骨替代材料纳米生物陶瓷粉体的制备技术

目的:纳米材料由于其尺寸效应,可以改善材料的力学性能,实验在对纳米生物陶瓷粉体制备技术研究基础上,探索活性和惰性骨替代纳米生物陶瓷粉体的制备方法,为纳米生物材料的临床应用奠定基础。方法:分别采用化学反应法和醇-水溶液加热法制备纳米羟基磷灰石和纳米Al2O3-ZrO2复合粉体,同时结合X射线衍射、透射电镜等分析测试手段对获得的纳米粉体进行了成分和微观形态分析。结果:①在制备羟基磷灰石粉体的溶液pH值在10.5￣11.0范围内,可制得粒度为30￣80nm的纳米羟基磷灰石粉体。②在制备Al2O3-ZrO2复合粉体的反应物浓度为0.05￣0.15mol/L范围内,可制得纳米粒度为10￣20nm的Al2O3-ZrO2复合粉体。结论:采用化学反应法和醇-水溶液加热法可以制备出活性和惰性纳米生物陶瓷粉体,用作骨替代材料,满足临床医用的需要。     

帕罗西汀联合音乐治疗中重度烧伤患者:抑郁情绪与炎症因子的关系

目的:观察帕罗西汀联合音乐治疗后中重度烧伤患者情绪状况,并分析烧伤患者血清肿瘤坏死因子、白细胞介素6水平的变化及其影响因素。方法:选择2003-04/2005-04在绵阳市中心医院、攀枝花钢铁公司总医院烧伤专科住院的中重度热力烧伤患者84例。①于烧伤后3d内行汉密顿抑郁量表、汉密顿焦虑量表测定(汉密顿抑郁量表>9分,汉密顿焦虑量表>8分为有焦虑抑郁情绪),将患者分为有焦虑抑郁情绪患者和不伴有焦虑抑郁情绪患者。将有焦虑抑郁情绪患者随机分为治疗组28例及抑郁对照组27例,不伴有焦虑抑郁的患者为烧伤对照组29例。②各组患者均采用相似的液体复苏、营养支持、抗感染及手术治疗。治疗组在此基础上,于第4天合用帕罗西汀及音乐治疗。帕罗西汀用量20～40mg/d,共治疗30d。音乐治疗用感应性音乐聆听,1h/d,15d为1个疗程,连续听2个疗程。③比较3组患者治疗前后汉密顿抑郁量表、汉密顿焦虑量表评分。采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子、白细胞介素6水平,并应用逐步回归分析判断影响血清肿瘤坏死因子、白细胞介素6水平的主要因素。结果:治疗组1例,抑郁对照组3例,烧伤对照组2例因经费困难中断治疗。最后纳入分析治疗组27例,抑郁对照组24例,烧伤对照组27例。①治疗后治疗组汉密顿抑郁量表评分低于抑郁对照组(4.74±1.99,14.79±5.28,P<0.05)。各组汉密顿焦虑量表评分比较,差异无显著性(P>0.05)。②治疗后第21天治疗组血清肿瘤坏死因子、白细胞介素6水平低于抑郁对照组。③逐步回归分析选出影响肿瘤坏死因子水平的3个主要因素,即治疗前抑郁分值、治疗后抑郁分值和治疗后白细胞介素6水平;影响白细胞介素6水平的为烧伤后血清肿瘤坏死因子水平。结论:帕罗西汀联合音乐治疗能改善抑郁情绪,同时降低血清肿瘤坏死因子、白细胞介素6水平,改善烧伤后生理功能状态。     

组织工程软骨生物支架材料研究新进展

目的:软骨组织损伤后自身修复能力有限,组织工程学使得关节软骨的生物学替代物即人工软骨显示出美好的前景。软骨生物支架材料为组织工程的重要一环,探讨软骨生物支架材料的研究进展对构建人工软骨具有重大意义。资料来源:应用计算机检索PubMed数据库2003-01/2006-12有关组织工程软骨生物支架材料的文章,检索词“articular,tissue engineering,scaffold”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中文期刊全文数据库2003-01/2006-12期间的相关文章,检索词“软骨、组织工程,支架”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取符合研究要求的有关文章找全文。纳入标准:文章所述的内容应与组织工程软骨生物支架材料研究相关。排除标准:重复或类似的同一研究、Meta分析、综述文献。资料提炼:共收集到185篇相关文章,排除重复或类似的同一研究、综述,30篇符合研究要求。资料综合:人工软骨生物支架材料按其来源可分为:天然生物材料、人工合成高分子材料和复合材料。①天然生物材料生物相容性、细胞黏附性好,亲水性强,但力学强度差、吸收过快,而且难以大批量生产。②人工合成高分子材料具有可控降解速度、力学强度好、易于塑形,但亲水性不够,对细胞的黏附性较弱以及有免疫反应、排斥反应等。③复合材料即将两种或两种以上具有互补特征的生物相容性可降解材料,按一定比例和方式组合,可设计出结构与性能优化的三维材料,以弥补单用人工合成或天然生物材料的缺陷,提高支架的整体性能。复合材料的制备不仅包括同一类生物材料的复合,还包括不同类别生物材料之间的交叉复合。结论:通过对支架材料进行表面修饰、采用新型构建技术以及利用天然和合成材料的各自优势联合应用,进行多材料复合,以研制出具有生物相容性好、力学适应能力强的复合材料、仿生材料、智能材料将是近年来人工软骨生物支架材料的主要研究方向。     

巢式PCR扩增性别决定基因序列检测兔骨髓间充质干细胞移植治疗关节软骨缺损的修复组织来源

目的：明确骨髓间充质干细胞移植到关节软骨损伤处后，该处修复组织的细胞来源，以了解组织修复的过程。方法：实验于2006—01／2007—01在浙江省医学科学院生物工程所完成。①实验材料：3月龄新西兰大白兔，清洁级，体质量约2kg，由浙江省实验动物中心提供。（爹实验方法：利用兔性别决定基因序列设计两对PCR引物。取雄性新西兰大白兔进行骨髓间充质干细胞的分离培养与扩增。取雌性新西兰大白兔，暴露其膝关节软骨，用电钻钻孔造成膝关节软骨内侧直径4．5mm深3．5mm的全层关节软骨缺损，达软骨下骨。一侧植入骨髓间充质干细胞，胶原海绵，另一侧仅植入胶原海绵。⑧实验评估：于术后1，2，3，4，5个月取兔关节软骨缺损修复处组织提取总DNA，进行PCR扩增，鉴定移植物中是否存在性别决定基因，以明确细胞来源。结果：移植后1，2，3，4，5个月移植雄兔骨髓间充质干细胞及胶原海绵的关节修复处组织提取的DNA，用设计的引物通过PCR扩增出一条约200bp大小的条带，大小与阳性对照一致；而另一侧仅移植胶原海绵的关节软骨修复处组织提取的DNA，用设计的引物通过PCR扩增后未发现有条带。PCR扩增阳性样本测序分析显示，每个样本碱基序列一致，与GenBank上性别决定区Y基因组gb｜AY785433．1｜比较，扩增的样本序列与标准序列完全一致，序列同源性达100％。结论：雌兔关节骨髓间充质干细胞，胶原海绵复合物移植处的新生组织中含有雄性组织，提示新生软骨中有移植的雄性骨髓间充质干细胞分化来的软骨细胞。     

体育学院不同专业、不同年级学生心肺功能测试结果比较

目的:观察武术运动对体育院校学生心肺功能的影响,及不同专业、不同年级学生心肺功能的差异。方法:于2004-03/07选择徐州师范大学体育学院科研所的大学生志愿者60名进行心肺功能测试。均为男性,身体健康,自愿接受测试。对照组:非系统参加体育运动的普通院系健康大学生12名。体育教育专业1组:体育教育专业一年级学生12名;体育教育专业2组:体育教育专业四年级学生12名;民族传统专业1组:民族传统专业一年级专修武术套路二级运动员12名。民族传统专业2组:民族传统专业四年级专修武术套路二级运动员12名。测试前测量受试者的身高、体质量,5组受试者的身高、体质量无差异(P>0.05)。运动强度采用改良Bruce方案,每级运动3min,无间隙自动升级,运动中连续心电监护并记录心电图和心率,同时收集受试者呼出的气体,测出吸氧量和肺通气等。根据参数推算出心输出量[Q=2.9 5VO2(L/min)]。结果:60名受试者均进入结果分析。①安静时民族传统专业1组、民族传统专业2组、体育教育专业1组和体育教育专业2组受试者的心率均低于对照组[(72.6±6.3),(77.4±5.1),(72.2±5.9),(82.7±8.6),(90.2±9.1)次/min,P<0.05],最大心输出量均明显高于对照组[(20.5±2.8),(19.5±2.0),(19.9±1.8),(18.5±1.4),(16.8±1.2)L/min,P<0.01]。体育教育专业2组安静时心率明显高于体育教育专业1组,最大心输出量明显低于体育教育专业1组。②体育专业两组的最大吸氧量、最大通气量、运动时间和运动强度均明显高于对照组[最大吸氧量:(3.4±0.2),(3.2±0.3),(2.8±0.8)L/min;最大通气量:(112.8±10.1),(107.3±8.8),(99.1±8.6)L/min;运动时间:(18.1±1.1),(15.3±1.8),(13.7±1.8)min;运动强度:(6.0±0.4),(5.1±0.5),(4.6±0.6),P<0.05]。体育教育专业2组的最大吸氧量、运动时间和运动强度均低于体育教育专业1组(P<0.05);体育教育专业2组运动时间、运动强度均明显低于民族传统专业2组[运动时间:(15.3±1.8),(17.3±1.1)min;运动强度:(5.1±0.5),(5.7±0.6),P<0.05]。结论:随年级的升高,不同体育专业学生的心肺功能有所下降。武术运动能够提高大学生的心肺功能,民族传统专业和体育教育专业学生的心肺功能无明显差别。     

经静脉移植骨髓间质干细胞在脑缺血前后大鼠脏器组织中的分布

目的:骨髓章质干细胞通过局部直接注射或经静脉、动脉移植均可有效趋化到达脑缺血、损伤组织,但目前除了对到达靶部位的干细胞分布有一定了解外,对干细胞在非损伤组织或损伤组织之外的其它部位迁移分布与生存情况的研究较少。观察经静脉移植的大鼠骨髓间质干细胞在脑缺血前后大鼠体内的生存与分布,为干细胞移植研究提供实验基础和可能的理论依据。方法:实验于2006-05/2007-05在福建省神经病学研究所完成。实验材料:选取清洁级健康雄性近交系F344大鼠48只,体质量250～300g,由中国利学院上海实验动物中心提供,按随机数字表法分为3组;正常移植组、脑缺血前移植组、脑缺血后移植组,每组16只。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。实验方法:①体外培养扩增2月龄F344大鼠骨髓间质干细胞,传至第三四代备用。用带增强型绿荧光蛋白基因的慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞。②建立大鼠短暂大脑中动脉闭塞脑局灶缺血模型。取增强型绿荧光蛋白标记的大鼠骨髓间质干细胞,经股静脉移植入大鼠体内。正常移植组:细胞移植前大鼠未经任何处理;脑缺血前移植组:先在正常大鼠静脉移植细胞,24h后行大脑中动脉闭搴术;脑缺血后移植组:大鼠先行大脑中动脉闭塞术,24h后移植细胞。③实验评估:采用改良的神经功能缺损量表测定各组大鼠神经功能情况;取大鼠骨髓制作涂片,同时取脑、心、肺、肝、脾、肾、骨骼肌、小肠组织标本制作冰冻切片,在荧光显微镜下观察增强型绿荧光蛋白阳性细胞在各时间点的分布情况。结果:48只大鼠均进入结果分析。①脑缺血前移植组和脑缺血后移植组大鼠神经功能在移植后12周内均有明显恢复,但脑缺血后移植组恢复较快,术后1,3,12周明显优于脑缺血前移植组(P<0.01,P<0.05)。②在正常移植组和脑缺血前前移植组大鼠肺、骨髓、脾、小肠发现增强型绿荧光蛋白阳性细胞,而在其他组织未发现。在脑缺血后移植组大鼠脑半球缺血区发现大量增强型绿荧光蛋白阳性细胞聚集,在肺中也可见阳性细胞分布,在脑缺血对侧半球及其他组织中未发现。结论:移植前的脑损伤对移植的大鼠骨髓间质干细胞向脑局灶缺血损伤区迁侈,进而促进神经功能修复非常重要,否则,移植于细胞将在骨髓和脾脏较长时间停留且不易再次迁移。     

酶消化法体外分离培养的大鼠嗅鞘细胞形态及表型特征

目的:目前国内外研究介绍的嗅鞘细胞培养方法存在繁杂或重复性差的问题,不利于实际应用。为此实验应用酶消化法体外分离培养大鼠嗅鞘细胞,观察其形态学及表型特征。方法:实验于2005-11/2006-03在上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所完成。①选取新生1周龄雄性SD大鼠1只,浸入体积分数为0.75的乙醇中3min,碘伏消毒。打开前颅,暴露嗅球,完整取下两个嗅球,放入4℃预冷的DMEM抗菌液中清洗2遍,洗掉嗅球表面的血液等杂质,剥下嗅球被膜,将嗅球用眼科剪剪碎,加入质量浓度为2.5g/L的胰酶,在37℃孵育箱磁力搅拌下孵育15min,DMEM终止消化。细胞液过100μm细胞筛,离心去除上清液,用DMEM稀释细胞浓度至1×109L-1,种植于无包被处理的6孔细胞培养板内常规培养。按差速贴壁法在培养18～20h后吸出细胞悬液,重新种植于包被神经生长因子低亲和力受体p75的6孔细胞培养板内。观察细胞生长情况,每2～3d换液1次,培养14d。②将培养不同时间的嗅球成鞘细胞于倒置显微镜、透射电镜下观察其形态变化,并行苏木精-伊红染色。使用免疫组化法检测嗅鞘细胞的特征性标志神经生长因子低亲和力受体p75的表达情况,阳性表达为棕黄色,无着色为阴性。结果:①倒置显微镜形态学观察:差速贴壁培养第2天可见有较多嗅鞘细胞贴壁生长,细胞突起较短,胞体较大,透亮度一般,成团或散在生长,较难辨认细胞的形态。5～6d可见较典型的嗅鞘细胞形状,主要以梭形和多突起细胞为主,细胞立体感强、透亮、杂质细胞较少、本底清楚,亦可见有少量成纤维细胞开始生长。9d时嗅鞘细胞数量明显增加,其生长方向呈较一致的条索状。至14d无论在细胞数量及质量上都呈明显的降低趋势。②苏木精-伊红染色结果:细胞多呈梭形,还可见扁平细胞,核为圆形或椭圆形,有时见双核,胞浆充实无空泡。③透射电镜形态学观察:细胞形态多为双极梭形,少数为3极,核不规则,核膜明显,可见核仁,染色质均匀分布于核中,异染色质可在核膜下形成块状结构,胞体表面有伪足样短突起,胞浆内有丰富的粗面内质网系统及线粒体。胞膜有时可见伪足样突起形成皱褶。④神经生长因子低亲和力受体p75免疫组化检测结果:大鼠嗅鞘细胞神经生长因子低亲和力受体p75免疫反应呈阳性。结论:酶消化法体外分离培养的大鼠嗅鞘细胞表达特征性标志神经生长因子低亲和力受体p75。     

经动脉骨髓干细胞移植结合介入治疗股骨头缺血性坏死

目的:介入治疗有助于增加股骨头缺血性坏死的股骨头血供,干细胞可以促使新生毛细血管形成。实验拟证明经动脉应用骨髓干细胞移植结合常规介入疗法治疗股骨头缺血性坏死的疗效。方法:选择2005-03/2007-05年于新乡新华医院接受治疗的5例股骨头缺血性坏死患者,共8髋,均为男性,年龄(40.1±10.8)岁,5例患者均经临床症状和髋关节影像学检查确诊。所有患者均签署知情同意书,并经医院伦理委员会批准。实验方法:采集患者自体骨髓血制备骨髓干细胞。采用Seldinger穿刺技术,非治疗侧股动脉穿刺成功后,引入Terumo公司5Fcobra导管,通过非治疗侧髂总动脉、腹主动脉至治疗侧髂总动脉,注射非离子造影剂15mL,并电影采集。血管造影,确定股骨头供血动脉和病变程度,导管超选择进入治疗侧旋股内动脉、旋股外动脉及闭孔动脉,再次血管造影证实导管到位后,经导管缓慢灌注尿激酶、丹参、低分子右旋糖酐、罂粟碱等常规介入治疗药物。药物灌注完成后将备用自体骨髓干细胞悬液等量分为3份,缓慢灌注各支血管。双侧病变者,间隔两周行另外一侧治疗。实验评估:治疗完成后1年随访,Harris评分观察股骨头缺血性坏死临床症状改变和髋关节活动度,判定ARCO分期。结果:5例患者8髋均完成1年随访。随访结果显示,患者临床症状明显缓解,髋关节临床症状Harris评分分值显著提高(P<0.05),髋关节活动度无明显改变(P>0.05),ARCO分期进展4髋,稳定4髋,各为50%,5例患者治疗前后未发生严重并发症。结论:经动脉骨髓干细胞移植配合常规介入疗法治疗股骨头缺血性坏死是一种安全有效的方法。但是由于病例样本小和随访时间较短,其长期效果仍然需要进一步观察。     

Clinical assessment of selected vascularization attributes of adnexal masses in preoperative prediction of tumor malignancy

OVERVIEW: Preoperative differential diagnosis of adnexal masses has been a challenge for researchers for years. Prediction of tumor malignancy is essential for selection of optimal treatment with lowest risk for patient. Assessment of various tumor vascularization attributes, using color Doppler semi-quantitative analysis, can be helpful for malignancy differentiation. OBJECTIVES: To assess value of selected vascularization attributes of adnexal masses in preoperative prediction of tumor malignancy. MATERIALS AND METHODS: This study included 521 women diagnosed and treated for adnexal masses (181 malignant and 340 benign) in Obstetrics and Gynecology Hospital of University of Medical Sciences in Poznan between 1994 and 2004. All of them underwent color Doppler examination using Aloka 2000 and 5500 devices (vaginal probes 5,0-6,5 MHz, abdominal probes 3,5-5 MHz) with evaluation of such attributes as: vessels count, localization and structure; semi-quantitative scale was also constructed basing on these parameters. RESULTS: There was a significantly higher number of vessels (cut-off value=4; p < 0.0001), central vessels localization (p < 0.0001) and irregular structure of vessels (p < 0.0001) in patients with confirmed malignant tumor. Constructed semi-quantitative Doppler scale resulted in highest diagnostic accuracy (cut-off value = 3; p < 0.0001). CONCLUSIONS: Central vessels localization was the single most significant attribute in tumor malignancy differentiation. Constructed semi-quantitative Doppler scale resulted in highest diagnostic accuracy and can be a useful tool in preoperative prediction of tumormalignancy.     

人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶3与白细胞介素1β的相关性

目的:观察人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶3与炎症因子白细胞介素1β的关系。方法:实验于2005-05/2006-08在解放军第三○五医院老年病中心实验室完成。人冠状动脉平滑肌实验用5～7代的细胞,按2.5×108L-1密度接种于25cm2的培养瓶中,24h后换液,生长接近80%融合时进行如下处理:①20μg/L质量浓度白细胞介素1β培养0,2,4,8,24,36h后收集上清夜和细胞。②不同质量浓度(0,5,20,40μg/L)白细胞介素1β处理6h后收集上清液和细胞。采用细胞总RNATRIzol试剂提取RNA,在紫外分光光度计确定总RNA的浓度和纯度,并在12g/L的琼脂糖凝胶中电泳,凝胶成像分析RNA的质量。应用实时荧光定量聚合酶链反应的方法检测细胞内基质金属蛋白酶3基因的表达量。结果:①细胞总RNA质量及纯度:每份样品取4μL稀释至400μL测定其A260nm/A280nm吸光度比值均在1.8～2.0之间,说明所提RNA纯度较高;电泳图片上可见RNA清晰的18S和28S的条带,无弥散,说明RNA质量较好。②目的基因的表达量:同剂量白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量在2h时开始发生上调,8h达高峰,而后开始下降;在不同剂量白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量在实验剂量范围内随着白细胞介素1β的剂量加大呈上升趋势(r=0.904,P=0.000),20μg/L和40μg/L白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量差异无显著性(P=0.154),其余各剂量间基质金属蛋白酶3基因的表达量差异均有显著性(P<0.05)。结论:炎症因子白细胞介素1β能促进冠状动脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物基质金属蛋白酶3的表达,可能是炎症在急性冠状动脉综合征发生发展中的作用机制之一。