人骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性的研究

目的研究人骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养条件,并探讨其生物学特性。方法取无恶性血液病的32~65岁的成人骨髓7例,经密度梯度离心得到单个核细胞,加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液,将细胞的密度调整到1×106个/mL,接种到12孔培养板中(1 mL/孔)进行培养,48 h后更换新鲜培养液,以后每3 d换液1次。当细胞铺满培养板底90%以上时,按常规方法进行细胞传代培养。用流式细胞术检测培养细胞的CD29、CD44、CD166、CD105、CD34、CD45、HLA-DR表达情况。并且使用脂肪细胞诱导培养液诱导培养MSCs,油红O染色检测其能否被诱导分化为脂肪细胞。结果成人骨髓接种后24 h内细胞开始聚集成细胞集落,并从集落中长出少许长梭形细胞,6~15 d细胞进入快速增殖期,一般培养20~25 d后细胞汇合成片铺满培养板底;而传代培养的细胞每代约需10~15 d即可铺满瓶底。流式细胞术检测结果显示,此次培养的骨髓来源细胞高表达CD29、CD44、CD166、CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR,符合骨髓MSCs细胞的特性。油红O染色显示MSCs可以被诱导分化为脂肪细胞。结论用密度为1.077 g/mL淋巴细胞分离液作为分离液,密度梯度离心法分离培养的人骨髓MSCs增殖力强,操作简单,是一种较好的分离和培养MSCs的方法。MSCs可以被诱导分化为脂肪细胞。     

一种新的小胶质细胞分离纯化方法

目的 建立一种高效率的原代小胶质细胞体外分离纯化方法.方法 以McCarthy等经典的小胶质细胞原代培养培养方法为基础,并进行改进,使用低浓度胰酶消化法帮助小胶质细胞从混合培养的胶质细胞分离下来,用OX42抗体免疫组化染色鉴定.结果 获得了高纯度的小胶质细胞.结论 低浓度胰酶消化法分离小胶质细胞与经典的振摇分离法所获得的纯度相当,但提高了细胞的分离效率.     

中医辨证论治联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的Meta分析

目的:系统评价中医辨证论治联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床效果以及安全性。方法:计算机检索The Cochrane Library,Pubmed,Embase,中国科技期刊全文数据库(VIP),万方数据库,中国期刊全文数据库(CNKI),中国生物医学文献数据库(CBM)等,检索时间限定为建库至2015年7月5日,检索所有中医辨证论治联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌的随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs),并追索纳入研究的参考文献。由两位评价者独立对纳入研究的质量进行严格评价和资料提取后,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。结果:最终纳入12项RCT,共1 341例患者。Meta分析结果显示:与单纯化疗相比,中医辨证论治联合化疗方案可有效提高临床近期疗效[OR=1.58,95%CI(1.03,2.42),P=0.03],改善患者生存质量[OR=4.38,95%CI(3.17,6.05),P0.000 01]。不良反应方面,中医辨证论治联合化疗方案能减少化疗引起的骨髓抑制:白细胞下降[OR=0.21,95%CI(0.10,0.44),P0.000 1],血红蛋白下降[OR=0.29,95%CI(0.13,0.68),P=0.004],血小板下降[OR=0.26,95%CI(0.10,0.69),P=0.007],减少消化道不良反应[OR=0.23,95%CI(0.09,0.63),P=0.004],但在减少肝功能损害[OR=0.37,95%CI(0.08,1.66),P=0.19],肾功能损害[OR=0.51,95%CI(0.23,1.14),P=0.10]方面两组差异均无统计学意义。结论:中医辨证论治联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌能有效提高临床近期疗效和改善患者生存质量,减少化疗引起的严重骨髓抑制和消化道不良反应,但在减少肝肾功能损害方面和单纯使用化疗方案相比无显著性差异。鉴于本研究纳入RCTs数量和质量有限,中医辨证论治联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效以及安全性仍需要严格的、大样本的随机双盲试验加以验证。     

ndrg2在人胎前脑发育期的表达特点

目的系统分析ndrg2在胎前脑组织中表达分布的时空特点,以期明确ndrg2在胎前脑脑功能区的组织分布、细胞定位及表达趋势,为进一步研究其功能提供实验依据。方法收集引产4￣7月胎脑组织标本,分别进行组织石蜡切片和总RNA提取,应用免疫组化方法和RT-PCR技术检测ndrg2在蛋白质及mRNA表达水平变化规律。结果免疫组化结果表明,在上述胎前脑脑区神经元细胞胞浆中均有ndrg2蛋白不同程度的表达。RT-PCR结果显示,ndrg2mRNA在正常胎脑各脑区均有表达;随脑组织发育成熟,ndrg2表达水平增高,4月胎脑中海马ndrg2表达水平较高,而到7月额叶、顶叶则表达增强。以上结果表明,ndrg2基因在不同脑功能区广泛表达,但不同时期、不同胎脑功能区域表达有明显区别。结论在脑发育的过程中,ndrg2表达呈一定时空特点,ndrg2可能对神经细胞发育成熟有一定影响。     

腹腔镜联合术中经胆囊管胆道镜辅助胆管探查取石术(附546例报告)

目的:总结腹腔镜联合术中胆道镜经胆囊管胆道探查取石术(laparoscopic transcystic common bileduct exploration,LTCBDE)治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床经验。方法:回顾性分析我院2006年12月至2010年12月间546例采用LTCBDE治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床资料和疗效。结果:成功完成LTCBDE 519例。成功率95.1%(519/546),全组平均手术时间(83.2±36.5)min,术后平均住院时间(2.1±2.1)d。全组并发症发生率1.5%(8/546)。结论:LTCBDE应成为治疗继发性胆总管结石的首选方案。     

诱导人骨髓间充质干细胞向运动神经元分化的研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stemcells,hMSCs）在体外诱导向运动神经元分化的潜能。方法用密度梯度离心法分离hMSCs,在含有10%FBS的DMEM/F12培养基中的培养扩增。将传代后的第1代hMSCs分为诱导组和对照组,诱导组的细胞在完全培养基中加入终浓度为10μg/L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）预处理24h后,用0.5μg/mL维甲酸（RA）和200ng/mL音速波状蛋白（shh）联合诱导10d。对照组不加上述诱导剂。光镜下观察其分化过程中hMSCs的形态变化,免疫组化检测诱导前后细胞是否表达神经干细胞特异性标志蛋白,用流式细胞仪检测是否产生运动神经元及在总的细胞数种所占比率,并用流式软件分析结果。结果诱导组hMSCs经诱导后能分化为具有典型神经元形态的细胞,部分细胞表达抗人神经巢蛋白（Nestin）,表达率达到（25.0±4.8）%;流式检测诱导后运动神经元特异性标志蛋白HB9表达,表达率达到（50.0±5.3）%。对照组细胞形态无改变,无Nestin表达,HB9表达小于5%。结论hMSCs在体外条件下能诱导分化为运动神经元样细胞。     

门诊医院感染规范管理

目的规范门诊人员及门诊重点科室的管理,以预防和控制门诊感染。方法根据各环节的工作特点采取有效措施,规范预检分诊,降低人员密度,做好医务人员手、门诊空气和物体表面的消毒管理;定期开展门诊感染知识的培训,加强监测及规章制度的落实,规范门诊感染工作的管理。结果提高了医护人员对控制医院门诊感染重要性的认识,并及时有效地发现门诊感染管理工作的各种问题和薄弱环节,有针对性地进行改进,从而避免医院感染的发生,为患者提供了清洁、安全的就医环境。结论规范门诊感染管理刻不容缓。     

Inhibition of Xanthine Oxidase Activity by Gnaphalium Affine Extract

Objective To evaluate the inhibitory effect of Gnaphalium affine extracts on xanthine oxidase （XO） activity in vitro and to analyze the mechanism of this effect. Methods In this in vitro study, Kinetic measurements were performed in 4 different inhibitor concentrations and 5 different xanthine concentrations （60, 100, 200, 300, 400 μmol/L）. Dixon and Lineweaver-Burk plot analysis were used to determine Ki values and the inhibition mode for the compounds isolated from Gnaphalium affine extract. Results Four potent xanthine oxidase inhibitors were found in 95% ethanolic （v/v） Gnaphalium affine extract. Among them, the flavone Eupatilin exhibited the strongest inhibitory effect on XO with a inhibition constant （Ki） of 0.37μmol/L, lower than the Ki of allopurinol （4.56 mol/L）, a known synthetic XO inhibitor. Apigenin （Ki of 0.56μmol/L, a proportion of 0.0053‰in Gnaphalium affine）, luteolin （Ki of 2.63 μmol/L, 0.0032‰ in Gnaphalium affine） and 5-hydroxy-6,7,3’,4’-tetramethoxyflavone （Ki of 3.15μmol/L, 0.0043‰ in Gnaphalium affine） also contributed to the inhibitory effect of Gnaphalium affine extract on XO activity. Conclusions These results suggest that the use of Gnaphalium affine in the treatment of gout could be attributed to its inhibitory effect on XO. This study provides a rational basis for the traditional use of Gnaphalium affine against gout.     

小剂量雌激素及阿司匹林对促排卵中增殖期子宫内膜的影响

目的 探讨小剂量雌激素(戊酸雌二醇)及阿司匹林对氯米芬诱导排卵中增殖期子宫内膜的影响.方法 将60例不孕症患者按随机数字表法分为四组:自然周期组、氯米芬组(C组)、氯米芬+雌激素组(CE组)、氯米芬+雌激素+阿司匹林组(CEA组),每组各15例.观察四组增殖晚期子宫内膜厚度、子宫内膜类型、子宫动脉血流阻力指数(RI).结果 C组子宫内膜厚度明显比其他三组薄,增殖晚期子宫内膜厚度≥8mm率、A型子宫内膜率也明显低于其他三组(P<0.05);CE组A型子宫内膜率低于自然周期组和CEA组(P<0.05).C组、CE组和CEA组成熟卵泡直径≥15mm的卵泡数量[分别为(1.56±0.64)、(1.52±0.70)、(1.61±0.67)个]高于自然周期组[(1.01±0.25)个](P<0.05).子宫动脉血流砒Cc组(0.93±0.07)和CE组(0.95±0.04)显著大于自然周期组(0.81±0.05)和CEA组(0.83±0.03)(P<0.05).结论 小剂量雌激素能改善氯米芬诱导排卵中子宫内膜的发育,与小剂量阿司匹林合用时,通过增加子宫血流灌注,从而改善子宫内膜的容受状态.     

四君子汤加减治疗慢性萎缩性胃炎的Meta分析

目的:系统评价四君子汤加减治疗慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的临床效果以及安全性。方法:电子计算机检索The Cochrane Library,Pubmed,Embase,中国期刊全文数据库(CNKI),中国生物医学文献数据库(CBM),中国科技期刊全文数据库(VIP)和万方数据库等,检索时间限定为建库至2015年6月14日,检索所有四君子汤加减治疗慢性萎缩性胃炎的随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs),并辅以手工检索相关核心期刊,追索纳入研究的参考文献。由2位评价者根据Cochrane系统评价员手册5.1独立对纳入研究的质量进行严格评价和有效资料提取后,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。结果:最终纳入7项研究,共577例患者。Meta分析结果显示:与对照组的常规西医治疗方案相比,四君子汤加减治疗能有效提高慢性萎缩性胃炎患者临床疗效,总有效率的合并效应量和95%的置信区间为[OR=4.10,95%CI(2.57,6.53),P0.000 01],整体效果检验Z=5.94,两组疗效差异具有统计学意义。不良反应方面,仅有1项研究报道了对照组患者出现口干1例,头晕2例,腹泻1例,未经治疗处理均可自行好转;观察组无不良反应发生,两组不良反应发生率具有显著性差异(P0.05)。结论:基于纳入7项研究的Meta分析结果,四君子汤加减治疗慢性萎缩性胃炎疗效优于常规西医治疗。鉴于纳入研究数量和质量有限,且样本量均较低,四君子汤加减治疗慢性萎缩性胃炎疗效和安全性仍需要今后开展多中心、双盲、大样本量的随机对照试验进一步验证。