线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥诱导BEAS-2B细胞损伤的影响

目的: 探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥(HN2)诱导人支气管上皮细胞系BEAS-2B的影响。方法: BEAS-2B细胞分为正常对照组、Mito-TEMPO对照组、HN2染毒组和Mito-TEMPO干预组,其中正常对照组和Mito-TEMPO对照组分别给予含DMSO(体积分数为0.1%)和Mito-TEMPO(100μmol/L)的无血清培养基处理26 h,HN2染毒组给予含DMSO的无血清培养基预处理2 h,然后给予HN2(8μmol/L)染毒24 h,Mito-TEMPO干预组给予Mito-TEMPO(100μmol/L)预处理2 h,然后HN2(8μmol/L)和Mito-TEMPO(100μmol/L)共处理24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活性,速率法检测细胞培养基上清乳酸脱氢酶(LDH)活性,倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI探针法流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1探针法检测线粒体膜电位,紫外分光光度法检测细胞匀浆ATP含量,MitoSOX、DCFH-DA、DHE探针法分别检测细胞内线粒体ROS、H2O2及总ROS水平,实时荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。结果: 与HN2染毒组相比,Mito-TEMPO干预组细胞活性降低了约42.6%(P<0.05),细胞上清LDH水平显著增加(P<0.05),同时伴有异常形态细胞增多,Mito-TEMPO干预组细胞线粒体ROS水平降低了53.6%(P<0.05),细胞内H2O2水平及总ROS水平分别升高了171%和43.4%(均为P<0.05)。Mito-TEMPO干预对HN2染毒导致的细胞凋亡比例、线粒体膜电位、ATP含量、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平等指标改变均无显著影响(P>0.05)。结论: 100μmol/L的Mito-TEMPO干预在HN2染毒BEAS-2B细胞模型中促进了细胞损伤,其机制可能与提高细胞内H₂O₂水平及总ROS水平有关。     

Inhibition of autocrine IGF-II on effect of human HepG2 cell proliferation and angiogenesis factor expression

Abnormal expression of insulin-like growth factor II (IGF-II) is associated with the hepatocyte malignant transformation and hepatocellular carcinoma (HCC) progress. In this study, specific IGF-II miRNA plasmids were constructed and transfected to HepG2 cells to knockdown IGF-II expression for observing effects on the cell proliferation, survival, apoptosis, angiogenesis, and anchorage-independent colony formation. IGF-II mRNA was evaluated by quantitative real-time polymerase chain reaction, and the level of IGF-II or vascular endothelial growth factor (VEGF) was quantitatively analyzed by ELISA. Our data shown that downregulation of IGF-II expression resulted in the viability alteration, proliferation inhibition, and apoptosis occurrence of HepG2 cells. The level of VEGF expression in the supernatant of HepG2 cells in the IGF-II-miRNA-transfected group was significantly decreasing (P?<?0.01) than those in the untransfected group or the miRNA-neg-transfected group, with the susceptibility to anoikis and decreasing of anchorage-independent colony formation of HepG2 cells. Thus, we conclude that IGF-II is a potential molecular target for HCC gene therapy.     

miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调（P<0.001）。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。     

益气活血法在缺血性中风后神经修复中的生物学基础研究进展

中风是全球死亡和残疾的主要原因,开发增强中风后恢复和增强神经修复的方法至关重要。中风后的恢复涉及复杂的相互关联的神经修复系统。神经修复整个过程需要神经元胞体对伤害性刺激作出应答,通过神经干细胞增殖与迁移、轴浆运输信号分子、细胞骨架结构构建以及轴突末端生长锥形成等一系列协调的相互作用,才能实现再生生长。神经功能重塑作为神经功能缺损治疗潜在的新靶点,无论是神经功能重塑的具体机制,还是神经功能缺损临床治疗方案,均具有重要研究意义。脑损伤后,由于其内在修复机制十分复杂,单一的治疗措施时常难以奏效,综合治疗将是提高脑内再修复功能的发展方向。益气活血法具有神经保护、血管再生、神经发生及环路重建等多方面生物效应,可共同促进损伤后的神经功能重塑;其作用机制与细胞自噬、免疫调节及微小RNA调控密切相关,充分体现了益气活血法的多途径、多靶点、整体调节的治疗特点以及对中风后的神经修复发挥重要的治疗作用。因此,进行益气活血法对中风后脑功能康复的研究具有十分重要的理论和指导意义。     

变形链球菌ComE蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的:构建变形链球菌comE基因原核表达载体,诱导ComE 融合蛋白高效表达,获取高质量的ComE 融合蛋白.方法:提取变形链球菌基因组,PCR 扩增得到变形链球菌comE基因片段,BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到pET28a(+) 表达载体中,并转化入E. Coli BL21(DE3).IPTG 诱导融合蛋白表达,Western blot 鉴定表达产物.进行蛋白表达的可溶性鉴定,并优化诱导时菌液的A600值、IPTG 浓度、诱导时间和温度4 个表达条件.然后用优化的条件大量诱导表达ComE 融合蛋白,采用镍柱和分子筛两步法进行纯化.结果:经PCR、双酶切反应以及测序鉴定,重组质粒中的插入序列为comE基因的全长片段(753 bp),无碱基的突变与读码框架的偏移.Western blot 证实表达产物确为6×His-ComE 融合蛋白,相对分子质量约为33 000.目的蛋白在上清和沉淀中均有表达,且当A600 为0.4 时,加入IPTG 至终浓度0.10 mmol/L,37 ℃诱导4 h后表达量最大.结论:成功构建pET28a(+)-comE 原核表达载体,用优化后的6×His-ComE 融合蛋白在E. Coli BL21(DE3) 中的表达条件,获得纯化的变形链球菌ComE 融合蛋白.     

心宝丸治疗病态窦房结综合征50例

目的:观察中成药心宝丸治疗病态窦房结综合征的疗效。方法:采用中成药心宝丸治疗病态窦房结综合征50例。结果:总有效率为86%。结论:中成药心宝丸治疗病态窦房结综合征效果明显,副作用小,可以推迟或者免于起搏治疗的使用。     

早期渐进性活动训练促进重症监护病房机械通气患者神经肌肉功能恢复的效果观察

目的探讨早期渐进性活动训练促进重症监护病房(intensive care unit,ICU)机械通气患者神经肌肉功能恢复的效果。方法将98例ICU机械通气患者随机分为实验组和对照组,每组各49例,实验组患者在镇静中断后每天实施两次早期渐进性活动训练;对照组患者每天两次接受床上被动或主动全范围关节活动。采用功能独立性评分表(functional independence measure,FIM)对两组患者分别在拔除气管插管时、转出ICU时和出院时进行评定,并比较两组患者住院期间并发症发生情况。结果实验组患者在拔除气管插管时FIM总分及自理能力、括约肌控制、转移方面得分明显高于对照组,两组比较,均P<0.05,差异具有统计学意义;实验组患者在转出ICU时和出院时在FIM总分及5个方面得分明显高于对照组,两组比较,均P<0.05,差异具有统计学意义。实验组患者呼吸机相关性肺炎(ventilator associated pneumonia,VAP)、下肢深静脉栓塞(deep vein thrombosis,DVT)的发生率明显低于对照组,两组比较,均P<0.05,差异具有统计学意义。结论早期渐进性活动训练能促进ICU机械通气患者神经肌肉功能恢复,并可降低相关并发症的发生率。     

Abnormal expression of Annexin A2 and its clinicopathologic characteristics in tissues of hepatocellular carcinoma

目的:分析肝细胞性肝癌(HCC)组织中膜联蛋白A2(ANXA2)的异常表达及其临床病理学特征.方法:以自身配对法分别收集30例HCC患者经手术切除后的癌灶、癌旁和远癌组织,用免疫组化方法检测组织中ANXA2的表达,分析ANXA2表达的临床病理特征.结果:HCC的癌灶组织中ANXA2定位于细胞的胞膜和胞浆;癌旁组织中ANXA2主要定位于胞浆,而远癌组织中未见ANXA2明显表达.癌灶组织中ANXA2表达强度明显高于癌旁(Z=6.113,P＜0.01)和远癌组织(Z=7.328,P＜0.01),并且其表达水平与HBV感染和门静脉癌栓有关,而与患者年龄、性别、肿瘤大小、AFP浓度、肿瘤数目和分化程度间差异无统计学意义.结论:HCC组织中ANXA2过表达与HCC的进展有关,是肝癌诊断的有用分子标志物之一.     

Impact factors and improvement measures of enviroment quality in cleaning operating room

<正>Objective To investigate current surgical site infection and perioperative antibiotics in inpatients and explore the controlling aim and methods. Methods The infection rates of surgical sites of 287 operated cases from May to Dec 31,2007 were studied and compared with the