人参单体皂甙Rh2对前列腺癌细胞株PC-3M细胞移行周期的影响

目的:探讨Rh₂对体外培养的PC-3M细胞移行周期的影响。方法:应用[³H]-TdR掺入法和流式细胞仪测定DNA含量及进行细胞周期的分析。结果:PC-3M细胞的[³H]-TdR掺入量明显少于对照组(P＜0.01);流式细胞仪测定G₁期细胞数百分比明显高于对照组。结论:Rh₂可使PC-3M细胞增殖周期阻滞在G₁期,肿瘤细胞增殖减慢。     

H_2O_2和NO对滑膜成纤维细胞增殖反应的影响

采用~3H-TdR掺入法和MTT比色法研究过氧化氢(H_2O_2)和一氧化氮(NO)对兔滑膜成纤维细胞(SF)增殖反应的影响。结果表明,在使用亚适SF浓度(5×10~7细胞/L)时,~3H-TdR掺入法和MTT比色法检测结果一致。H_2O_22和亚硝基铁氰化钠(NO供体)在低浓度时促进SF增殖反应,而在高浓度时抑制其增殖反应,提示H_2O_2和NO对SF增殖反应具有双向调节作用。     

抗汉坦病毒单克隆抗体F（ab‘）2的制备及其纯度和活性鉴定

利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）３Ｇ１和３Ｄ８Ｆ（ａｂ′）２片段。通过ＷａｔｅｒＤＥＡＥ４０ＨＲ阴离子交换色谱柱纯化后，非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ呈现单一条带，相对分子质量（Ｍｒ）约１０００００。两种Ｆ（ａｂ′）２片段均具有良好的血凝抑制活性、病毒中和活性及对汉坦病毒感染乳鼠的保护作用     

幽门螺杆菌UreB-Omp11融合蛋白的重组疫苗候选株构建和融合蛋白的表达、纯化及免疫学活性

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)UreB-Omp11融合蛋白的重组疫苗候选株,在大肠杆菌中表达UreB-Omp11融合蛋白,并检测其免疫学活性。方法:用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的ureB和omp11基因并用重叠延伸PCR法获得ureB-omp11融合基因,将融合基因ureB-omp11插入原核表达载体pET30a( )、pET28a( )及pMAL-c2X中,筛选出合适的表达系统并进行融合蛋白的表达,采用Western blot对表达产物进行鉴定,并用Amylose亲和层析法纯化融合蛋白,应用SDS-PAGE方法对纯化产物进行分析,纯化的融合蛋白辅以免疫佐剂皮下免疫小鼠,Western blot对免疫小鼠血清进行检测。结果:特异PCR法、酶切鉴定并经测序分析后证实融合基因ureB-omp11克隆入表达载体pET30a( )、pET28a( )与pMAL-c2X中;重组菌TB1(pMAL-ureB-omp11)经诱导获得了高效表达的MBP-UreB-Omp11融合蛋白,该融合蛋白可以被Hp免疫小鼠血清和Hp阳性患者血清中的相应抗体所识别,纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。通过大肠杆菌抗原吸收法纯化免疫小鼠血清后,与纯化的融合蛋白进行杂交,结果显示在Mr134000处出现特异杂交带,融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。结论:成功地构建并筛选出了HpMELHP27融合蛋白UreB-Omp11的重组疫苗候选株TB1(pMAL-ureB-omp11),为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制奠定了基础。     

pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1融合蛋白诱导特应性抗肿瘤免疫应答的研究

目的:构建重组表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,研究人B7.2/MAGE-1基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用.方法:通过RT-PCR扩增B7.2和MAGE-1的cDNA,以pEGFP-C3为载体,构建pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1重组载体,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706,外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的食管癌细胞EC9706的杀伤活性.结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P＜0.05).结论:成功构建了真核共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,人B7.2/MAGE-1基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应.     

实验性抑郁症大鼠缰核和海马BDNF基因表达

目的：研究抑郁症大鼠缰核和海马BDNF基因的表达情况。方法：采用长期未预知应激刺激致大鼠抑郁症模型，运用open-field和forced swinmming test法观察大鼠行为学变化。运用免疫组化法检测缰核和海马BDNT基因的表达。结果：与正常对照组相比，抑郁症模型组大鼠海马和缰核均表现为BDNF阳性细胞数量明显减少。结论：实验性抑郁症大鼠缰核、海马BDNF基因表达水平降低。     

17βE2对切除卵巢兔动脉粥样硬化与血液流变学的作用

目的: 探讨17βE₂对卵巢切除(OVX)兔的AS斑块、血脂代谢及血液流变学的影响。方法: 34只成熟未孕雌兔分为4组:A为NC;B为Sham+CHO;C为OVX+CHO;D为OVX+CHO+17βE₂。喂养12周,喂养前与12周后测定血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB;测定全血粘度、血浆粘度、AIRC及纤维蛋白原。喂养12周后处死,测定AS斑块面积与主动脉总面积百分比。结果: ①AS斑块面积与主动脉总面积之比,A、B、C、D组分别为0.02±0.00、0.42±0.15、0.67±0.23、0.12±0.11,B组小于C组(P＜0.05)、D组明显小于C组(P＜0.01)。②血脂TC、TG、LDL-C、ApoB,B、D组明显小于C组(P＜0.01)。③血液流变学:全血粘度、血浆粘度AIRC与纤维蛋白原D组明显低于C组(P＜0.01)。结论: 17βE₂能抑制脂质斑块沉积,改善血脂代谢,减轻高脂血症,改善血液流变学。这可能是雌激素抑制AS形成的部份机理。     

SH2A 基因对细胞信号转导的影响及其亚细胞定位

目的 研究Src同源域2(src homology 2，SH2)A基因在细胞信号转导中的作用并进行亚细胞定位。方法 通过RT—PCR方法扩增SH2A cDNA编码序列，构建真核重组表达载体pcDNA3．1-SH2A，利用脂质体转染肝癌Bel7402细胞、COS7细胞，检测蛋白酶C(protein kinaseC，PKC)、酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase，TPK)、丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)活性的改变；另构建pEGEP—SH2A，转染同前，荧光显微镜观察荧光定位。结果 测序结果显示真核重组表达载体pcDNA3．1-SH2A及pEGFP—SH2A中均含有SH2AcDNA编码序列；肝癌Bel7402细胞、COS7细胞转染pcDNA3．1-SH2A后，胞浆PKC的活性下降了40％左右，MAPK和TPK活性未见明显改变。荧光显微镜观察发现SH2A基因在细胞质中表达。结论 SH2A基因编码蛋白在PKC信号转导通路中起抑制作用；SH2A基因编码蛋白定位于细胞质。     

抗人CD20单克隆抗体诱导Daudi细胞凋亡的功能研究

目的　观察由基因重组抗原制备的抗人CD2 0单克隆抗体 (CD2 0 McAb) 1- 2 8对B淋巴瘤细胞的促凋亡作用 ,并探讨其作用机理。方法　利用流式细胞术测定所获 1- 2 8单抗对标准CD2 0 FITC单抗的竞争抑制作用及对胞内游离钙的影响 ;通过电镜观察其诱导Daudi细胞凋亡后形态上的改变 ,免疫印迹实验显示Daudi细胞凋亡后功能上的变化。结果　 1- 2 8能明显竞争标准CD2 0 FITC单抗与Daudi细胞表面CD2 0分子的结合。电镜结果证实了 1- 2 8能够促进Daudi细胞发生凋亡的结论 ;实验结果显示Daudi细胞与 1- 2 8作用后胞内游离钙浓度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,细胞内Bcl 2蛋白和caspase酶原的表达量下降 ,而Bax蛋白和caspase酶原降解的活性产物表达增加。结论　 1- 2 8能竞争结合Daudi细胞表面的CD2 0分子并诱导其发生凋亡