靶向c-Met的shRNA重组质粒的构建及生物活性鉴定

目的设计以人c-Met基因为靶向的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制c-Met mRNA及蛋白表达的效应,筛选RNAi作用最强的shRNA片段。方法设计3对针对c-Met基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA的重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA,通过脂质体介导的方法将其转染到喉癌Hep-2细胞株中。采用RT-PCR及Western-Blot法检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达的变化,判断各shRNA的干扰效应。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western-Blot法检测,转染干扰质粒后,c-Met基因的mRNA水平及蛋白表达水平均下调,以重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-sh RNA2效应最显著。结论成功构建了针对c-Met基因的重组RNAi质粒,为下一步探讨c-Met基因对喉癌Hep-2细胞的生物学行为的作用奠定了基础。     

黄芪颗粒治疗复发性阿弗他溃疡的远期疗效观察

目的:评价黄芪颗粒治疗复发性阿弗他溃疡的远期疗效和安全性.方法:将80例复发性阿弗他溃疡患者随机分为治疗组和对照组,每组各40例.治疗组在常规药物消炎止痛治疗的基础上再给予口服黄芪颗粒3个月;对照组仅给予常规药物消炎止痛治疗.治疗组在口服黄芪颗粒3个月后与对照组一同进行为期6个月的疗效跟踪评定.结果:治疗组6个月内的溃疡复发次数、溃疡总数、溃疡平均愈合天数分别为(6.71±2.58)次、(10.09±2.92)个、(4.94±1.63)d,均优于对照组[(13.53±5.77)次、(27.97±8.14)个、(12.35±4.28 d)],差异有统计学意义(P<0.05).未发现治疗组有任何毒副作用.结论:黄芪颗粒治疗复发性阿弗他溃疡具有远期疗效肯定、使用方便、安全性高等优点,值得在临床上推广应用.     

ErbB2 mRNA表达和细胞凋亡在柔红霉素致大鼠心肌病中的作用

目的研究柔红霉素对心肌细胞的损伤及致心肌病的机制。方法建立柔红霉素致大鼠心肌病的模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌组织ErbB mRNA表达。光学显微镜下观察心肌病理改变,采用TdT介导的脱氧核苷酸缺口末端标记技术(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,超声检查心脏射血功能,检测大鼠心肌组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果与对照组比较,柔红霉素损害的大鼠心脏组织ErbB2 mRNA表达下降(P＜0．05),凋亡指数增加(P＜0．01),病理积分升高(P＜0．05),左室射血分数下降(P＜0．05),ROS、MDA产生增加(P＜0．05),SOD、GSH- PX活性减低(P＜0．05)。结论Neuregulin-ErbB信号传导削弱所致的凋亡和脂质过氧化损伤参与柔红霉素心肌病的发生。     

具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架的制备

目的制备具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架材料,为构建组织工程血管奠定基础。方法用含有脱氧胆酸钠、SDS、EDTA的低渗液和等渗液以及核酸酶对猪的胸主动脉进行脱细胞处理．使用HE、Movat五色法、DAPI染色及电镜观察处理结果。以MTT法分析脱细胞溶液的细胞毒性,通过种植内皮和平滑肌细胞,分析支架的细胞相容性。结果上述方法使用的脱细胞溶液细胞毒性低;经该法处理后,血管的细胞成分完全去除,胶原纤维、弹性纤维、糖蛋白等主要基质成分充分保留,组织结构完整,内皮细胞和平滑肌细胞可以在上面黏附生长,形成完整的细胞层。结论利用脱氧胆酸钠、SDS、EDTA和核酸酶联合消化的方法．可制备出基质成分充分保留、细胞相容性优良的脱细胞血管支架．适于构建组织工程血管。     

E-选择素A561C多态性与慢性乙型肝炎和HBV DNA载量的相关分析

目的 研究中国河北地区汉族人群E-选择素A561C基因多态性与慢性乙型肝炎的相关性,以及对乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量水平的影响。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术,检测91例慢性乙型肝炎患者和85名健康对照者的E-选择素基因多态性,用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测血清HBV定量。结果 中国河北地区汉族人群中E-选择素A561C多态性存在AA、AC和CC3种基因型,E-选择素A561C多态性在慢性乙型肝炎组和对照组间的分布差异有显著性（P〈0．05）。AC＋CC基因型患慢性乙型肝炎的风险是AA基因型的2．89倍,C等位基因在两组出现的频率差异也存在显著性（P〈0．05）,AC＋CC基因型患者HBVDNA载量水平高于AA基因型患者（P〈0．05）,其血清可溶性E-选择素水平显著高于AA型（P〈0．01）,采用logistic回归分析发现,AC＋CC基因型与HBVDNA、E-选择素水平相关。结论 中国河北地区汉族人群中存在E-选择素A561C位点单核苷酸多态性,其基因多态性与慢性乙型肝炎的感染具有相关性,C等位基因可能是中国北方地区慢性乙型肝炎发病的易感因素之一,该位点多态性可影响HBV的复制。     

超声检查对胃癌的诊断价值

目的探讨超声对胃癌诊断的价值。方法选择21例超声诊断胃癌经胃镜、手术及病理证实的患者,先经腹扫查胃区及周围组织,然后饮造影剂,逐段扫查贲门、胃底、胃体、胃窦部必要时扫查邻近器官和周围淋巴结,观察胃壁是否平滑、胃壁厚度、层次是否清晰及蠕动情况。结果超声显像诊断超声显像诊断胃窦占位病变l0例,胃体占位病变6例,胃壁增厚原因待查3例,大部份胃内弥漫占位2例,后腹膜淋巴结肿大5例。结论超声检查可以作为胃癌辅助检查手段。     

解毒疏络法预防放射性肺损伤的临床研究

目的观察解毒疏络法预防放射性肺损伤的临床疗效。方法设立单纯放疗组(对照组)62例,放疗加解毒疏络法组(治疗组)64例。以肿瘤客观疗效、放射性肺损伤的评定及分级、毒副反应情况、生活质量状况为指标进行临床疗效观察。结果治疗组肿瘤客观疗效、放射性肺损伤的发生、毒副反应情况、生活质量状况均优于对照组(P<0.05)。结论解毒疏络法有一定的预防放射性肺损伤的作用,且可改善肿瘤客观疗效,提高患者生活质量,减轻放疗毒副作用。     

益气生骨颗粒剂的提取工艺研究

目的确定益气生骨颗粒剂的最佳提取工艺。方法采用正交实验方法,以黄芪甲苷含量为检测指标,以水提醇沉为提取制备方法,考察各因素的影响。结果最佳工艺如下:加入的水量为10倍,提取次数为3次,提取时间为1h。合并滤液,浓缩至浓度为1.1g/ml,加乙醇使含醇量为60%沉淀,静置18h。结论该法提取效率高,稳定性好。     

cDNA芯片检测耐药急淋患者细胞凋亡调控相关基因的差异表达

目的通过观察耐药／非耐药急性淋巴细胞性白血病（急淋）患者细胞凋亡调控相关基因的差异表达,探索多药耐药的分子病理机制。方法用TRIzol抽提外周血标本总RNA,逆转录生成cDNA并标记后,与含有4096个人类已知基因的cDNA表达谱芯片杂交,检测细胞凋亡调控相关基因在两者间的差异表达。结果耐药组与非耐药组有150个基因表达显著差异,包括耐药组83个基因低表达,67个基因高表达,其中凋亡调控相关基因有6个低表达,8个高表达。结论细胞凋亡调控相关基因表达异常可能是白血病多药耐药的分子病理机制之一。     

兔眼角膜基质内注射两性霉素B的安全性评价

目的 探讨兔眼角膜基质内注射两性霉素B的安全性,寻找角膜基质内注射两性霉素B的安全浓度.方法 健康家兔20只(40眼)按随机数字表法分为5组(每组8眼).A组:角膜基质内注射0.1 ml平衡盐溶液(BSS);B、C、D、E组角膜基质内分别注射0.1 ml浓度为5、10、15、20 μg/0.1 ml的两性霉素B注射液,每4天注射1次,共注射5次.观察角膜透明性、上皮完整性、角膜新生血管生长情况,测鼍角膜厚度,第5次注射后30 d处死动物,行角膜病理组织学检查、内皮细胞活性率测定及角膜内皮超微结构观察.结果 兔角膜基质内注射浓度为5、10μg/0.1 ml的两性霉素B注射液后不影响兔角膜正常生理功能,角膜透明、上皮完整,角膜内皮细胞无异常,与BSS组比较,未见明显差异(P>0.05).15、20 μg/0.1 ml浓度组,角膜出现明显水肿,角膜上皮脱落,严重的角膜新生血管长入,与BSS组比较,差异显著(P<0.05).结论 角膜基质内注射药物可能是一种可选择的、简单易行的给药途经.两性霉素B的药物浓度在5μg/0.1 ml、用量在0.1 ml范围内是安全的;两性霉素B的药物浓度在10 μg/0.1 ml、用量0.1 ml可能安全.角膜基质内注射安全浓度的两性霉素B可能是治疗顽同真菌性角膜溃疡的一种较好选择.