瘤内注射pSTbAT-脂质体复合物对裸鼠移植瘤抑制效应的实验研究

目的:构建血管生成抑制因子arresten基 因的真核表达载体,并观察瘤内注射质粒DNA 脂质 体复合物对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:利用 PCR方法,由重组质粒pGEM Arr中扩增出基因;将 该基因定向克隆于真核表达载体中。20只裸鼠皮 下注射HepG 2细胞,成瘤后以成功构建的质粒 DNA 脂质体复合物瘤内注射,治疗后采用免疫组化 方法检测肿瘤血管密度,并利用arresten基因瘤内注 射的方法对抑制肿瘤的效果进行分析。结果:我们 成功构建arresten基因真核表达载体(pSTbAT)。实 验组肿瘤生长速度较对照组慢(实验组平均15.3个 阳性血管/10个视野,对照组平均112.5个阳性血 管/10个视野)。结论:瘤内注射arresten基因质粒 DNA复合物能抑制裸鼠移植瘤的血管生成,并能抑 制移植瘤的生长。     

上皮性卵巢肿瘤组织中端粒酶活性的表达及与临床病理因素相关性研究

目的:探讨端粒酶在卵巢癌发 生和发展中的作用,及端粒酶活性与临 床病理因素的相关性。方法:应用端粒 重复序列扩增技术(TRAP)检测45例卵 巢上皮性肿瘤及9例正常卵巢组织端粒 酶活性。结果:端粒酶阳性检出率在恶 性和交界性卵巢肿瘤组中分别为 83.33%(25/30)和5/7,差异无统计学意 义,P=0.5963;良性上皮性卵巢肿瘤及 正常卵巢上皮组织中未检测到端粒酶活 性,与前两组之间均差异有统计学意义 P<0.01。端粒酶的表达与临床病理因 素无明显相关性。结论:端粒酶在卵巢 癌发生和发展过程中可能具有重要作 用,并有望作为卵巢上皮性癌基因治疗 的靶点。     

经腹膜外通路造设人工肛门术

目的 :探讨直肠癌腹会阴联合切除术后 ,经腹膜外通路人工肛门造设的方法及效果。方法 :回顾性分析 1985年 5月～ 2 0 0 2年 12月间 4 34例直肠癌腹会阴联合切除术后 ,经腹膜外通路 337例 (称腹膜外组 ) ,经腹膜内通路 97例 (称传统组 )分别造设人工肛门的结肠造口术后患者的临床资料 ,对有关数据作统计学处理。结果 :腹膜外组有 2例患者 (0 . 5 % )发现造口狭窄 ,5例患者 (1 4. 8% )发现造口周围炎 ,1例患者 (0 . 3% )发现造口旁疝 ,87例患者获排便感觉 ,并发症发生率为 2 . 1%。腹膜内组造口狭窄 11例 (11. 34% ) ,发现造口周围炎 3例 (5. 5 % )、造口回缩 2例 (2 .16 % )、造口脱垂 4例 (4. 12 % ) ,并发症发生率为 2 9 98% ,患者没有排便感觉。两组并发症发生率及排便感觉上都有明显差异 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。结论 :直肠癌APR术后经腹膜外通路造设人工肛门术 ,较传统手术并发症少 ,手术操作简单 ,便于护理且可获排便感觉。     

羊膜移植联合小梁切除治疗难治性青光眼

目的探讨羊腰移植联合小梁切除治疗难治性青光眼的疗效。方法对24例25眼难治性青光眼进行羊膜移植联合小梁切除术后对眼压、滤泡、前房、视力进行3～7个月观察随访。结果术后3个月93．8％的眼压控制在8～20mmHg、6个月85．8％的眼压控制在8～20mmHg，5例5眼需局部加用降眼压药物。术后3个月23眼形成功能性滤泡，有效率为92％，6个月21眼形成功能性滤泡，有效率为91％，视力均有不同程度的改善，前房稳定。结论羊膜移植能有效防止滤过泡疤痕纤维化，是治疗难治性青光眼的简单、安全、有效方法。     

重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺研究

目的研究表达重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺。方法首先采用摇瓶培养,对培养基配方、pH值、诱导表达时机和诱导剂量进行优化,确定基本发酵参数,然后在30L发酵罐上进行中试规模发酵培养。结果在摇瓶培养时,发现含有甘油和微量元素等成分的改良培养基效果明显优于LB培养基和2×YT培养基,另外,工程茵的最佳pH值为7.0,最佳诱导时机为对数中期,最佳诱导剂浓度为0.4mmoL/L异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖,最佳诱导时间为4h,将摇瓶培养确定的关键参数应用到30L发酵罐中,控制溶氧大于30%,进行3批发酵试验,发现发酵产物的湿菌产量可达58-61.9g/L,目的蛋白质表达量可达28.9%-31.2%以上。结论建立了工程菌M15[pQE-scFv]的中试发酵工艺,为进一步开发打下良好基础。     

液相色谱-质谱测定鸦胆子油脂肪乳注射液在癌症患者体内的血药浓度

目的 建立液相色谱-质谱(LC-MS)法测定癌症患者单剂量滴注鸦胆 子油脂肪乳后体内油酸浓度。方法 用自身对照试验设计,7名癌症患者,第3 天不给药,抽取不同时间点空白血浆样品;第5天,单剂量滴注鸦胆子油脂肪乳 注射液100 mL,滴注开始后,抽取不同时间点血浆样品,60 min滴完,用LC- MS法测定血药浓度。结果 线性范围为2．44-156 mg·L-1;日内、日间变异 系数均<14％;7名癌症患者单剂量滴注鸦胆子油脂肪乳注射液100 mL后,主 要药代动力学参数:tmax=(1．08±0．19)h,Cmax(95．20±29．10)mg·L-1, AUC0-7h=(265．67±59．32)mg·h·L-1,t1／2=(12．14±6．42)h。结论 本法 适用临床测定血浆中油酸浓度。     

中国汉族196人红细胞谷胱甘肽硫转移酶的活性分布

目的采用分光光度法测定人RBC谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)活性,研究196名(男101名,女95名)健康汉族人的GSTs活性分布。方法制备人RBC裂解后,参照Habdous等的方法测定GSTs活性。反应体系如下:0.1 mol.L-1磷酸钠缓冲液(pH 6.5)2.6 mL,RBC裂解液0.1 mL,30 mmol.L-1谷胱甘肽0.1 mL,10 mmol.L-11-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)0.1 mL。结果方法的日内和日间精密度均<10%。RBC GSTs活性呈正偏态分布,196例健康汉族人的平均GSTs活性为(3.89±0.96)U.(gHb)-1。不同年龄组平均GSTs活性无差异,而女性的平均GSTs活性比男性的平均值高,但并不显著。结论确定了可供临床参考的健康汉族人GSTs活性分布范围。     

溶栓素的分离纯化及特性测定

目的研究一种高效分离纯化溶栓素的方法并测定其pI和相对分子质量(Mr)。方法采用阴、阳离子交换色谱等技术分离纯化溶栓素并通过对缓冲体系的pH值、离子强度的调节及对初始供试品pH值的调节来优化纯化过程,以等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF PAGE)和SDS PHGE方法分别测定纯品的pI和Mr。结果溶栓素达到简捷、高效分离纯化的目的,电泳鉴定为一条蛋白质带,并测定溶栓素的pI为4 .5 0、Mr 为35 10 0。结论溶栓素的纯化工艺达到高纯度纯化程度,为进一步研究溶栓素奠定了基础     

高效液相色谱法比较不同工艺制备的黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量

目的建立反相高效液相色谱法测定并比较传统饮片与现代免煎饮片制备的黄连解毒汤中盐酸小檗碱的含量.方法色谱柱Hypersil ODS (4.6×250mm,5μm);保护柱Zorbax ODS(4.6×12.5mm,5μm);流动相MeOH-H2O-三乙胺(50∶50∶4);流速0.8mL/min,UV检测波长346nm.结果盐酸小檗碱在6.25～200μg·mL-1间有良好的线性关系,r=0.9996,日内、日间RSD分别为0.7%、0.9%,传统饮片与免煎饮片配制的汤剂盐酸小檗碱回收率分别为92.0%、90.1%.结论该方法简便可行,结果可靠.     

以组织蛋白酶K为靶点的新药筛选

组织蛋白酶K(cathepsin K)是半胱氨酸蛋白酶家族的成员，它和组织蛋白酶S、L和B有很高的同源性。人类破骨细胞中大量选择性表达组织蛋白酶K，并已证明组织蛋白酶K是参与骨胶原降解的主要酶，在骨代谢中起很大的作用，为此，组织蛋白酶K已成为治疗骨质疏松症的重要分子靶标。近年来对组织蛋白酶K的结构与功能的研究，以及以该酶为靶点的抗骨质疏松新药筛选研究已成为新药研究领域的一个热点。本文就组织蛋白酶K在骨代谢中的作用以及组织蛋白酶K抑制剂筛选模型的研究进展进行综述。