCR方法鉴定小鼠基因型,RT-PCR方法筛选Cx43~(-/-)小鼠,同时分析小鼠不同器官中Cx43基因的表达差异;该类小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU;125 mg/kg)处理,在化疗前及化疗后第5、10和15天经眼球取血分析其血象变化。Cx43~(-/-)及Cx43~(+/+)小鼠予7.5 Gy(~(60)Co-γ)的致死量照射,剂量率1 Gy/min,照射后6 h分别给予事先准备就序的骨髓细胞,每只3×10~6细胞于尾静脉注入,2周后处死小鼠检测造血是否重建:分离股骨切片后,收集骨髓细胞进行细胞表型分析(选用的单抗为CD45R、Gr-1、CD4、 CD8a、TCRαβ、Mac-1、抗sIgM、TER119、Sca-1及CD117);同时进行体外造血细胞集落实验观察造血细胞的体外增殖能力。结果:本研究通过2种转基因小鼠间杂交和回交,成功获得造血系统选择性Cx43基因敲除小鼠;该类小鼠骨髓及外周血细胞无Cx43表达,参与造血的组织,如肝脏和脾脏中Cx43表达也显著下调(P0.01),而心脏和肾脏的Cx43表达则无影响,小鼠成年后外周血象分析并无明显异常,但应急代偿能力下降,经5-FU处理后,其造血功能恢复显著减缓,处理15 d后,Cx43~(+/+)小鼠造血功能已接近正常水平,而Cx43~(-/-)小鼠仍无明显的恢复迹象,血红蛋白、白细胞及血小板仍处低位,2者差别有统计学显著性(P0.01);体外集落试验也证实Cx43~(-/-)小鼠造血干/祖细胞的增殖能力下降,其CFU-GM或CFU-E集落数均明显少于Cx43~(+/+)小鼠(P0.01),但流式细胞术结果显示,Cx43~(-/-)小鼠骨髓中Lin~-/c-Kit~+/Sca-1~+细胞亚群数量与Cx43~(+/+)小鼠相比差异并无统计学显著性;Cx43~(-/-)小鼠在化疗或移植后其骨髓造血功能重建均延迟,且化疗15 d后骨髓切片及涂片均证实其骨髓中造血细胞增生程度明显降低,脂肪组织显著增多,而且T、B细胞发育也有异常。此外,其外周血中CD4~+CD8~+细胞比例比野生型小鼠增多(P0.05),但CD4~+T细胞显著减少(P0.01),尤其是TCRαβ亚群细胞减少最为明显(P0.01)。同样,Cx43~(-/-)小鼠外周血中CD45R~+sIgM~-细胞亚群比例与野生型小鼠相比显著减少(P0.01)。结论:骨髓中Cx43基因表达在造血干/祖细胞发育(尤其是应急状态时)具重要作用,敲除Cx43基因后造血干/祖细胞增殖减缓,造血及免疫重建功能受损。     

应用IRS-PCR对金黄色葡萄球菌分型的研究

目的探讨低频限制性位点聚合酶链反应(infrequent-restriction-site PCR，IRS-PCR)在金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)基因分型中的应用价值。方法建立本实验室IRS-PCR方法。同时用IRS-PCR和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对金葡菌进行基因分型。根据49株社区感染分离菌的分型结果计算辨别力指数(ID)值估计分辨力。对其中30株社区感染菌重复实验一次估计重复性。比较两种基因分型方法的分型率、分辨力、重复性、结果的一致率及操作特点。结果建立IRS-PCR对金葡菌基因分型的方法。70株金葡菌均可被2种方法分型，分型率100％。IRS-PCR分为38个型，21株院内感染菌分为6个型，49株社区感染菌分为32个型，计算ID值为0．981。PFGE分为40个型，21株院内感染菌分为6个型，49株社区感染菌分为34个型，计算ID值为0．983。两种分型方法的重复性均为100％。对院内感染菌，两种方法分型的一致率为100％；对社区感染菌，两种方法分型的一致率为92％(45／49)。与PFGE相比，IRS-PCR更简单、省时、易于操作、不需特殊昂贵仪器。结论IRS-PCR能对金葡菌简易快速可靠分型，适合检验科对临床标本的快速有效分型，是一种有价值的分子流行病学研究工具。